- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2.3. ProcedureThe flow protocol and
2.3. Procedure
The flow protocol and time sequence for successive determination
of albumin and creatinine in urinary samples is listed in
Table 1. The flow lines were initially filled with water using a
syringe pump and a selection valve. Albumin measurement was
started by aspirating 50L of eosin Y (port #2) into the system.
Then, 100L of the standard BSA or sample solution (port #3)
was introduced into the carrier stream. Mixing of the reagent
and the standard/sample was promoted after three rounds of flow
reversal to produce the albumin–eosin Y complex. The product produced
was dispensed through port #9 for absorbance monitoring
at 547 nm. After product detection, the system was cleaned using
carrier water.
To start the creatinine determination process, 100L of alkaline
picrate (port #5) was aspirated into the holding coil, followed by
150L of standard creatinine or sample solution (port #6). Flow
reversal was performed to promote mixing of the reagents and the
standard/sample via the flow cell port of the selection valve. The
color product zonewas produced after three flowreversals, andwas
then transferred to the detection unit for absorbance monitoring at
500 nm.
2.4. Calibration curve, limit of detection and precision
Calibration was performed under optimized conditions with
standard solutions covering the concentration range from 0 to
100mgL−1 for albumin and 0 to 200mgL−1 for creatinine, respectively.
For each standard solution, three replicate injections were
carried out. The calibration data were evaluated by linear regression
analysis using Excel software. The limit of detection was
calculated via the 3 method as the concentration of albumin or
creatinine giving rise to signal exceeding three times the standard
deviation of the blank signal. The precision of the peak
heights was estimated by performing 10 replicate injections of two
standard solutions containing 20 and 50mgL−1 of albumin or creatinine.
2.5. Sample preparation
Urine samples were collected from diabetic patients and then
stored at −20 ◦C. Before analysis, the urine sample solutions were
filtered by filter paper (Whatman #1) to remove small particles.
Next, the filtered solution was diluted at least 600-fold with water
for albumin detection and 80-fold with 0.03M potassium dihydrogenphosphate
for creatinine detection. The sample solutions
obtained had a concentration in the range of the calibration graph.
Bradford protein assay [32] and the creatinine enzymatic assay
[33,34] were employed for comparison purposes.
2.6. Data analysis
Standards and samples were analyzed, and absorbances were
integrated. Standard curves were obtained by plotting the net
absorbance against the analyte concentration and fitting to a linear
equation. For comparing two measurement systems that are
supposed to be equivalent, results were tested by paired t-test and
calibration plot. The methods for this have been described in detail
elsewhere [35,36].
3. Results and discussion
In this work, two specific reactions were used separately
to determine albumin and creatinine levels. First, eosin Y was
employed to form a color complex with albumin. The concentration
of this complex could be monitored by absorption at 547 nm.
At a pH lower than 3, the absorbance of unbound eosin Y is greatly
reduced. After binding with albumin, a shift of the absorption
occurs, along with an increase in sensitivity. This increase is, to a certain
extent, proportional to the concentration of albumin. Second,
creatinine levelswere determined by Jaffe’s reaction, where creatinine
quantitatively produces an orange color with sodium picrate
in alkaline medium. After allowing mixing at room temperature for
color development, the absorbancewas measured at 500 nm. These
two detection systems form the basis of the proposed spectrophotometric
SIA system for successive determination of albumin and
creatinine and/or their ratio in urinary samples.
3.1. Optimization of variables in the determination of albumin
3.1.1. Effect of solution pH
The influence of solution pH on the absorbance (as peak height)
of eosin Y–albumin complexes is important because formation of
the complex and the blank signalwere significantly affected by pH.
The optimal pH of hydrochloric acid for the formation of eosin Y
(0.006%) and albumin (50mgL−1) was investigated from pH 2.0 to
4.5. At pH lower than 2.0, eosin Y precipitates. As shown in Fig. 2A,
signal of BSA () and blank () increased over the examined pH
range. These results indicated that formation of the colored complex
in acidic medium is preferable when compared to neutral or
alkaline medium. Itwas also found that the color complex in pH 2.5
media provided the highest net signal (). Therefore, a hydrochloric
medium at pH 2.5 was chosen as the optimal solution for albumin
detection.
3.1.2. Effect of eosin Y concentration
The optimal eosin Y concentration for albumin detection was
investigated using 50mgL−1 of albumin at pH 2.5. The dye reagent
with concentrations ranging from 0.001 to 0.1% was employed. The
absorbance was measured at the specified wavelength and plotted
against the eosin Y concentration (Fig. 2B). Signals increased
around 95% from the initial concentration (0.001%), however, the
blank signal also increased. Thus, the net signals were considered.
It was found that the highest net signal was observed at 0.03%
eosin Y. Therefore, 0.03% was selected as the most suitable eosin
Y concentration for albumin detection.
3.1.3. Effects of reagent and standard/sample volume
The effect of eosin Y volume in the SIA operating sequence was
examined over the range from 50 to 200L at intervals of 25L
using 0.03% eosin Y in solution at pH 2.5. The relationship between
the average signal for 50mg L−1 albumin and the reagent volume is
shown in Fig. 2C. It can be seen that the net signals decrease with
increasing reagent volume. Therefore, a reagent volume of 50L
was selected for subsequent work. In addition, the effect of standard/
sample volumewas examined over the range 25–150L at the
The flow protocol and time sequence for successive determination
of albumin and creatinine in urinary samples is listed in
Table 1. The flow lines were initially filled with water using a
syringe pump and a selection valve. Albumin measurement was
started by aspirating 50L of eosin Y (port #2) into the system.
