Ryegrass (Lolium spp.) is an outcro

Ryegrass (Lolium spp.) is an outcrossing and genetically
heterogeneous species. Cultivars consist of many genotypes,
with each genotype responding differently in callus formation
and plant regeneration (Takahashi et al. 2004). Occasionally,
a responsive genotype derived from mature seed may lose its
regeneration ability, and the risk of somaclonal variation is
increased by prolonged callus culture. If responsive genotypes
can be maintained in vitro, researchers can produce transgenic
plants at any time with calli induced from shoot tips.
We induced vigorous and friable embryogenic calli from
shoot tips of the forage-type perennial ryegrass cv. Norlea
(Figure 2a) and co-cultivated them with A. tumefaciens har-
boring the binary vector pIG121Hm. Putative transgenic calli
and regenerated plants were screened using a histochemical
assay and PCR analysis. This approach is a minor modifica-
tion of the rice (Oryza sativa L.) transformation method
described by Hiei et al. (1994). In our approach, MS medium
was used instead of N6 medium, because MS medium may be
more successful for callus induction and growth in temperate
grasses (Yoshizawa et al. 1988). In addition, the hygromycin
concentration was increased to enhance the selection of
transformed calli.
Transient GUS assay was carried out with calli after co-
cultivation and distinct blue spots were observed (Figure 2b).
After 6 – 8 weeks, hygromycin-resistant calli of some genotypes
on the callus culture medium containing 100 mg L
–l
hygro-
mycin (Figure 2c) exhibited blue GUS staining ranging from
completely blue (Figure 2d) to partially blue; others showed
a complete absence of blue staining. PCR analysis of the
hygromycin-resistant calli was performed with two primer
sets to amplify a 644 bp gus fragment and a 408 bp hpt frag-
ment. With each primer set, a single fragment was amplified
from calli exhibiting totally blue GUS expression, partially
blue GUS expression, and no blue GUS expression. The sizes
of the amplification products were equivalent to the expected
sizes amplified from pIG121Hm. Most of the calli with no
blue GUS expression had no transgenes, suggesting that
non-transformed calli escaped the hygromycin selection.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Ryegrass (Lolium ออกซิเจน) เป็นที่ outcrossing และพันธุกรรมสายพันธุ์ที่แตกต่างกัน สายพันธุ์ที่ประกอบด้วยของหลายพันธุ์มีจีโนไทป์แต่ละตอบสนองแตกต่างกันในการสร้างแคลลัสและเพาะ (Takahashi et al. 2004) บางครั้งตอบสนองต่อสายพันธุ์มาจากเมล็ดแก่ ๆ อาจสูญเสียความความสามารถในการฟื้นฟู และความเสี่ยงของการเปลี่ยนแปลง somaclonalวัฒนธรรมแคลลัสเป็นเวลานานขึ้น หากตอบสนองการศึกษาจีโนไทป์สามารถรักษาในหลอดทดลอง นักวิจัยสามารถผลิตจำลองพืชตลอดเวลากับเอเรียเกิดจากยิงเคล็ดลับเราเกิดคึกคัก และ friable calli เพาะจากเคล็ดลับการถ่ายภาพของพันธุ์ไม้ยืนต้น ryegrass ชนิดพืชอาหารสัตว์ Norlea(รูปที่ 2a) และร่วมปลูกกับ A. tumefaciens ฮาร์ -น่าเบื่อ pIG121Hm เวกเตอร์ไบนารี เอเรียจำลอง putativeและคัดพืชอาศัยใช้เป็น histochemicalทดสอบและวิเคราะห์ PCR วิธีนี้เป็น modifica เล็กน้อย-ทางการค้าของวิธีการแปลงข้าว (Oryza sativa L.)