RESULTS AND DISCUSSIONIsolation and

RESULTS AND DISCUSSION
Isolation and Identification of DAQH (1) and DAQJ (2).
Screening of our actinomycete secondary metabolite library
against M. tuberculosis in the microplate Alamar Blue assay
(MABA) and low-oxygen-recovery assay (LORA) led to the
selection of Lake Michigan-derived strain B026 for further
chemical investigation. A 28 L fermentation of B026 was
performed, and following the extraction of secondary
metabolites from the fermentation broth and several chromatographic
steps using bioassay-guided fractionation, 0.3 mg each
of 1 and 2 was purified using RP-C18 semipreparative HPLC
(2.4 mL min−1, gradient of 50% aqueous ACN to 100% ACN
for 25 min, followed by an isocratic flow of 100% ACN for 15
min; tR 18.6 and 22.0 min, respectively).
Detailed structure elucidation analysis for compounds 1 and
2, including full 1H and 13C NMR assignments in addition to
2D NMR data and MS experiments, is located in the
Supporting Information. Combined NMR and high-resolution
IT-TOF mass spectrometry (MS) experiments of 1 established
the molecular formula as C22H26N2O4, whereas the UV
spectrum displayed a characteristic absorption profile of
molecules from the diazaquinomycin class, thus helping to
confirm the fused diaza-anthracene core skeleton. 1H NMR
resonances for aromatic (H3, H6) and aliphatic (H11, H12)
hydrogens and their associated correlations from a heteronuclear
multiple-bond correlation (HMBC) NMR experiment
suggested that each lactam ring contained α-unsaturated, β-
alkylated carbonyl moieties (Table S1). 1H NMR data
suggested there was a clear asymmetry to the ring system,
and further exploration of the HMBC and MS data confirmed
the presence of methyl and isononyl β-substituents on either
lactam ring. The connectivity of each set of hydrogens in the
isononyl group was determined using correlation NMR
spectroscopy (COSY) and a series of one-dimensional selective
total correlation spectroscopy (TOCSY) experiments (Figure
2). Therefore, the structure of 1 is as shown (Figure 1).
Structure elucidation of DAQJ was executed in the same
fashion as DAQH, using a similar series of MS and one- and
two-dimensional NMR experiments to identify the molecule. A
14 Da increase in molecular weight and an extra resonance in
the 1H and 13C spectra suggested an additional methylene was
present in the aliphatic side chain.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลและการสนทนาการแยกและระบุ DAQH (1) และ DAQJ (2)คัดกรองของ actinomycete metabolite รองไลบรารีต่อต้านวัณโรคใน microplate บลู Alamar วิเคราะห์(MABA) และการทดสอบการกู้คืนออกซิเจนต่ำ (LORA) นำไปสู่การตัวเลือกต้องใช้มาทะเลสาบมิชิแกน B026 สำหรับเพิ่มเติมการตรวจสอบสารเคมี มีการหมัก 28 L B026ดำเนินการ และ ต่อรองการสกัดmetabolites จากซุปหมักและหลาย chromatographicขั้นตอนที่ใช้ตัว bioassay แยกส่วน 0.3 มิลลิกรัม1 และ 2 ได้บริสุทธิ์โดยใช้ HPLC semipreparative RP-C18(2.4 mL min−1 ไล่ระดับ 50% ACN อควี 100% ACNสำหรับ 25 นาที ตาม ด้วยกระแส isocratic คิดเป็น 100% ACN 15นาที