located in the southern Brazilian region of Campo Largo-
PR, were surface-sterilized (Petrini, 1986) and aseptically
cut, then transferred to Petri dish plates containing
solid culture media. Several controls confirmed that the
sterilization procedure was effective.
The fungi Cercospora zea-maydis (MMBF 51/08) and
Bipolaris maydis (MMBF 46/08) were kindly provided
by the Biological Institute of São Paulo, taken from the
Micoteca “Mario Barreto Figueiredo”. The Fusarium verticillioides
(CMM-1060) and Colletotrichum graminicola
(CMM-1061) were deposited in the Culture Collection
of Phytopathogenic Fungi “Prof. Maria Menezes”,
with GenBank accession numbers for the 18S rRNA of
KC335155 and KC335154.
Bacterium identification by analyzing the 16S rRNA gene
Extraction of bacterial DNA
Genomic DNA was obtained using the Raeder and
Broda protocol (1985), with the following modifications:
bacteria were grown overnight in 4 mL of DYGS medium
(Rodrigues Neto et al. 1986) and then centrifuged for
2 min at 10.000 g. Then, a 2 mL pellet of extraction buffer
(125 mMol/L Tris–HCl pH 8.0; 2 Mol/L NaCl; 50 mMol/L
EDTA pH 8.0 and 1% SDS pH 7.2) was added, preheated
at 60°C. After drying, the DNA was re-suspended in 50 μL
of ultrapure water.
The integrity was checked by electrophoresis on agarose
gel 0.8% (w/v), stained with GelRedTM (Biotium, USA),
diluted in a sample buffer for 100X, observed in a UV
transluminator (Ultraviolet Benchtop transilluminators)
and photo-documentation application (Program Digidoc
it Quantification). Purity was evaluated by spectrophotometer
(per wavelength) NanoDrop® 2000 (Thermo
Scientific).
ตั้งอยู่ในพื้นที่ภาคใต้ของ Campo Largo บราซิล -
PR , ฆ่าเชื้อที่ผิว ( เป็น เปตรินี , 1986 ) และ aseptically
ตัดแล้วโอนไปยังจานแก้วจานที่มี
สื่อวัฒนธรรมแข็ง การควบคุมหลาย ยืนยันว่าขั้นตอนการฆ่าเชื้อได้อย่างมีประสิทธิภาพ
.
เชื้อราโรคซี maydis ( mmbf 51 / 08 ) และ
bipolaris maydis ( mmbf 46 / 08 ) ได้กรุณาให้
โดยสถาบันทางชีวภาพของรัฐเซาเปาลู ถ่ายจาก
micoteca " มาริโอ barreto ฟิเกรีโด " และ Fusarium verticillioides
( cmm-1060 ) และ Colletotrichum graminicola
( cmm-1061 ) ฝากเงินในวัฒนธรรมของ phytopathogenic เชื้อราคอลเลกชัน
" ดร. มาเรีย menezes "
กับขนาดตัวเลขสำหรับการสร้างขึ้นของและพบ kc335155 kc335154
.
ซึ่งกำหนดโดยการวิเคราะห์ 16S rRNA ยีน
การสกัดดีเอ็นเอของแบคทีเรีย
genomic DNA ได้โดยใช้เรเดอร์และ
broda โพรโทคอล ( 1985 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนดังต่อไปนี้ :
แบคทีเรียเติบโตค้างคืน 4 มิลลิลิตร dygs ขนาดกลาง
( Rodrigues Neto et al . 1986 ) และระดับสำหรับ
2 นาทีที่ 10.000 . จากนั้น , 2 ml เม็ดสกัดบัฟเฟอร์
( 125 มิลลิโมล / ลิตรอย่างไรก็ตามพีเอช 8.0 และ HCl 2 mol / L NaCl ; 50 มิลลิโมล / ลิตร
EDTA pH 8.0 และ 1% SDS pH 7.2 ) คือเพิ่มเตาอบ
ที่ 60 องศา หลังจากการอบแห้ง , ดีเอ็นเอจะแขวนลอยอยู่ใน 50 μลิตรของน้ำบริสุทธิ์มาก
.
ความสมบูรณ์ก็ถูกตรวจสอบโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบน (
เจล 0.8 % ( w / v ) ย้อมด้วย gelredtm ( biotium , USA ) ,
เจือจางในตัวอย่างบัฟเฟอร์สำหรับ 100x , สังเกตใน ยูวี
transluminator ( อัลตราไวโอเลต แบบตั้งโต๊ะใช้เอกสารภาพถ่ายและ transilluminators )
( โปรแกรม digidoc
มันปริมาณ )ความบริสุทธิ์ที่ประเมินโดย Spectrophotometer
( ต่อความยาวคลื่น ) nanodrop ® 2000 ( เทอร์โม
ทางวิทยาศาสตร์ )
การแปล กรุณารอสักครู่..