Then, 100L of the standard BSA or sample solution (port #3)
was introduced into the carrier stream. Mixing of the reagent
and the standard/sample was promoted after three rounds of flow
reversal to produce the albumin–eosin Y complex. The product produced
was dispensed through port #9 for absorbance monitoring
at 547 nm. After product detection, the system was cleaned using
carrier water.
To start the creatinine determination process, 100L of alkaline
picrate (port #5) was aspirated into the holding coil, followed by
150L of standard creatinine or sample solution (port #6). Flow
reversal was performed to promote mixing of the reagents and the
standard/sample via the flow cell port of the selection valve. The
color product zonewas produced after three flowreversals, andwas
then transferred to the detection unit for absorbance monitoring at
500 nm.
2.4. Calibration curve, limit of detection and precision
Calibration was performed under optimized conditions with
standard solutions covering the concentration range from 0 to
100mgL−1 for albumin and 0 to 200mgL−1 for creatinine, respectively.
For each standard solution, three replicate injections were
carried out. The calibration data were evaluated by linear regression
analysis using Excel software. The limit of detection was
calculated via the 3 method as the concentration of albumin or
creatinine giving rise to signal exceeding three times the standard
deviation of the blank signal. The precision of the peak
heights was estimated by performing 10 replicate injections of two
standard solutions containing 20 and 50mgL−1 of albumin or creatinine.
2.5. Sample preparation
Urine samples were collected from diabetic patients and then
stored at −20 ◦C. Before analysis, the urine sample solutions were
filtered by filter paper (Whatman #1) to remove small particles.
Next, the filtered solution was diluted at least 600-fold with water
for albumin detection and 80-fold with 0.03M potassium dihydrogenphosphate
for creatinine detection. The sample solutions
obtained had a concentration in the range of the calibration graph.
Bradford protein assay [32] and the creatinine enzymatic assay
[33,34] were employed for comparison purposes.
2.6. Data analysis
Standards and samples were analyzed, and absorbances were
integrated. Standard curves were obtained by plotting the net
absorbance against the analyte concentration and fitting to a linear
equation. For comparing two measurement systems that are
supposed to be equivalent, results were tested by paired t-test and
calibration plot. The methods for this have been described in detail
elsewhere [35,36].
3. Results and discussion
In this work, two specific reactions were used separately
to determine albumin and creatinine levels. First, eosin Y was
employed to form a color complex with albumin. The concentration
of this complex could be monitored by absorption at 547 nm.
At a pH lower than 3, the absorbance of unbound eosin Y is greatly
reduced. After binding with albumin, a shift of the absorption
occurs, along with an increase in sensitivity. This increase is, to a certain
extent, proportional to the concentration of albumin. Second,
creatinine levelswere determined by Jaffe’s reaction, where creatinine
quantitatively produces an orange color with sodium picrate
in alkaline medium. After allowing mixing at room temperature for
color development, the absorbancewas measured at 500 nm. These
two detection systems form the basis of the proposed spectrophotometric
SIA system for successive determination of albumin and
creatinine and/or their ratio in urinary samples.
3.1. Optimization of variables in the determination of albumin
3.1.1. Effect of solution pH
The influence of solution pH on the absorbance (as peak height)
of eosin Y–albumin complexes is important because formation of
the complex and the blank signalwere significantly affected by pH.
The optimal pH of hydrochloric acid for the formation of eosin Y
(0.006%) and albumin (50mgL−1) was investigated from pH 2.0 to
4.5. At pH lower than 2.0, eosin Y precipitates. As shown in Fig. 2A,
signal of BSA () and blank () increased over the examined pH
range. These results indicated that formation of the colored complex
in acidic medium is preferable when compared to neutral or
alkaline medium. Itwas also found that the color complex in pH 2.5
media provided the highest net signal (). Therefore, a hydrochloric
medium at pH 2.5 was chosen as the optimal solution for albumin
detection.
3.1.2. Effect of eosin Y concentration
The optimal eosin Y concentration for albumin detection was
investigated using 50mgL−1 of albumin at pH 2.5. The dye reagent
with concentrations ranging from 0.001 to 0.1% was employed. The
absorbance was measured at the specified wavelength and plotted
against the eosin Y concentration (Fig. 2B). Signals increased
around 95% from the initial concentration (0.001%), however, the
blank signal also increased. Thus, the net signals were considered.
It was found that the highest net signal was observed at 0.03%
eosin Y. Therefore, 0.03% was selected as the most suitable eosin
Y concentration for albumin detection.