tR 18.6 และ 22.0 นาที ตามลำดับ)รายละเอียดวิเคราะห์ elucidation สารประกอบ 1 โครงสร้าง และ2 รวมเต็ม 1 H และ 13C NMR กำหนดนอกข้อมูล NMR และ MS 2D ทดลอง อยู่ในสนับสนุนข้อมูล รวม NMR และความละเอียดสูงTOF มันโตรเมทรี (MS) ทดลอง 1 ก่อตั้งขึ้นสูตรโมเลกุลเป็น C22H26N2O4 ในขณะรังสียูวีสเปกตรัมแสดงประวัติลักษณะการดูดซึมของโมเลกุลจากคลาส diazaquinomycin จึง ช่วยยืนยันโครงกระดูกแกนหลอม diaza แอนทราซีน 1H NMRresonances ในหอม (H3, H6) และ aliphatic (H11, H12)hydrogens และความสัมพันธ์ของพวกเขาเกี่ยวข้องจาก heteronuclear เป็นการทดลอง NMR หลายพันธะความสัมพันธ์ (HMBC)แนะนำว่า แต่ละวงแหวน lactam อยู่α-ในระดับที่สม β -alkylated carbonyl moieties (ตาราง S1) ข้อมูล 1H NMRมีการแนะนำถูก asymmetry ล้างระบบแหวนและการสำรวจข้อมูล HMBC และ MS ที่ได้รับการยืนยันเพิ่มเติมของ methyl และ isononyl β-substituents ในlactam แหวน การเชื่อมต่อของแต่ละชุดของ hydrogens ในการกำหนดกลุ่ม isononyl โดยใช้ความสัมพันธ์ของ NMRก (โคซี่) และชุดของ one-dimensional เลือกความสัมพันธ์รวมก (TOCSY) ทดลอง (รูป2) . ดังนั้น โครงสร้างของ 1 เป็นแสดง (รูปที่ 1)Elucidation โครงสร้างของ DAQJ มีดำเนินการเดียวแฟชั่นเป็น DAQH ใช้ MS และหนึ่ง - ชุดคล้ายกัน และการทดลอง NMR ที่สองระบุโมเลกุล A14 ดาเพิ่มน้ำหนักโมเลกุลและการสั่นพ้องเสริมในแรมสเป็คตรา 1H และ 13C แนะนำเมทิลีนไดเพิ่มเติมคือในห่วงโซ่ด้าน aliphatic

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลการอภิปรายและ
การแยกและบัตรประจำตัวของ DAQH (1) และ DAQJ (2).
การคัดเลือกห้องสมุด metabolite รองของเรา actinomycete
กับเชื้อวัณโรคใน microplate Alamar ทดสอบสีฟ้า
(MABA) และการทดสอบต่ำออกซิเจนการกู้คืน (LORA) นำไปสู่การ
การเลือกสายพันธุ์ B026 ทะเลสาบมิชิแกนมาเพิ่มเติมสำหรับ
การตรวจสอบสารเคมี การหมัก 28 ลิตรของ B026 ได้รับการ
ดำเนินการและต่อไปนี้การสกัดรอง
สารจากน้ำหมักและโครมาหลาย
ขั้นตอนโดยใช้แยกชีวภาพแนะนำ, 0.3 มก. แต่ละ
แห่งที่ 1 และ 2 โดยใช้บริสุทธิ์ RP-C18 semipreparative HPLC
(2.4 มิลลิลิตร min- 1, การไล่ระดับสี 50% น้ำ ACN ถึง 100% ACN
สำหรับ 25 นาทีตามด้วยการไหล isocratic 100% ACN เป็นเวลา 15
นาที; TR 18.6 และ 22.0 นาทีตามลำดับ).
การวิเคราะห์การชี้แจงรายละเอียดโครงสร้างของสารประกอบที่ 1 และ
2 รวมทั้งเต็มรูปแบบ 1H และ 13C NMR ได้รับมอบหมายนอกเหนือไปจาก
ของข้อมูลแบบ 2D NMR และการทดลอง MS ตั้งอยู่ใน
ข้อมูลการสนับสนุน รวม NMR และความละเอียดสูง
IT-TOF มวลสาร (MS) การทดลองที่ 1 การจัดตั้ง
สูตรโมเลกุลเป็น C22H26N2O4 ขณะที่รังสียูวี
สเปกตรัมแสดงรายละเอียดลักษณะของการดูดซึม
โมเลกุลจากชั้น diazaquinomycin จึงช่วย
ยืนยันผสมหลัก diaza-แอนทรา โครงกระดูก 1H NMR
resonances สำหรับอะโรมาติก (H3, H6) และ aliphatic (H11, H12)
ไฮโดรเจนและความสัมพันธ์ที่เกี่ยวข้องของพวกเขาจากวิวิธพันธ์
สัมพันธ์หลายพันธบัตร (HMBC) NMR ทดลอง
ชี้ให้เห็นว่าแหวน lactam ละα-ไม่อิ่มตัวβ-
moieties นิล alkylated ( S1 ตาราง) ข้อมูล 1H NMR
แนะนำมีความไม่สมดุลของระบบที่ชัดเจนในการแหวน
และการสำรวจต่อไปของ HMBC และข้อมูล MS ยืนยัน
การปรากฏตัวของเมธิลและ isononyl substituents β-ทั้ง
แหวน lactam การเชื่อมต่อของแต่ละชุดของไฮโดรเจนใน
กลุ่ม isononyl ถูกกำหนดโดยใช้ความสัมพันธ์ NMR
สเปกโทรสโก (โคซี่) และชุดของหนึ่งมิติเลือก
สเปคโทรสัมพันธ์รวม (TOCSY) การทดลอง (รูปที่
2) ดังนั้นโครงสร้างของ 1 จะแสดงเป็น (รูปที่ 1).
