Like TALEs, a second bacteria-deriv

Like TALEs, a second bacteria-derived system known as CRISPR (clustered regularly inter-
spaced short palindromic repeats) also uses the sequence specificity of DNA to create customizable
genomic anchor points. However, in contrast to TALEs, in which DNA sequences are targeted
with repetitive protein sequences, CRISPR uses guide RNAs for this purpose (95). These guide
RNAs can be similarly customized to recognize almost any DNA sequence (96) and also bind to a
nuclease (Cas9). Thus, this system can be used to cut DNA directly, thereby enabling direct ma-
nipulation of genetic material (97). Additionally, by substituting a modified Cas9 protein without
nuclease activity, this system to be used as an anchor point for epigenetic activators or repressors
(98), as described above with DNMTs or Tet proteins.
One challenge to using these tools in vivo will be to restrict their function to certain genetically
defined cell types, especially in a brain structure that contains a heterogeneous neuronal popula-
tion. Typically, TALE- and CRISPR-based tools are expressed in mammalian cells using DNA
constructs, which often involve the use of viral vectors for more complex systems. Although this approach generally targets cells nonselectively (unless a virus with a specific tropism is used), it
can achieve robust expression in a relatively short time span and can be injected into specific brain
regions for research applications. However, viral tools that incorporate loxP sites can be used in
combination with Cre driver animal lines that express Cre recombinase only in genetically defined
cell types, thereby limiting expression of specific constructs to those cells alone. This approach
has recently been used with success to express discrete optogenetic actuators in distinct neuronal
subtypes (99, 100) to enable precise interrogation of brain circuit function.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชอบนิทาน สองมาแบคทีเรียระบบเรียกว่า CRISPR (คลัสเตอร์อินเตอร์เป็นประจำ-ระยะห่างทำซ้ำ palindromic สั้น) ยัง ใช้ specificity ลำดับของดีเอ็นเอเพื่อสร้างเองจุดยึด genomic อย่างไรก็ตาม ตรงข้ามนิทาน ในดีเอ็นเอที่เป็นเป้าหมายลำดับมีโปรตีนซ้ำลำดับ CRISPR ใช้คู่มือ RNAs สำหรับวัตถุประสงค์นี้ (95) คำแนะนำเหล่านี้RNAs ทำนองเดียวกันตามรู้จักเกือบทุกลำดับดีเอ็นเอ (96) และยัง ผูกกับการnuclease (Cas9) ดังนั้น สามารถใช้ระบบนี้ในการตัดดีเอ็นเอโดยตรง เพื่อเปิดใช้งานโดยตรงมา-nipulation วัสดุทางพันธุกรรม (97) นอกจากนี้ โดยแทนโปรตีน modified Cas9 โดยไม่ต้องกิจกรรม nuclease ระบบนี้จะใช้เป็นจุดยึด epigenetic คริปต์หรือ repressors(98), ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ด้วย DNMTs หรือ Tet โปรตีนความท้าทายหนึ่งใช้เครื่องมือเหล่านี้ในสัตว์ทดลองจะจำกัดการทำงานบางแปลงพันธุกรรมชนิดเซลล์ defined โดยเฉพาะอย่างยิ่งในโครงสร้างของสมองที่ประกอบด้วยความแตกต่างกัน neuronal popula-สเตรชัน โดยทั่วไป ตามเรื่อง และ CRISPR เครื่องมือจะแสดงใน mammalian เซลล์โดยใช้ดีเอ็นเอโครงสร้าง ซึ่งมักจะเกี่ยวข้องกับการใช้เวกเตอร์ไวรัสสำหรับระบบที่ซับซ้อน แม้ว่าวิธีการนี้เป้าหมายเซลล์ให้โดยทั่วไป nonselectively (ยกเว้นไวรัสกับการเบนของพืช specific การใช้), มันสามารถใช้นิพจน์ที่แข็งแกร่งในระยะเวลาค่อนข้างสั้น และสามารถฉีดเข้าไปในสมอง specificภูมิภาคสำหรับการใช้งานวิจัย อย่างไรก็ตาม สามารถใช้เครื่องมือไวรัสที่เว็บไซต์ loxP ในร่วมกับ Cre ควบคุมสัตว์บรรทัดเป็น Cre recombinase เฉพาะใน defined แปลงพันธุกรรมชนิดของเซลล์ จำกัดของ specific จึงสร้างให้เซลล์เหล่านั้นเพียงอย่างเดียว วิธีการนี้ล่าสุดใช้ดีแสดงแยกกัน optogenetic หัวขับในหมด neuronalsubtypes (99, 100) ให้สอบปากคำอย่างแม่นยำของสมองวงจรฟังก์ชัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เช่นเดียวกับนิทานซึ่งเป็นระบบที่ได้มาจากเชื้อแบคทีเรียที่สองที่รู้จักกันเป็น CRISPR
(คลัสเตอร์อย่างสม่ำเสมอระหว่างเว้นระยะสั้นpalindromic ซ้ำ) ยังใช้ลำดับ speci
เมืองสายของดีเอ็นเอในการสร้างปรับแต่งจุดยึดจีโนม แต่ในทางตรงกันข้ามกับนิทานซึ่งในลำดับดีเอ็นเอมีการกำหนดเป้าหมายที่มีลำดับโปรตีนซ้ำ CRISPR ใช้ RNAs คู่มือเพื่อการนี้ (95)
คู่มือเหล่านี้
RNAs สามารถปรับแต่งได้ในทำนองเดียวกันจะรับรู้เกือบลำดับดีเอ็นเอใด ๆ (96) และยังผูกเข้ากับ
Nuclease (Cas9) ดังนั้นระบบนี้สามารถใช้ในการตัดดีเอ็นเอโดยตรงจึงทำให้ ma- โดยตรง
nipulation ของสารพันธุกรรม (97) นอกจากนี้โดยทำหน้าที่แทนสาย Modi เอ็ดโปรตีน Cas9
โดยไม่มีกิจกรรมNuclease ระบบนี้จะถูกนำมาใช้เป็นจุดยึดสำหรับ activators epigenetic หรือ repressors
(98) ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นด้วย DNMTs หรือโปรตีนเทต.
