2.3. Biomass analysisCells were har

2.3. Biomass analysis

Cells were harvested at 3 h intervals over a 24 h period to determine the cellular content of the target products: glycerol, chlorophyll and carotenoids. Based on our previous study, cells harvested by centrifugation at 3000 G would not be damaged and glycerol remained in cell pellets (Xu et al., 2015), therefore, 1 ml of culture samples were taken and centrifuged at 3000 G for 5 min to get the cell pellets. The pellets were then resuspended in 1 ml of distilled water and 200 μl of chloroform and vigorously vortexed to extract the glycerol. The water phase containing glycerol was separated from chloroform by centrifugation at 10,000 G for 10 min and the glycerol concentration in the water phase was determined according to the following procedure (Bondioli and Bella, 2005): A series of glycerol standards with various concentrations were prepared first to generate standard curves. Each working standard and the samples were treated with 1.2 ml of a 10 mM sodium periodate solution and shaken for 30 s. Each solution was then treated with 1.2 ml of a 0.2 M acetylacetone solution, placed in a water bath at 70 °C for 1 min and stirred manually. The solutions were immediately placed in cold water to stop the reaction and the absorbance was measured using a UV/Vis spectrometer at wavelength of 410 nm.

Cellular protein content was determined using the Total protein kit, Micro Lowry, Peterson’s Modification (Sigma-Aldrich Co. LLC.) according to manufacturer’s instructions. Cellular starch content was measured using Total Starch Assay Kit (Megazyme, Ireland) according to the manufacturer’s instructions.

Pigments were extracted from harvested biomass using 80% (v/v) acetone. The absorbance of acetone extract without cell debris was measured at wavelength of 480 nm for total carotenoids. The content of total carotenoids was calculated according to Strickland & Parsons (Strickland and Parsons, 1972):

Total Carotenoids (μg ml−1) = 4.0 × Abs480nm,
where Abs480nm is the absorbance of 80% acetone extract measured at 480 nm.
Chlorophyll a, b and total Chlorophyll were evaluated by measuring the absorbance of the acetone extract at 664 nm and 647 nm and calculated according to Porra et al. ( Porra et al., 1989):

Chl a (μg ml−1) = (12.25 × Abs664nm) – (2.55 × Abs647nm);
Chl b (μg ml−1) = (20.31 × Abs647nm) – (4.91 × Abs664nm),
Total Chl (μg ml−1) = Chl a (μg ml−1) + Chl b (μg ml−1),
where Abs647nm and Abs664nm refer to the absorbance of the 80% acetone extract measured at 664 nm and 647 nm respectively.
A sine wave equation trend-line was fitted to the data for cell size, cell glycerol content and cell starch content using Microsoft Excel 2013 solver to optimise A, f and k by minimising the sum of the square of the differences between the results derived from the experimental data and those calculated from the equations, for the sine wave described by equation:

View the MathML source
Turn MathJax on

where A is the amplitude, f is frequency (day-1), t is time (day), k is a phase shift constant and B is the overall average value.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. ชีวมวลวิเคราะห์เซลล์ถูกเก็บเกี่ยวในช่วงเวลา 3 ชั่วโมงในช่วง 24 ชม.เพื่อตรวจสอบเนื้อหาของผลิตภัณฑ์เป้าหมายโทรศัพท์: กลีเซอรอล คลอโรฟิล และแคโรทีนอยด์ จากการศึกษาของเราก่อนหน้านี้ เซลล์ที่เก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 3000 G จะไม่ชำรุดเสียหาย และกลีเซอรอลอยู่ในเซลล์ขี้ (Xu et al. 2015) ดังนั้น 1 มิลลิลิตรของตัวอย่างวัฒนธรรมถูกนำมา และจากที่ 3000 กรัม 5 นาทีจะได้รับเซลล์เม็ด เม็ดถูกแล้ว resuspended ในน้ำกลั่น 1 ml และ 200 μl คลอโรฟอร์มและ vortexed การแยกกลีเซอรอลแรง ๆ ขั้นน้ำที่ประกอบด้วยกลีเซอรอลถูกแยกออกจากคลอโรฟอร์ม โดยหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 G 10 นาที และกลีเซอรอลความเข้มข้นในน้ำระยะกำหนดตามขั้นตอนต่อไปนี้ (Bondioli และเบลล่า 2005): ชุดของกลีเซอรอลมาตรฐานด้วยความเข้มข้นต่าง ๆ ถูกเตรียมขึ้นก่อนสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน แต่ละมาตรฐานการทำงานและตัวอย่างได้รับการรักษา ด้วย 1.2 ml 10 มม. โซเดียม periodate โซลูชัน และเขย่า 30 s แก้ปัญหาแต่ละแล้วรักษา ด้วย 1.2 ml ของโซลูชัน acetylacetone 0.2 M วางในอ่างน้ำที่ 70 องศาเซลเซียส 1 นาที และกวนด้วยตนเอง การแก้ปัญหาทันทีไว้ในน้ำเย็นเพื่อหยุดปฏิกิริยา และค่าที่ถูกวัดโดยใช้สเปกโตรมิเตอร์แบบ UV/Vis ที่ความยาวคลื่น 410 nmกำหนดปริมาณโปรตีนเซลล์โดยใช้โปรตีนทั้งหมดชุด Micro Lowry ปรับเปลี่ยนของปิเตอร์สัน (Sigma Aldrich บริษัท LLC.) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ปริมาณแป้งโทรศัพท์ถูกวัดโดยใช้ชุดทดสอบแป้งรวม (Megazyme ไอร์แลนด์) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตเม็ดสีถูกสกัดจากชีวมวลเก็บเกี่ยวโดยใช้อะซีโตน 80% (v/v) ค่าของอะซิโตนแยก โดยไม่มีเศษเซลล์โดยวัดที่ความยาวคลื่น 480 nm สำหรับแคโรทีนอยด์ทั้งหมด เนื้อหาของแคโรทีนอยด์รวมคำนวณตาม Strickland & Parsons (Strickland และ Parsons, 1972):รวมแคโรทีนอยด์ (ml−1 μ) = 4.0 × Abs480nmที่ Abs480nm เป็นค่าของสารสกัดจากอะซีโตน 80% ที่วัดที่ 480 nmคลอโรฟิลล์ a, b และคลอโรฟิลล์รวมที่ถูกประเมิน โดยการวัดค่าของสารสกัดจากอะซีโตนที่ 664 nm และ 647 nm และจากการคำนวณตามการ Porra et al. (Porra et al. 1989):Chl (ml−1 μ) = (12.25 × Abs664nm) – (2.55 × Abs647nm);Chl b (μ ml−1) = (20.31 × Abs647nm) - (4.91 × Abs664nm),รวม Chl (μ ml−1) = Chl (ml−1 μ) + b Chl (μ ml−1),วัดที่ Abs647nm และ Abs664nm หมายถึงค่าของอะซีโตนสารสกัด 80% ที่ 664 nm และ 647 nm ตามลำดับคลื่นไซน์สมการแนวโน้มสายแก้ไขติดตั้งข้อมูลสำหรับขนาดเซลล์ เนื้อหาในกลีเซอรอลเซลล์ และเซลล์ปริมาณแป้งที่ใช้ solver excel ของ Microsoft เพื่อให้ A, f และ k โดยลดผลรวมของกำลังสองของความแตกต่างระหว่างผลที่ได้มาจากข้อมูลการทดลองและที่คำนวณได้จากสมการ คลื่นไซน์ที่อธิบาย โดยสมการ :ดูแหล่งข้อมูล MathMLเปิด MathJaxเป็นคลื่น f เป็นความถี่ (1 วัน), t คือ เวลา (วัน), k เป็นค่าคงเฟสกะ และ B คือ ค่าเฉลี่ยโดยรวม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ชีวมวลการวิเคราะห์

เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวในช่วงเวลา 3 ชั่วโมงเป็นระยะเวลากว่า 24 ชั่วโมงในการกำหนดเนื้อหาที่โทรศัพท์มือถือของผลิตภัณฑ์เป้าหมาย: กลีเซอรีนคลอโรฟิลและนอยด์ จากการศึกษาก่อนหน้านี้ของเราเซลล์เก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 3000 G จะไม่ได้รับความเสียหายและกลีเซอรีนยังคงอยู่ในเม็ดเซลล์ (Xu et al., 2015) ดังนั้น 1 มิลลิลิตรของตัวอย่างวัฒนธรรมถูกถ่ายและหมุนเหวี่ยงที่ 3000 G เป็นเวลา 5 นาทีในการ ได้รับเม็ดเซลล์ เม็ดถูก resuspended แล้วใน 1 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นและ 200 ไมโครลิตรคลอโรฟอร์มและแรงหมุนวนเพื่อแยกกลีเซอรอล เฟสน้ำที่มีส่วนผสมของกลีเซอรอลถูกแยกออกจากคลอโรฟอร์มโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 G เป็นเวลา 10 นาทีและความเข้มข้นของกลีเซอรอลในเฟสน้ำถูกกำหนดให้เป็นไปตามขั้นตอนต่อไป (Bondioli และเบลล่า, 2005): ชุดของมาตรฐานกลีเซอรอลที่มีความเข้มข้นต่างๆถูกจัดเตรียม คนแรกที่จะสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน แต่ละมาตรฐานการทำงานและกลุ่มตัวอย่างได้รับการรักษาด้วย 1.2 มล 10 มิลลิสารละลายโซเดียม periodate และเขย่าเป็นเวลา 30 วินาที วิธีการแก้ปัญหาแต่ละคนได้รับการรักษาแล้วด้วย 1.2 มล. ของการแก้ปัญหา 0.2 M acetylacetone วางไว้ในอ่างน้ำที่ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและกวนด้วยตนเอง การแก้ปัญหาที่ถูกวางไว้ในน้ำเย็นเพื่อหยุดปฏิกิริยาและการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดโดยใช้ UV / Vis สเปกโตรมิเตอร์ที่ความยาวคลื่น 410 นาโนเมตร.