3.1.3. Effects of reagent and standard/sample volume
The effect of eosin Y volume in the SIA operating sequence was
examined over the range from 50 to 200L at intervals of 25L
using 0.03% eosin Y in solution at pH 2.5. The relationship between
the average signal for 50mg L−1 albumin and the reagent volume is
shown in Fig. 2C. It can be seen that the net signals decrease with
increasing reagent volume. Therefore, a reagent volume of 50L
was selected for subsequent work. In addition, the effect of standard/
sample volumewas examined over the range 25–150L at the
0/5000
2.3 ขั้นตอน
กระแสโพรโทคอลและเวลาลำดับสำหรับความมุ่งมั่นต่อ
albumin และ creatinine ในตัวอย่างท่อปัสสาวะอยู่
1 ตาราง รายการกระแสเริ่มเต็มไป ด้วยการใช้น้ำการ
เข็มปั๊มและวาล์วเลือก วัด albumin ถูก
เริ่มต้น โดย aspirating L 50 ของ eosin Y (พอร์ต #2) เป็นระบบ
แล้ว 100 L ของบีเอสเอมาตรฐานหรือตัวอย่างวิธีแก้ไข (พอร์ต #3)
ถูกนำเข้าไปในกระแสข้อมูลการขนส่ง ผสมของรีเอเจนต์
และมาตรฐาน/ตัวอย่างถูกส่งเสริมหลังจากรอบที่สามไหล
กลับไปผลิต albumin – eosin Y ซับซ้อน ผลิตภัณฑ์ผลิต
เป็นคำผ่านพอร์ต #9 ตรวจสอบ absorbance
ที่ 547 nm หลังจากตรวจสอบผลิตภัณฑ์ ระบบถูกทำความสะอาดใช้
น้ำขนส่ง.
เพื่อเริ่มกระบวนการกำหนด creatinine, L 100 ของอัลคาไลน์
picrate (พอร์ต #5) ถูก aspirated ในม้วนถือ ตาม
L 150 ของ creatinine มาตรฐานหรือตัวอย่างวิธีแก้ไข (พอร์ต #6) กระแส
กลับมีดำเนินการเพื่อส่งเสริมการผสมของ reagents และ
มาตรฐาน/ตัวอย่างผ่านพอร์ตเซลล์ไหลของวาล์วเลือก ใน
สี zonewas ผลิตภัณฑ์ที่ผลิตจากสาม flowreversals, andwas
แล้ว โอนย้ายไปหน่วยตรวจสำหรับการตรวจสอบ absorbance ที่
500 nm.
2.4 เทียบเส้นโค้ง ข้อจำกัดของการตรวจจับและความแม่นยำ
เทียบทำสภาวะให้เหมาะกับ
โซลูชั่นมาตรฐานที่ครอบคลุมตั้งแต่ความเข้มข้น 0 เพื่อ
100mgL−1 albumin และ 0 เพื่อ 200mgL−1 สำหรับ creatinine ตามลำดับ.
สำหรับโซลูชันมาตรฐานแต่ละ ถูกฉีด 3 replicate
ดำเนินการ มีประเมินข้อมูลการปรับเทียบ โดยถดถอยเชิงเส้น
การวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ Excel ขีดจำกัดของการตรวจสอบถูก
คำนวณ โดยวิธี 3 เป็นความเข้มข้นของ albumin หรือ
creatinine ให้สูงขึ้นเพื่อสัญญาณเกินสามครั้งมาตรฐาน
ส่วนเบี่ยงเบนของสัญญาณว่างเปล่า ความแม่นยำของการ
ไฮท์ถูกประเมิน โดยการฉีดการ replicate 10 สอง
โซลูชั่นมาตรฐาน 20 และ 50mgL−1 ของ albumin หรือ creatinine
2.5 ตัวอย่างเตรียม
ตัวอย่างปัสสาวะที่เก็บจากผู้ป่วยโรคเบาหวานแล้ว
เก็บที่ −20 ◦C ก่อนวิเคราะห์ โซลูชั่นตัวอย่างปัสสาวะถูก
กรอง ด้วยกระดาษกรอง (Whatman #1) เพื่อเอาอนุภาคขนาดเล็กออก
, โซลูชั่นที่กรองได้ผสมน้อย 600-fold น้ำ
ตรวจ albumin และ 80-fold กับ dihydrogenphosphate โปแตสเซียม 0.03M
ตรวจ creatinine โซลูชั่นอย่าง
รับได้เข้มข้นในช่วงของการปรับเทียบกราฟ
แบรดฟอร์ดโปรตีนวิเคราะห์ [32] และวิเคราะห์เอนไซม์ในระบบ creatinine
[33,34] มีการจ้างงานสำหรับวัตถุประสงค์ในการเปรียบเทียบการ
2.6 วิเคราะห์ข้อมูล
วิเคราะห์มาตรฐานและตัวอย่าง และ absorbances ถูก
รวม เส้นโค้งมาตรฐานที่ได้รับ โดยการพล็อตสุทธิ
absorbance analyte สมาธิและเหมาะสมจะเป็นเส้น
สมการ การเปรียบเทียบการวัดสองระบบที่
ควรจะเทียบเท่า ผลทดสอบ โดยจัดเป็นคู่ t-ทดสอบ และ
พล็อตเทียบ วิธีนี้มีการอธิบายในรายละเอียด
อื่น [35,36]
3 ผลลัพธ์และสนทนา
ในงานนี้ เฉพาะปฏิกิริยาสองใช้ต่างหาก
เพื่อกำหนดระดับ albumin และ creatinine ครั้งแรก eosin Y ถูก
จ้างไปสีกับ albumin ความเข้มข้น
ของซับซ้อนนี้สามารถตรวจสอบได้ โดยการดูดซึมที่ 547 nm.