อธิบายโดยฮิ et al. (1994) วิธี MS ปานกลางใช้แทนปานกลาง N6 เนื่องมาจาก MS ปานกลางประสบความสำเร็จมากสำหรับเหนี่ยวนำแคลลัสและการเติบโตในเมืองหนาวหญ้า (ซิ et al. 1988) นอกจากนี้ hygromycinความเข้มข้นเพิ่มขึ้นเพื่อเพิ่มการเลือกเอเรียรับการเปลี่ยนแปลงทดสอบ GUS ชั่วคราวดำเนินการกับเอเรียหลังจาก co-เพาะปลูกและจุดสีฟ้าที่แตกต่างถูกตั้งข้อสังเกต (รูปที่ 2b)หลังจาก 6-8 สัปดาห์ คัลลี hygromycin ทนของบางพันธุ์บนสื่อวัฒนธรรมแคลลัสที่ประกอบด้วย 100 มก. L– l hygro-กัสสีน้ำเงิน mycin (รูปที่ 2 c) จัดแสดงตั้งแต่ย้อมสีสมบูรณ์สีน้ำเงิน (รูปที่ 2d) ให้สีน้ำเงินบางส่วน คนอื่น ๆ ที่แสดงให้เห็นว่าการขาดงานที่สมบูรณ์ของการย้อมสีน้ำเงิน วิเคราะห์ PCRเอเรีย hygromycin ทนทำกับรองพื้นสองชุดขยายเป็น 644 bp ส่วนกัสและเป็น 408 bp hpt frag -ment แต่ละชุดไพรเมอร์ ส่วนเดียวได้ amplifiedจากเอเรียแสดงนิพจน์กัสสีฟ้าทั้งหมด เป็นบางส่วนนิพจน์กัสสีฟ้า และนิพจน์ไม่กัสสีน้ำเงิน ขนาดผลิตภัณฑ์ของ amplification ได้เทียบเท่ากับที่คาดไว้amplified ขนาดจาก pIG121Hm มากที่สุดของเอเรียไม่มีสีฟ้า GUS นิพจน์ได้ไม่ transgenes บอกว่าเอเรียไม่เปลี่ยนหนีการเลือก hygromycin

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ryegrass (Lolium spp.) เป็น outcrossing และพันธุกรรม
ที่แตกต่างสายพันธุ์ สายพันธุ์ประกอบด้วยยีนหลาย
กับแต่ละจีโนไทป์การตอบสนองที่แตกต่างกันในการสร้างแคลลัส
และการฟื้นฟูโรงงาน (ทากาฮาชิ et al. 2004) เป็นครั้งคราว,
ยีนที่ตอบสนองได้มาจากเมล็ดผู้ใหญ่อาจสูญเสียของ
ความสามารถในการฟื้นฟูและความเสี่ยงของการแปรผันของเซลล์ร่างกายจะ
เพิ่มขึ้นจากวัฒนธรรมแคลลัสเป็นเวลานาน ถ้ายีนที่ตอบสนอง
สามารถรักษาในหลอดทดลองนักวิจัยสามารถผลิตดัดแปรพันธุกรรม
พืชในเวลาใด ๆ กับแคลลัสจากการเหนี่ยวนำเคล็ดลับการถ่ายทำ.
เราเหนี่ยวนำพลังและเปราะแคลลัส embryogenic จาก
ปลายยอดของอาหารสัตว์ชนิดยืนต้น ryegrass CV Norlea
(รูปที่ 2A) และร่วมปลูกฝังพวกเขาด้วย A. tumefaciens กระบวนการทำงาน
ที่น่าเบื่อ pIG121Hm เวกเตอร์ไบนารี แคลลัสดัดแปรพันธุกรรมสมมุติ
และพืชอาศัยถูกคัดกรองโดยใช้ฮีสโตเคมี
การทดสอบและการวิเคราะห์ PCR วิธีการนี้เป็น Fi Modi เล็กน้อย CA-
การข้าว (Oryza sativa L. ) วิธีการเปลี่ยนแปลง
การอธิบายโดย Hiei et al, (1994) ในแนวทางของเรา, สูตร MS ที่
ถูกนำมาใช้แทนของกลาง N6 เพราะสูตร MS ที่อาจจะ
ประสบความสำเร็จมากในการชักนำแคลลัสและการเจริญเติบโตพอสมควร
หญ้า (Yoshizawa et al. 1988) นอกจากนี้ hygromycin
ความเข้มข้นเพิ่มขึ้นเพื่อเพิ่มตัวเลือกของ
แคลลัสเปลี่ยน.
ทดสอบ GUS ชั่วคราวได้ดำเนินการกับแคลลัสหลังจากที่ร่วม
การเพาะปลูกและจุดสีฟ้าที่แตกต่างกันถูกตั้งข้อสังเกต (รูปที่ 2B).