ปริมาณโปรตีนเซลลูลาร์ได้รับการพิจารณาโดยใช้ชุดโปรตีนรวม, Micro โลว์รีย์ปีเตอร์สันปรับเปลี่ยน (Sigma-Aldrich Co . LLC.) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ปริมาณแป้งในโทรศัพท์มือถือได้รับการวัดโดยใช้แป้งรวม Assay Kit (Megazyme, ไอร์แลนด์) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต.

รงควัตถุถูกสกัดจากชีวมวลเก็บเกี่ยวโดยใช้ 80% (v / v) อะซีโตน ค่าการดูดกลืนของสารสกัดจากอะซิโตนโดยไม่ต้องเศษเซลล์วัดที่ความยาวคลื่น 480 นาโนเมตรสำหรับ carotenoids ทั้งหมด เนื้อหาของ carotenoids รวมที่คำนวณได้ตาม Strickland & พาร์สันส์ (Strickland และพาร์สันส์ 1972):

รวม Carotenoids (ไมโครกรัม ML-1) = 4.0 × Abs480nm,
. ที่ Abs480nm คือการดูดกลืนแสงของสารสกัดจากอะซิโตน 80% ที่วัดได้ที่ 480 นาโนเมตร
คลอโรฟิล b และคลอโรฟิลทั้งหมดได้รับการประเมินโดยการวัดการดูดกลืนแสงของสารสกัดจากอะซิโตนที่ 664 นาโนเมตรและ 647 นาโนเมตรและคำนวณตาม porra et al, (porra et al, 1989.)

Chl A (ML-1 ไมโครกรัม) = (12.25 × Abs664nm) - (2.55 × Abs647nm);
Chl B (ไมโครกรัม ML-1) = (20.31 × Abs647nm) - (4.91 × Abs664nm) ,
รวม Chl (mL-1 ไมโครกรัม) = Chl A (mL-1 ไมโครกรัม) + Chl B (mL-1 ไมโครกรัม)
ที่ Abs647nm และ Abs664nm หมายถึงการดูดกลืนแสงของสารสกัดจากอะซิโตน 80% ที่วัดได้ที่ 664 นาโนเมตรและ 647 นาโนเมตรตามลำดับ .
ไซน์สมการคลื่นแนวโน้มเส้นก็พอดีกับข้อมูลสำหรับขนาดของเซลล์เนื้อหามือถือกลีเซอรอลและปริมาณแป้งมือถือที่ใช้ Microsoft Excel 2013 แก้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ A, F และ K โดยการลดผลรวมของตารางความแตกต่างระหว่างผลที่ได้รับมา จากข้อมูลการทดลองและผู้ที่คำนวณได้จากสมการสำหรับคลื่นไซน์อธิบายโดยสมการ:

ดูแหล่งที่มา MathML
เปิด MathJax บน

ที่เป็นความกว้าง, F คือความถี่ (วันที่ 1) T คือเวลา (วัน), K นั้น ขั้นตอนการเปลี่ยนอย่างต่อเนื่องและ B เป็นค่าเฉลี่ยโดยรวม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การวิเคราะห์มวลชีวภาพเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวในช่วงเวลา 3 ชั่วโมง ในช่วง 24 ชั่วโมง เพื่อหาปริมาณเซลล์ของผลิตภัณฑ์เป้าหมาย : กลีเซอรอล , คลอโรฟิลล์และแคโรทีนอยด์ . จากการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา เซลล์เก็บเกี่ยวโดยการเหวี่ยงแยกที่ 3 , 000 กรัม จะไม่ได้รับความเสียหายและกลีเซอรอล ยังคงอยู่ในเซลล์เม็ด ( Xu et al . , 2015 ) ดังนั้น 1 มิลลิลิตรของตัวอย่างวัฒนธรรมถูกไฟฟ้าที่ 3000 กรัม เป็นเวลา 5 นาที เพื่อให้ได้เซลล์เม็ด เม็ด แล้ว resuspended ใน 1 มิลลิลิตร น้ำ 200 ลิตร และμคลอโรฟอร์ม และแรง vortexed แยกกลีเซอรอล . น้ำที่ประกอบด้วยกลีเซอรอล ( แยกจากคลอโรฟอร์ม โดยการปั่นเหวี่ยงที่ 10 , 000 กรัมต่อ 10 นาทีและความเข้มข้นของกลีเซอรอลในน้ำ ระยะที่ถูกกำหนดตามขั้นตอนต่อไปนี้ ( bondioli และเบลล่า , 2005 ) : ชุดของมาตรฐานที่มีความเข้มข้นต่างๆ กลีเซอรอลที่เตรียมไว้ให้ก่อนเพื่อสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน แต่ละงานมาตรฐานและจำนวนที่ได้รับ 1.2 มิลลิลิตร สารละลายโซเดียมมากกว่า 10 มิลลิเมตร และเขย่าเป็นเวลา 30 วินาที แต่ละโซลูชั่นก็ถือว่า 1.2 ml ของ 0.2 M เทคนิคการแก้ไขอยู่ในอ่างน้ำที่ 70 องศา C นาน 1 นาที และแบบด้วยตนเอง โซลูชั่นถูกวางไว้ในน้ำเย็นเพื่อหยุดปฏิกิริยาและค่าวัดการใช้ UV / VIS สเปกที่ความยาวคลื่น 410 นาโนเมตรเซลล์โปรตีนที่ถูกกำหนดโดยใช้ชุดโปรตีนรวมไมโครเบส Peterson ของการปรับเปลี่ยน ( ซิกม่า Aldrich Co . LLC ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เซลล์ปริมาณแป้งแป้งชุดการทดสอบการวัดทั้งหมด ( megazyme , ไอร์แลนด์ ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตสารสกัดจากเก็บเกี่ยวผลผลิตชีวมวลใช้ 80 % ( v / v ) อะซิโตน นสารสกัดอะซิโตนโดยเศษเซลล์วัดแสง 480 nm สำหรับแคโรทีนอยด์ทั้งหมด เนื้อหาของแคโรทีนอยด์รวมคํานวณตาม Strickland & พาร์สัน ( Strickland และพาร์สัน , 1972 )แคโรทีนอยด์ทั้งหมด ( μกรัมต่อมิลลิลิตร− 1 ) = 4.0 × abs480nm ,ที่ abs480nm คือการดูดกลืนแสงของ 80% ) จากวัดที่ 480 nm .คลอโรฟิลล์คลอโรฟิลล์ a และ b รวมประเมินโดยการวัดการดูดกลืนแสงของอะซิโตนสกัดที่ 664 nm และคุณ nm และคำนวณตาม Porra et al . ( Porra et al . , 1989 )CHL ( μกรัมต่อมิลลิลิตร− 1 ) = ( 12.25 × abs664nm ) – ( 2.55 × abs647nm )CHL B ( μกรัมมิลลิลิตร− 1 ) = ( 20.31 × abs647nm ) – ( 4.91 × abs664nm )CHL ( μกรัมมิลลิลิตร− 1 ) = CHL ( μกรัมต่อมิลลิลิตร− 1 ) + B ( CHL μกรัมมิลลิลิตร− 1 )และที่ abs647nm abs664nm อ้างถึงค่าของ 80 % ) จากวัดที่ 664 nm และคุณ nm ตามลำดับสมการคลื่นไซน์เส้นแนวโน้มเป็นพอดีกับข้อมูลสำหรับเซลล์ขนาดปริมาณกลีเซอรอลเซลล์และปริมาณแป้งในเซลล์โดยใช้ Microsoft Excel Solver 2013 ปรับเป็น F และ K โดยลดผลรวมของกำลังสองของความแตกต่างระหว่างผลที่ได้จากการทดลองและการคำนวณจากสมการที่อธิบายคลื่นไซน์ โดยสมการ :ดู MathML แหล่งเปิด mathjax บนที่เป็นคลื่น , f คือความถี่ ( วันที่ ) , t คือเวลา ( วัน ) , K คือการเลื่อนเฟสคงที่และ B มีค่าเฉลี่ยโดยรวม