ที่ pH ต่ำกว่า 3, absorbance ของผูก eosin Y เป็นอย่างมาก
ลดลงได้ หลังจากผูกกับ albumin กะดูดซึม
เกิดขึ้น รวมทั้งการเพิ่มความไวในการ เพิ่มนี้จะ ความบาง
ขนาด สัดส่วนกับความเข้มข้นของ albumin สอง,
levelswere creatinine ที่ถูกกำหนด โดยปฏิกิริยาของ Jaffe ซึ่ง creatinine
quantitatively ให้มีสีส้มกับโซเดียม picrate
ในด่าง หลังผสมที่อุณหภูมิห้องสำหรับให้
สีพัฒนา absorbancewas วัด 500 nm เหล่านี้
สองระบบเป็นพื้นฐานของการนำเสนอ spectrophotometric
SIA ระบบสำหรับการกำหนดที่ต่อเนื่องของ albumin และ
creatinine และ/หรืออัตราส่วนของพวกเขาในท่อปัสสาวะอย่าง
3.1 เพิ่มประสิทธิภาพของตัวแปรในการกำหนดของ albumin
3.1.1 ผลของโซลูชัน
อิทธิพลของโซลูชันบน absorbance (เป็นช่วง peak สูง
eosin Y – albumin คอมเพล็กซ์เป็นสำคัญเนื่องจากก่อตัวของ
ซับซ้อนและ signalwere เปล่าที่รับผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญ ด้วยค่า pH
PH ที่เหมาะสมที่สุดของกรดไฮโดรคลอริกสำหรับกำเนิดของ eosin Y
(0.006%) และ albumin (50mgL−1) ถูกสอบสวนจาก pH 2.0
4.5 ที่ค่า pH ต่ำกว่า 2.0, eosin Y precipitates ตามที่แสดงใน Fig. 2A,
สัญญาณ(บีเอสเอ)และว่างเปล่า()เพิ่มขึ้นกว่า pH กล่าวถึง
ช่วง ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้การก่อตัวของคอมเพล็กซ์สี
ในกรดเป็นกว่าเมื่อเทียบกับกลาง หรือ
กลางด่าง Itwas นอกจากนี้ยังพบว่าสีซับซ้อนในค่า pH 2.5
สื่อให้()สุทธิสัญญาณสูงสุด ดังนั้น ไฮโดรคลอริก
กลางที่ pH 2.5 ถูกเลือกเป็นโซลูชันดีที่สุดสำหรับ albumin
ตรวจ
3.1.2 ผลของความเข้มข้น eosin Y
มีความเข้มข้นสูงสุด eosin Y ตรวจ albumin
สอบสวนใช้ 50mgL−1 ของ albumin ที่ pH 2.5 รีเอเจนต์ย้อม
มีความเข้มข้น ตั้งแต่ 0.001 ถึง 0.1% เป็นลูกจ้าง ใน
absorbance วัดที่ความยาวคลื่นที่ระบุ และลงจุด
กับความเข้มข้น eosin Y (Fig. 2B) สัญญาณเพิ่ม
ประมาณ 95% จากเริ่มต้นความเข้มข้น (0.001%), อย่างไรก็ตาม การ
สัญญาณว่างที่เพิ่มขึ้น ดังนั้น ได้ถือสัญญาณสุทธิ.
พบว่า สัญญาณสุทธิสูงสุดถูกตรวจสอบที่ 0.03%
eosin Y ดังนั้น 0.03% ถูกเลือกเป็น eosin เหมาะ
Y เข้มข้นสำหรับตรวจ albumin.
เป็น 3.1.3 ลักษณะพิเศษของเสียงมาตรฐาน/ตัวอย่างและรีเอเจนต์
ผลของวอลุ่ม eosin Y SIA ปฏิบัติลำดับถูก
ตรวจสอบผ่านตั้งแต่ 50 ถึง 200 L ช่วง 25 L
ใช้ 0.03% eosin Y ใน pH 2.5 ความสัมพันธ์ระหว่าง
สัญญาณเฉลี่ย 50mg L−1 albumin และปริมาณรีเอเจนต์
แสดงใน Fig. 2C. จะเห็นได้ว่า สัญญาณสุทธิลดด้วย
เพิ่มปริมาณรีเอเจนต์ได้ ดังนั้น รีเอเจนต์ปริมาตรของ 50 L
ถูกเลือกสำหรับการทำงานต่อไป นอกจากนี้ ผลของมาตรฐาน /
volumewas ตรวจสอบช่วง 25-150 L ตัวอย่างในการ
กระแสโพรโทคอลและเวลาลำดับสำหรับความมุ่งมั่นต่อ
albumin และ creatinine ในตัวอย่างท่อปัสสาวะอยู่
1 ตาราง รายการกระแสเริ่มเต็มไป ด้วยการใช้น้ำการ
เข็มปั๊มและวาล์วเลือก วัด albumin ถูก
เริ่มต้น โดย aspirating L 50 ของ eosin Y (พอร์ต #2) เป็นระบบ
แล้ว 100 L ของบีเอสเอมาตรฐานหรือตัวอย่างวิธีแก้ไข (พอร์ต #3)
ถูกนำเข้าไปในกระแสข้อมูลการขนส่ง ผสมของรีเอเจนต์
และมาตรฐาน/ตัวอย่างถูกส่งเสริมหลังจากรอบที่สามไหล
กลับไปผลิต albumin – eosin Y ซับซ้อน ผลิตภัณฑ์ผลิต
เป็นคำผ่านพอร์ต #9 ตรวจสอบ absorbance
ที่ 547 nm หลังจากตรวจสอบผลิตภัณฑ์ ระบบถูกทำความสะอาดใช้
น้ำขนส่ง.