การชี้แจงโครงสร้าง DAQJ กำลังดำเนินการในเดียวกัน
แฟชั่น DAQH ใช้ชุดที่คล้ายกันของ MS และหนึ่งและ
สองมิติทดลอง NMR เพื่อระบุโมเลกุล
เพิ่มขึ้น 14 ดาน้ำหนักโมเลกุลและเสียงสะท้อนเสริมใน
สเปกตรัม 1H และ 13C แนะนำเมทิลีนเพิ่มเติมเป็น
อยู่ในห่วงโซ่ด้าน aliphatic

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การอภิปรายผลและการแยกและจำแนก daqh
( 1 ) และ ( 2 ) daqj .
การคัดเลือกแอคติโนมัยซีทมัธยมของเราเพียงห้องสมุด
ต่อต้านวัณโรคในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย Alamar สีฟ้า (
( MABA ) และการทดสอบการกู้คืนออกซิเจนต่ำ ( ลอร่า ) นำไปสู่
เลือกทะเลสาบมิชิแกนได้มาเมื่อย b026 สอบสวนเพิ่มเติม
เคมี . 28 ลิตร หมัก b026 คือ
โดยและต่อไปนี้การสกัดสาร secondary metabolites
จากน้ำหมัก และอีกหลายโครม
ขั้นตอนพบแนวทางการแยก , 0.3 มิลลิกรัมแต่ละ
1 และ 2 คือบริสุทธิ์ใช้ rp-c18 semipreparative HPLC
( 5 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 , ลาด 50% น้ำ ACN 100% ACN
25 นาที ตามด้วยการไหล Isocratic 100% ACN 15
มิน ; TR 18.6 และ 22.0 นาทีตามลำดับ )
การวิเคราะห์สูตรโครงสร้างของสารประกอบ 1
2 รวมทั้ง 13C NMR และเต็ม 1 ได้รับมอบหมายนอกเหนือจาก
การทดลองและ 2D NMR ข้อมูล MS , ตั้งอยู่ใน
สนับสนุนข้อมูล โดยรวมและความละเอียดสูง
it-tof แมสสเปกโตรเมทรี ( MS ) การทดลองที่ 1 ก่อตั้ง
สูตรโมเลกุลเป็น c22h26n2o4 ส่วน UV
สเปกตรัมแสดงรายละเอียดลักษณะของ
การดูดซึมโมเลกุลจาก diazaquinomycin ชั้นจึงช่วย
ยืนยันฟิวส์ diaza แอนทราซีนแกนโครงกระดูก 1H NMR
เฮิรตซ์ให้หอม ( H3 , H6 ) และอะลิฟาติก ( h11 , อายุ 12 )
ไฮโดรเจนและความสัมพันธ์เชื่อมโยงของพวกเขาจาก heteronuclear
หลายพันธะความสัมพันธ์ ( ฤทธิ์ )
การทดลอง NMR พบว่าในแต่ละ lactam แหวนที่มีอยู่แอลฟาบีตา -
alkylated ไม่อิ่มตัวโมเลกุลคาร์บอนิล ( ตาราง S1 )1H NMR ข้อมูล
แนะนำมีความไม่สมดุลชัดเจนระบบแหวน
และการสำรวจเพิ่มเติมของฤทธิ์และ MS ข้อมูลยืนยัน
พระพักตร์และบีตา - หมู่เมทิล isononyl เหมือนกัน
lactam แหวน การเชื่อมต่อของแต่ละชุดของไฮโดรเจนในกลุ่ม isononyl
ใช้วิเคราะห์ความสัมพันธ์ NMR สเปกโทรสโกปี ( อบอุ่น )

ในงานและชุดของีความสัมพันธ์ทั้งหมด ( tocsy ) การทดลอง ( รูป
2 ) ดังนั้น โครงสร้างของ 1 เป็นแสดง ( รูปที่ 1 ) .
หาสูตรโครงสร้างของ daqj ถูกประหารชีวิตในแฟชั่นกัน
เป็น daqh โดยใช้ชุดคล้ายของ MS และ NMR สองมิติ -
การทดลองระบุโมเลกุล a
14 ดาเพิ่มน้ำหนักโมเลกุลและการเรโซแนนซ์พิเศษ
ที่ 1 แนะนำเป็น 4 ช่วง และ 13C เพิ่ม
ปัจจุบันในโซ่ข้างทาง .