หนึ่งในความท้าทายที่จะใช้เครื่องมือเหล่านี้ในร่างกายจะได้รับการ จำกัด
ฟังก์ชั่นบางอย่างของพวกเขาเพื่อพันธุกรรมเดอไฟเซลล์ชนิดเน็ดโดยเฉพาะอย่างยิ่งในโครงสร้างสมองที่มีประชากรที่แตกต่างกันของเซลล์ประสาทการ
โดยปกติ TALE- และเครื่องมือที่ใช้ CRISPR
จะแสดงในเซลล์สัตว์โดยใช้ดีเอ็นเอโครงสร้างซึ่งมักจะเกี่ยวข้องกับการใช้พาหะไวรัสสำหรับระบบที่ซับซ้อนมากขึ้น แม้ว่าวิธีการนี้โดยทั่วไปเป้าหมายเซลล์ nonselectively (ยกเว้นไวรัสที่มีไฟค tropism speci ถูกนำมาใช้)
ก็สามารถบรรลุการแสดงออกที่แข็งแกร่งในช่วงเวลาอันสั้นและสามารถฉีดเข้าไปในสมองspeci
สายคภูมิภาคสำหรับการใช้งานการวิจัย แต่เครื่องมือไวรัสที่รวมเว็บไซต์ loxP
สามารถใช้ในการรวมกันกับคนขับCre สายสัตว์ที่แสดง Cre recombinase
เฉพาะในพันธุกรรมนิยามเซลล์ชนิดจึงจำกัด การแสดงออกของโครงสร้างคระบุไว้เพื่อให้เซลล์เหล่านั้นเพียงอย่างเดียว วิธีการนี้ถูกนำมาใช้เมื่อเร็ว ๆ นี้กับความสำเร็จในการแสดงตัวกระตุ้น optogenetic เนื่องในเส้นประสาทที่แตกต่างกันชนิดย่อย(99 100) เพื่อช่วยให้การสอบสวนที่แม่นยำของการทำงานของวงจรสมอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ชอบนิทาน ที่สอง แบคทีเรียได้ระบบที่เรียกว่า crispr ( พัวเป็นประจำระหว่าง
ระยะสั้นพาลินโดรมิคซ้ำ ) ก็ใช้ลำดับของดีเอ็นเอที่จะสร้างเมืองกาจึงปรับแต่ง
สร้างจุดยึด อย่างไรก็ตาม ในทางตรงกันข้ามกับนิทานซึ่งในลำดับดีเอ็นเอเป็นเป้าหมายลำดับซ้ำ
กับโปรตีน crispr ใช้ RNAs คู่มือสำหรับวัตถุประสงค์นี้ ( 95 ) เหล่านี้คู่มือ
RNAs สามารถเดียวกันเองรู้จักเกือบทุกดีเอ็นเอลำดับ ( 96 ) และยังผูกกับ
นิวเคลียส ( cas9 ) ดังนั้นระบบนี้สามารถใช้ในการตัดดีเอ็นเอจึงช่วยให้ตรงมา --
nipulation ของสารพันธุกรรม ( 97 ) นอกจากนี้โดยการแทน Modi จึงเอ็ด cas9 โปรตีนโดยไม่
กิจกรรมนิวเคลียส ซึ่งระบบจะใช้เป็นจุดยึด จุดสำหรับ Epigenetic activators หรือ repressors
( 98 )ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นด้วย dnmts หรือโปรตีน Tet .
1 ความท้าทายที่จะใช้เครื่องมือเหล่านี้ในร่างกายจะถูก จำกัด การทำงานของยีน
de จึงเน็ดบางเซลล์ชนิดโดยเฉพาะอย่างยิ่งในโครงสร้างสมองที่ประกอบด้วยข้อมูลลักษณะประชากร -
tion . โดยทั่วไป , เรื่องเล่า - crispr เครื่องมือพื้นฐานที่แสดงในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมโดยใช้ดีเอ็นเอ
โครงสร้างซึ่งมักจะเกี่ยวข้องกับการใช้พาหะไวรัสสำหรับระบบที่ซับซ้อนมากขึ้น ถึงแม้ว่าวิธีการนี้โดยทั่วไปเป้าหมายเซลล์ nonselectively ( ยกเว้นไวรัส ด้วยกาจึง C กระหมวดใช้ ) ,
สามารถบรรลุการแสดงออกที่แข็งแกร่งในช่วงเวลาอันสั้น และสามารถฉีดเข้าไปในกาจึง C สมอง
ภูมิภาคสำหรับโปรแกรมการวิจัย อย่างไรก็ตาม ไวรัสเครื่องมือที่รวมเว็บไซต์ loxp สามารถใช้
ร่วมกับ CRE ไดรเวอร์สัตว์บรรทัดที่แสดงด้วย recombinase ในพันธุกรรม de จึงเน็ด
เซลล์ประเภท งบจำกัดการแสดงออกของ speci โครงสร้างจึง C ที่เซลล์คนเดียว วิธีการนี้
เพิ่งได้รับใช้กับความสำเร็จที่แสดงออกในลักษณะที่แตกต่างกันโดยสิ้นเชิงโตเจเนติค actuators
ชนิดย่อย ( 99 , 100 ) เพื่อให้สอบสวนที่ชัดเจนของการทำงานวงจรสมอง