เพื่อเริ่มกระบวนการกำหนด creatinine, L 100 ของอัลคาไลน์
picrate (พอร์ต #5) ถูก aspirated ในม้วนถือ ตาม
L 150 ของ creatinine มาตรฐานหรือตัวอย่างวิธีแก้ไข (พอร์ต #6) กระแส
กลับมีดำเนินการเพื่อส่งเสริมการผสมของ reagents และ
มาตรฐาน/ตัวอย่างผ่านพอร์ตเซลล์ไหลของวาล์วเลือก ใน
สี zonewas ผลิตภัณฑ์ที่ผลิตจากสาม flowreversals, andwas
แล้ว โอนย้ายไปหน่วยตรวจสำหรับการตรวจสอบ absorbance ที่
500 nm.
2.4 เทียบเส้นโค้ง ข้อจำกัดของการตรวจจับและความแม่นยำ
เทียบทำสภาวะให้เหมาะกับ
โซลูชั่นมาตรฐานที่ครอบคลุมตั้งแต่ความเข้มข้น 0 เพื่อ
100mgL−1 albumin และ 0 เพื่อ 200mgL−1 สำหรับ creatinine ตามลำดับ.
สำหรับโซลูชันมาตรฐานแต่ละ ถูกฉีด 3 replicate
ดำเนินการ มีประเมินข้อมูลการปรับเทียบ โดยถดถอยเชิงเส้น
การวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ Excel ขีดจำกัดของการตรวจสอบถูก
คำนวณ โดยวิธี 3 เป็นความเข้มข้นของ albumin หรือ
creatinine ให้สูงขึ้นเพื่อสัญญาณเกินสามครั้งมาตรฐาน
ส่วนเบี่ยงเบนของสัญญาณว่างเปล่า ความแม่นยำของการ
ไฮท์ถูกประเมิน โดยการฉีดการ replicate 10 สอง
โซลูชั่นมาตรฐาน 20 และ 50mgL−1 ของ albumin หรือ creatinine
2.5 ตัวอย่างเตรียม
ตัวอย่างปัสสาวะที่เก็บจากผู้ป่วยโรคเบาหวานแล้ว
เก็บที่ −20 ◦C ก่อนวิเคราะห์ โซลูชั่นตัวอย่างปัสสาวะถูก
กรอง ด้วยกระดาษกรอง (Whatman #1) เพื่อเอาอนุภาคขนาดเล็กออก
, โซลูชั่นที่กรองได้ผสมน้อย 600-fold น้ำ
ตรวจ albumin และ 80-fold กับ dihydrogenphosphate โปแตสเซียม 0.03M
ตรวจ creatinine โซลูชั่นอย่าง
รับได้เข้มข้นในช่วงของการปรับเทียบกราฟ
แบรดฟอร์ดโปรตีนวิเคราะห์ [32] และวิเคราะห์เอนไซม์ในระบบ creatinine
[33,34] มีการจ้างงานสำหรับวัตถุประสงค์ในการเปรียบเทียบการ
2.6 วิเคราะห์ข้อมูล
วิเคราะห์มาตรฐานและตัวอย่าง และ absorbances ถูก
รวม เส้นโค้งมาตรฐานที่ได้รับ โดยการพล็อตสุทธิ
absorbance analyte สมาธิและเหมาะสมจะเป็นเส้น
สมการ การเปรียบเทียบการวัดสองระบบที่
ควรจะเทียบเท่า ผลทดสอบ โดยจัดเป็นคู่ t-ทดสอบ และ
พล็อตเทียบ วิธีนี้มีการอธิบายในรายละเอียด
อื่น [35,36]
3 ผลลัพธ์และสนทนา
ในงานนี้ เฉพาะปฏิกิริยาสองใช้ต่างหาก
เพื่อกำหนดระดับ albumin และ creatinine ครั้งแรก eosin Y ถูก
จ้างไปสีกับ albumin ความเข้มข้น
ของซับซ้อนนี้สามารถตรวจสอบได้ โดยการดูดซึมที่ 547 nm.