แคลลัส 8 สัปดาห์ hygromycin ทนของ - หลังจากที่ 6 ยีนบางอย่าง
ในอาหารเลี้ยงแคลลัสที่มี 100 มิลลิกรัม L
-l
hygro-
MYCIN (รูป 2C) แสดงการย้อมสีฟ้า GUS ตั้งแต่
สีฟ้าสมบูรณ์ (รูปที่ 2d) สีฟ้าบางส่วน; คนอื่น ๆ ที่แสดงให้เห็นว่า
การขาดสมบูรณ์ของการย้อมสีฟ้า วิเคราะห์ PCR ของ
แคลลัส hygromycin ทนได้ดำเนินการกับไพรเมอร์ทั้งสอง
ชุดจะขยาย 644 bp กัสชิ้นส่วนและ 408 bp HPT frag-
ment กับแต่ละชุดไพรเมอร์ส่วนเดียวเอ็ด ampli Fi
จากแคลลัส exhibiting แสดงออก GUS สีฟ้าทั้งหมดบางส่วน
แสดงออก GUS สีฟ้าและไม่มีการแสดงออก GUS สีฟ้า ขนาด
ของผลิตภัณฑ์ ampli ไอออนบวก Fi ได้เทียบเท่ากับที่คาดหวัง
ขนาด ampli Fi Ed จาก pIG121Hm ส่วนใหญ่ของแคลลัสที่ไม่มี
การแสดงออก GUS สีฟ้าไม่มี transgenes บอกว่า
ไม่ใช่เปลี่ยนแคลลัสหนีการเลือก hygromycin

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ryegrass ( lolium spp . ) เป็นข้ามและพันธุกรรมข้อมูลชนิด ประกอบด้วยหลายพันธุ์ พันธุ์ ,กับการตอบสนองแตกต่างกันในแต่ละ genotype ลัสและฟื้นฟูเซลล์พืช ( ทาคาฮาชิ et al . 2004 ) บางครั้งอ่อนไหวกับที่ได้มาจากเมล็ดของผู้ใหญ่อาจสูญเสียความสามารถในการฟื้นฟู และความเสี่ยงของการแปรผันเป็นเพิ่มขึ้นจากแคลลัสของวัฒนธรรม ถ้าเปรียบเทียบการตอบสนองที่สามารถรักษาได้ในหลอดทดลอง นักวิจัยสามารถผลิตอุตสาหกรรมพืชในเวลาใด ๆ กับแคลลัสที่เกิดจากปลายยอดเราต้องทำให้แข็งแรงและเปราะ เลี้ยงแคลลัสจากปลายยอดของพืชอาหารสัตว์ชนิดยืนต้น ryegrass พันธุ์ norlea( รูปที่ 2A ) และร่วมปลูกกับ A . tumefaciens Har -น่าเบื่อ pig121hm เวกเตอร์เลขฐานสอง ซึ่งการแสดงออกของแคลลัสและ ต้นข้าวมีการใช้เอการทดสอบและการวิเคราะห์ PCR วิธีการนี้เป็นเยาวชนจึง CA - สมัครงานtion ของข้าว ( Oryza sativa L . ) วิธีการแปลงอธิบายโดยไฮ et al . ( 1994 ) ในแนวทางของเรา คุณกลางถูกนำมาใช้แทน n6 ปานกลาง เพราะ MS อาจจะประสบความสําเร็จชักนำและการเจริญเติบโตในเมืองหนาวหญ้า ( โยชิซาว่า et al . 1988 ) นอกจากนี้ ยีนต้านยา hygromycinความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นเพื่อเพิ่มการเลือกของเปลี่ยนสูตร .การทดสอบได้ดำเนินการกับกัสชั่วคราวหลังจาก Co - แคลลัสการปลูกและจุดสีน้ำเงินที่แตกต่างกันที่พบ ( รูปที่ 2B )หลังจาก 6 – 8 สัปดาห์แคลลัสของยีนต้านยา hygromycin ทนบางพันธุ์ในสูตรอาหารที่มี 100 มิลลิกรัมต่อลิตร วัฒนธรรม- lhygro -ไมซิน ( รูปที่ 2 ) มีตั้งแต่สีฟ้ากัส .สมบูรณ์ สีฟ้า ( รูป 2D ) สีฟ้าบางส่วน คนอื่นแสดงการขาดที่สมบูรณ์ของฟ้า staining การวิเคราะห์ดีเอ็นเอของแคลลัสทนได้กับสองยีนต้านยา hygromycin primerชุดเพื่อขยายขนาดดันเป็น 644 BP กัสและ BP HPT - 408ment กับรองพื้นแต่ละชุด ส่วน ampli จึงเอ็ดเดี่ยวจากแคลลัสที่แสดงสีหน้ากัสก็สีฟ้า บางส่วนการแสดงออกของกัส สีฟ้า และสีน้ำเงิน กัส การแสดงออก ขนาดของ ampli จึงแลกเปลี่ยนผลิตภัณฑ์เทียบเท่ากับคาดขนาด ampli จึงเอ็ดจาก pig121hm ส่วนใหญ่ของแคลลัสกับไม่มีสีฟ้า กัส สีหน้าไม่มี transgenes แนะนําว่าเปลี่ยนสูตรไม่หนีการยีนต้านยา hygromycin .