The selected isolates were screened

The selected isolates were screened for ACCd activity. Thirty-five mL of King’s B medium (King et al. 1954) was inoculated with0.2 mL of the 48 h starter culture of each isolate. After 24 h the cell
sharvested by centrifugation (3000 × g, 10 min, 7◦C) were washed3 times with 10 mL of DF medium without nitrogen. Then, the cellpellet in each Falcon tube (50 mL) was resuspended in 20 mL of DFmedium supplemented with 3 mM ACC. All of the bacteria weregrown aerobically (150 rev min−1, 5 amplitude) at 26 ± 2◦C for 4days. Growth of isolates was monitored by measure the opticaldensity (OD) of the cultures at 600 nm. Aliquots 5 mL of bacterialcultures were harvested daily and centrifuged under the conditionsmentioned above. Cell pellets washing twice with 3 mL of 0.1 MTris–HCl pH 7.6 were stored at −20◦C. The activity of ACC deami-nase was determined by monitoring the amount of -ketobutyrate(-KB) generated by the enzymatic hydrolysis of ACC, in the celllysates prepared by toluene treatment, as described in detail byPenrose and Glick (2003). The protein concentrations also in thecell extracts was determined using the method of Bradford (1976)with bovine serum albumin as a standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกเลือกคัดสำหรับกิจกรรม ACCd สามสิบห้ามิลลิลิตรของกลางบีคิงส์ (King et al. 1954) เป็น inoculated with0.2 mL ของวัฒนธรรมเริ่มต้น 48 ชั่วโมงของแต่ละ isolate หลังจาก 24 ชั่วโมงเซลล์sharvested โดยการหมุนเหวี่ยง (3000 × g, 10 นาที 7◦C) ได้ washed3 เท่ากับ 10 mL ของ DF กลางไม่มีไนโตรเจน แล้ว cellpellet ในแต่ละหลอดเหยี่ยว (50 มิลลิลิตร) คือ resuspended ใน 20 mL ของเสริม ด้วย 3 มม.ตามมาตรฐาน DFmedium ทั้งหมดของ weregrown แบคทีเรีย aerobically (150 รอบ min−1 แอมพลิจูด 5) ที่ 26 ± 2◦C สำหรับ 4days เจริญเติบโตของแยกถูกตรวจสอบโดยวัด opticaldensity (OD) ของวัฒนธรรมที่ 600 nm Aliquots 5 มล.ของ bacterialcultures ถูกเก็บเกี่ยวทุกวัน และเหวี่ยงภายใต้ conditionsmentioned ข้างต้น เซลล์ขี้ล้างสองครั้งกับ 3 มิลลิลิตร 0.1 MTris – HCl pH 7.6 ถูกเก็บไว้ที่ −20◦C มีกำหนดกิจกรรมของ ACC deami-nase โดยตรวจสอบจำนวน - ketobutyrate (-KB) สร้างขึ้น โดยเอนไซม์ย่อยสลายของ ACC ใน celllysates เตรียมรักษาโทลูอีน ตามที่อธิบายไว้ในรายละเอียด byPenrose และ Glick (2003) ความเข้มข้นของโปรตีนในสารสกัด thecell ที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธีของแบรดฟอร์ด (1976) กับวัว serum albumin เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไอโซเลทที่เลือกถูกคัดกรองสำหรับกิจกรรม ACCd สามสิบห้ามิลลิลิตรของกลาง B ของพระบาทสมเด็จพระเจ้าอยู่หัว (กษัตริย์ et al. 1954) ได้รับเชื้อ with0.2 มลของวัฒนธรรมเริ่มต้น 48 ชั่วโมงของแต่ละแยก หลังจาก 24 ชั่วโมงเซลล์
sharvested โดยการหมุนเหวี่ยง (3000 × G, 10 นาที, 7◦C) เป็นครั้ง washed3 10 มล DF กลางโดยไม่ต้องไนโตรเจน จากนั้น cellpellet ในแต่ละหลอดฟอลคอน (50 มิลลิลิตร) ถูก resuspended ใน 20 มล DFmedium เสริมด้วย 3 mm แม็ก ทั้งหมดของเชื้อแบคทีเรีย weregrown ออกซิเจน (150 REV นาที 1, 5 กว้าง) 26 ±2◦Cสำหรับ 4 วัน การเจริญเติบโตของเชื้อได้รับการตรวจสอบโดยการวัด opticaldensity (OD) ของวัฒนธรรมที่ 600 นาโนเมตร aliquots 5 มล bacterialcultures เก็บเกี่ยวประจำวันและการปั่นภายใต้ conditionsmentioned ดังกล่าวข้างต้น เม็ดมือถือซักสองครั้งกับ 3 มล 0.1 MTris-HCl ค่า pH 7.6 ที่ถูกเก็บไว้ที่-20◦C กิจกรรมของแม็ก deami-nase ถูกกำหนดโดยการตรวจสอบจำนวน -ketobutyrate? (? - KB) ที่เกิดจากการย่อยโปรตีนของแม็กใน celllysates ที่จัดทำโดยการรักษาโทลูอีนที่อธิบายไว้ในรายละเอียดและ byPenrose กลิก (2003) ความเข้มข้นของโปรตีนในสารสกัดจาก thecell ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการของแบรดฟอนี้ (1976) กับอัลบูมิวัวซีรั่มเป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การคัดเลือกสายพันธุ์จากกิจกรรม accd . สามสิบห้ามิลลิลิตร กษัตริย์ B ปานกลาง ( King et al . 1954 ) เป็นเชื้อ with0.2 มิลลิลิตรของ 48 H เริ่มต้นวัฒนธรรมของแต่ละไอโซเลท หลังจาก 24 ชั่วโมง เซลล์sharvested โดยการเหวี่ยงแยก ( 3000 ×กรัมต่อ 10 นาที , 7 ◦ C ) washed3 ครั้งกับ 10 ml ของ DF ขนาดกลางไม่มีไนโตรเจน แล้ว cellpellet เหยี่ยวในแต่ละท่อ ( 50 มล. ) คือ resuspended 20 มิลลิลิตร dfmedium เสริม 3 เดือนบัญชีทั้งหมดของแบคทีเรียเจริญเติบโต aerobically ( 150 ) มิน− 1 , 5 คลื่น ) ที่ 26 ± 2 ◦ C 3nights . การเจริญเติบโตของเชื้อถูกตรวจสอบโดยการวัด opticaldensity ( OD ) ของวัฒนธรรมที่ 600 นาโนเมตร เฉยๆ 5 มิลลิลิตร bacterialcultures เก็บทุกวัน ไฟฟ้า ภายใต้ conditionsmentioned ข้างต้น เซลล์เม็ดซักสองครั้งกับ 3 ml 0.1 mtris –กรดไฮโดรคลอริก pH 7.6 เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 C −◦กิจกรรมของบัญชี deami nase ถูกกำหนดโดยการตรวจสอบยอดเงินของ ketobutyrate ( บางครั้ง ) ที่สร้างขึ้นโดยเอนไซม์ของบัญชีใน celllysates เตรียมโดยโทรักษา ตามที่อธิบายไว้ใน bypenrose Glick ( รายละเอียด 2003 ) โปรตีนสกัดเข้มข้น ใน thecell ถูกกำหนดโดยใช้วิธี Bradford ( 1976 ) กับอัลบูมินเป็นมาตรฐาน