ที่ pH ต่ำกว่า 3, absorbance ของผูก eosin Y เป็นอย่างมาก
ลดลงได้ หลังจากผูกกับ albumin กะดูดซึม
เกิดขึ้น รวมทั้งการเพิ่มความไวในการ เพิ่มนี้จะ ความบาง
ขนาด สัดส่วนกับความเข้มข้นของ albumin สอง,
levelswere creatinine ที่ถูกกำหนด โดยปฏิกิริยาของ Jaffe ซึ่ง creatinine
quantitatively ให้มีสีส้มกับโซเดียม picrate
ในด่าง หลังผสมที่อุณหภูมิห้องสำหรับให้
สีพัฒนา absorbancewas วัด 500 nm เหล่านี้
สองระบบเป็นพื้นฐานของการนำเสนอ spectrophotometric
SIA ระบบสำหรับการกำหนดที่ต่อเนื่องของ albumin และ
creatinine และ/หรืออัตราส่วนของพวกเขาในท่อปัสสาวะอย่าง
3.1 เพิ่มประสิทธิภาพของตัวแปรในการกำหนดของ albumin
3.1.1 ผลของโซลูชัน
อิทธิพลของโซลูชันบน absorbance (เป็นช่วง peak สูง
eosin Y – albumin คอมเพล็กซ์เป็นสำคัญเนื่องจากก่อตัวของ
ซับซ้อนและ signalwere เปล่าที่รับผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญ ด้วยค่า pH
PH ที่เหมาะสมที่สุดของกรดไฮโดรคลอริกสำหรับกำเนิดของ eosin Y
(0.006%) และ albumin (50mgL−1) ถูกสอบสวนจาก pH 2.0
4.5 ที่ค่า pH ต่ำกว่า 2.0, eosin Y precipitates ตามที่แสดงใน Fig. 2A,
สัญญาณ(บีเอสเอ)และว่างเปล่า()เพิ่มขึ้นกว่า pH กล่าวถึง
ช่วง ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้การก่อตัวของคอมเพล็กซ์สี
ในกรดเป็นกว่าเมื่อเทียบกับกลาง หรือ
กลางด่าง Itwas นอกจากนี้ยังพบว่าสีซับซ้อนในค่า pH 2.5
สื่อให้()สุทธิสัญญาณสูงสุด ดังนั้น ไฮโดรคลอริก
กลางที่ pH 2.5 ถูกเลือกเป็นโซลูชันดีที่สุดสำหรับ albumin
ตรวจ
3.1.2 ผลของความเข้มข้น eosin Y
มีความเข้มข้นสูงสุด eosin Y ตรวจ albumin
สอบสวนใช้ 50mgL−1 ของ albumin ที่ pH 2.5 รีเอเจนต์ย้อม
มีความเข้มข้น ตั้งแต่ 0.001 ถึง 0.1% เป็นลูกจ้าง ใน
absorbance วัดที่ความยาวคลื่นที่ระบุ และลงจุด
กับความเข้มข้น eosin Y (Fig. 2B) สัญญาณเพิ่ม
ประมาณ 95% จากเริ่มต้นความเข้มข้น (0.001%), อย่างไรก็ตาม การ
สัญญาณว่างที่เพิ่มขึ้น ดังนั้น ได้ถือสัญญาณสุทธิ.
พบว่า สัญญาณสุทธิสูงสุดถูกตรวจสอบที่ 0.03%
eosin Y ดังนั้น 0.03% ถูกเลือกเป็น eosin เหมาะ
Y เข้มข้นสำหรับตรวจ albumin.
เป็น 3.1.3 ลักษณะพิเศษของเสียงมาตรฐาน/ตัวอย่างและรีเอเจนต์
ผลของวอลุ่ม eosin Y SIA ปฏิบัติลำดับถูก
ตรวจสอบผ่านตั้งแต่ 50 ถึง 200 L ช่วง 25 L
ใช้ 0.03% eosin Y ใน pH 2.5 ความสัมพันธ์ระหว่าง
สัญญาณเฉลี่ย 50mg L−1 albumin และปริมาณรีเอเจนต์
แสดงใน Fig. 2C. จะเห็นได้ว่า สัญญาณสุทธิลดด้วย
เพิ่มปริมาณรีเอเจนต์ได้ ดังนั้น รีเอเจนต์ปริมาตรของ 50 L
ถูกเลือกสำหรับการทำงานต่อไป นอกจากนี้ ผลของมาตรฐาน /
volumewas ตรวจสอบช่วง 25-150 L ตัวอย่างในการ
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3. Procedure
The flow protocol and time sequence for successive determination
of albumin and creatinine in urinary samples is listed in
Table 1. The flow lines were initially filled with water using a
syringe pump and a selection valve. Albumin measurement was
started by aspirating 50L of eosin Y (port #2) into the system.
Then, 100L of the standard BSA or sample solution (port #3)
was introduced into the carrier stream. Mixing of the reagent
and the standard/sample was promoted after three rounds of flow
reversal to produce the albumin–eosin Y complex. The product produced
was dispensed through port #9 for absorbance monitoring
at 547 nm. After product detection, the system was cleaned using
carrier water.
To start the creatinine determination process, 100L of alkaline
picrate (port #5) was aspirated into the holding coil, followed by
150L of standard creatinine or sample solution (port #6). Flow
reversal was performed to promote mixing of the reagents and the
standard/sample via the flow cell port of the selection valve. The
color product zonewas produced after three flowreversals, andwas
then transferred to the detection unit for absorbance monitoring at
500 nm.
2.4. Calibration curve, limit of detection and precision
Calibration was performed under optimized conditions with
standard solutions covering the concentration range from 0 to
100mgL−1 for albumin and 0 to 200mgL−1 for creatinine, respectively.
For each standard solution, three replicate injections were
carried out. The calibration data were evaluated by linear regression
analysis using Excel software. The limit of detection was
calculated via the 3 method as the concentration of albumin or
creatinine giving rise to signal exceeding three times the standard
deviation of the blank signal. The precision of the peak
heights was estimated by performing 10 replicate injections of two
standard solutions containing 20 and 50mgL−1 of albumin or creatinine.
2.5. Sample preparation
Urine samples were collected from diabetic patients and then
stored at −20 ◦C. Before analysis, the urine sample solutions were
filtered by filter paper (Whatman #1) to remove small particles.
Next, the filtered solution was diluted at least 600-fold with water
for albumin detection and 80-fold with 0.03M potassium dihydrogenphosphate
for creatinine detection. The sample solutions
obtained had a concentration in the range of the calibration graph.
Bradford protein assay [32] and the creatinine enzymatic assay
[33,34] were employed for comparison purposes.
2.6. Data analysis
Standards and samples were analyzed, and absorbances were
integrated. Standard curves were obtained by plotting the net
absorbance against the analyte concentration and fitting to a linear
equation. For comparing two measurement systems that are
supposed to be equivalent, results were tested by paired t-test and
calibration plot. The methods for this have been described in detail
elsewhere [35,36].
3. Results and discussion
In this work, two specific reactions were used separately
to determine albumin and creatinine levels. First, eosin Y was
employed to form a color complex with albumin. The concentration
of this complex could be monitored by absorption at 547 nm.
At a pH lower than 3, the absorbance of unbound eosin Y is greatly
reduced. After binding with albumin, a shift of the absorption
occurs, along with an increase in sensitivity. This increase is, to a certain
extent, proportional to the concentration of albumin. Second,
creatinine levelswere determined by Jaffe’s reaction, where creatinine
quantitatively produces an orange color with sodium picrate
in alkaline medium. After allowing mixing at room temperature for
color development, the absorbancewas measured at 500 nm. These
two detection systems form the basis of the proposed spectrophotometric
SIA system for successive determination of albumin and
creatinine and/or their ratio in urinary samples.
3.1. Optimization of variables in the determination of albumin
3.1.1. Effect of solution pH
The influence of solution pH on the absorbance (as peak height)
of eosin Y–albumin complexes is important because formation of
the complex and the blank signalwere significantly affected by pH.
The optimal pH of hydrochloric acid for the formation of eosin Y
(0.006%) and albumin (50mgL−1) was investigated from pH 2.0 to
4.5. At pH lower than 2.0, eosin Y precipitates. As shown in Fig. 2A,
signal of BSA () and blank () increased over the examined pH
range. These results indicated that formation of the colored complex
in acidic medium is preferable when compared to neutral or
alkaline medium. Itwas also found that the color complex in pH 2.5
media provided the highest net signal (). Therefore, a hydrochloric
medium at pH 2.5 was chosen as the optimal solution for albumin
detection.
3.1.2. Effect of eosin Y concentration
The optimal eosin Y concentration for albumin detection was
investigated using 50mgL−1 of albumin at pH 2.5. The dye reagent
with concentrations ranging from 0.001 to 0.1% was employed. The
absorbance was measured at the specified wavelength and plotted
against the eosin Y concentration (Fig. 2B). Signals increased
around 95% from the initial concentration (0.001%), however, the
blank signal also increased. Thus, the net signals were considered.
It was found that the highest net signal was observed at 0.03%
eosin Y. Therefore, 0.03% was selected as the most suitable eosin
Y concentration for albumin detection.
3.1.3. Effects of reagent and standard/sample volume
The effect of eosin Y volume in the SIA operating sequence was
examined over the range from 50 to 200L at intervals of 25L
using 0.03% eosin Y in solution at pH 2.5. The relationship between
the average signal for 50mg L−1 albumin and the reagent volume is
shown in Fig. 2C. It can be seen that the net signals decrease with
increasing reagent volume. Therefore, a reagent volume of 50L
was selected for subsequent work. In addition, the effect of standard/
sample volumewas examined over the range 25–150L at the
The flow protocol and time sequence for successive determination
of albumin and creatinine in urinary samples is listed in
Table 1. The flow lines were initially filled with water using a
syringe pump and a selection valve. Albumin measurement was
started by aspirating 50L of eosin Y (port #2) into the system.
Then, 100L of the standard BSA or sample solution (port #3)
was introduced into the carrier stream. Mixing of the reagent
and the standard/sample was promoted after three rounds of flow
reversal to produce the albumin–eosin Y complex. The product produced
was dispensed through port #9 for absorbance monitoring
at 547 nm. After product detection, the system was cleaned using
carrier water.
To start the creatinine determination process, 100L of alkaline
picrate (port #5) was aspirated into the holding coil, followed by
150L of standard creatinine or sample solution (port #6). Flow
reversal was performed to promote mixing of the reagents and the
standard/sample via the flow cell port of the selection valve. The
color product zonewas produced after three flowreversals, andwas
then transferred to the detection unit for absorbance monitoring at
500 nm.
2.4. Calibration curve, limit of detection and precision
Calibration was performed under optimized conditions with
standard solutions covering the concentration range from 0 to
100mgL−1 for albumin and 0 to 200mgL−1 for creatinine, respectively.
For each standard solution, three replicate injections were
carried out. The calibration data were evaluated by linear regression
analysis using Excel software. The limit of detection was
calculated via the 3 method as the concentration of albumin or
creatinine giving rise to signal exceeding three times the standard
deviation of the blank signal. The precision of the peak
heights was estimated by performing 10 replicate injections of two
standard solutions containing 20 and 50mgL−1 of albumin or creatinine.
2.5. Sample preparation
Urine samples were collected from diabetic patients and then
stored at −20 ◦C. Before analysis, the urine sample solutions were
filtered by filter paper (Whatman #1) to remove small particles.
Next, the filtered solution was diluted at least 600-fold with water
for albumin detection and 80-fold with 0.03M potassium dihydrogenphosphate
for creatinine detection. The sample solutions
obtained had a concentration in the range of the calibration graph.
Bradford protein assay [32] and the creatinine enzymatic assay
[33,34] were employed for comparison purposes.
2.6. Data analysis
Standards and samples were analyzed, and absorbances were
integrated. Standard curves were obtained by plotting the net
absorbance against the analyte concentration and fitting to a linear
equation. For comparing two measurement systems that are
supposed to be equivalent, results were tested by paired t-test and
calibration plot. The methods for this have been described in detail
elsewhere [35,36].
3. Results and discussion
In this work, two specific reactions were used separately
to determine albumin and creatinine levels. First, eosin Y was
employed to form a color complex with albumin. The concentration
of this complex could be monitored by absorption at 547 nm.
At a pH lower than 3, the absorbance of unbound eosin Y is greatly
reduced. After binding with albumin, a shift of the absorption
occurs, along with an increase in sensitivity. This increase is, to a certain
extent, proportional to the concentration of albumin. Second,
creatinine levelswere determined by Jaffe’s reaction, where creatinine
quantitatively produces an orange color with sodium picrate
in alkaline medium. After allowing mixing at room temperature for
color development, the absorbancewas measured at 500 nm. These
two detection systems form the basis of the proposed spectrophotometric
SIA system for successive determination of albumin and
creatinine and/or their ratio in urinary samples.
3.1. Optimization of variables in the determination of albumin
3.1.1. Effect of solution pH
The influence of solution pH on the absorbance (as peak height)
of eosin Y–albumin complexes is important because formation of
the complex and the blank signalwere significantly affected by pH.
The optimal pH of hydrochloric acid for the formation of eosin Y
(0.006%) and albumin (50mgL−1) was investigated from pH 2.0 to
4.5. At pH lower than 2.0, eosin Y precipitates. As shown in Fig. 2A,
signal of BSA () and blank () increased over the examined pH
range. These results indicated that formation of the colored complex
in acidic medium is preferable when compared to neutral or
alkaline medium. Itwas also found that the color complex in pH 2.5
media provided the highest net signal (). Therefore, a hydrochloric
medium at pH 2.5 was chosen as the optimal solution for albumin
detection.
3.1.2. Effect of eosin Y concentration
The optimal eosin Y concentration for albumin detection was
investigated using 50mgL−1 of albumin at pH 2.5. The dye reagent
with concentrations ranging from 0.001 to 0.1% was employed. The
absorbance was measured at the specified wavelength and plotted
against the eosin Y concentration (Fig. 2B). Signals increased
around 95% from the initial concentration (0.001%), however, the
blank signal also increased. Thus, the net signals were considered.
It was found that the highest net signal was observed at 0.03%
eosin Y. Therefore, 0.03% was selected as the most suitable eosin
Y concentration for albumin detection.
3.1.3. Effects of reagent and standard/sample volume
The effect of eosin Y volume in the SIA operating sequence was
examined over the range from 50 to 200L at intervals of 25L
using 0.03% eosin Y in solution at pH 2.5. The relationship between
the average signal for 50mg L−1 albumin and the reagent volume is
shown in Fig. 2C. It can be seen that the net signals decrease with
increasing reagent volume. Therefore, a reagent volume of 50L
was selected for subsequent work. In addition, the effect of standard/
sample volumewas examined over the range 25–150L at the
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3 ขั้นตอนการไหลของโปรโตคอลและลำดับ
กำหนดเวลาต่อเนื่องของอัลบูมินและครีในตัวอย่างปัสสาวะเป็น บริษัท จดทะเบียนใน
โต๊ะ 1 ไหลเส้นเริ่มต้นที่เต็มไป ด้วยน้ำโดยใช้
ปั๊มเข็มฉีดยาและการเลือกวาล์ว การตรวจวัดอัลบูมินถูก
เริ่มสำลัก 50 ลิตร eosin y ( พอร์ต# 2 ) เข้าระบบ
แล้ว 100 ลิตร ( มาตรฐานหรือตัวอย่างสารละลาย ( พอร์ต#
3 )ที่ใช้เป็นพาหะธาร การผสมของสารเคมี
และตัวอย่างมาตรฐาน / ส่งเสริมหลังจากรอบที่สามของการพลิกกลับไหล
ผลิตอัลบูมินและ eosin y ที่ซับซ้อน สินค้าที่ผลิต
ถูกจ่ายผ่านพอร์ต# 9 สำหรับค่าตรวจสอบ
ที่ 547 nm . หลังจากการตรวจสอบผลิตภัณฑ์ ระบบการส่งน้ำทำความสะอาด
.
เริ่มครีกำหนดกระบวนการ , 100 l
ด่างพิเครต ( พอร์ต# 5 ) คือ aspirated เข้าไปถือม้วนตามด้วย
150 ลิตรมาตรฐานครีหรือตัวอย่างสารละลาย ( พอร์ต# 6 ) กลับไหล
ได้ส่งเสริมการผสมของสารเคมีและ
มาตรฐาน / ตัวอย่างผ่านทางพอร์ตของการไหลของเซลล์วาล์ว
สี zonewas ผลิตหลังจากสาม flowreversals ดำเนินการ
, แล้วย้ายไปหน่วยตรวจจับค่า
ติดตามที่500 nm .
2.4 . การปรับเส้นโค้ง , ขีด จำกัด ของการตรวจสอบและการสอบเทียบความแม่นยำ
ภายใต้เงื่อนไขที่ดีที่สุดกับ
มาตรฐานโซลูชั่นที่ครอบคลุมช่วงความเข้มข้น 0
100mgl − 1 สำหรับอัลบูมินและ 0 ถึง 200mgl − 1 สำหรับ creatinine ตามลำดับ .
สำหรับแต่ละมาตรฐานโซลูชั่น 3 ทำซ้ำ ฉีดถูก
ดําเนินการ ข้อมูลการปรับแต่งโดยใช้โปรแกรม
ถดถอยเชิงเส้นโดยใช้การวิเคราะห์ Excel ซอฟต์แวร์ ข้อจำกัดของการตรวจสอบคือ
คำนวณผ่าน 3 แบบปริมาณอัลบูมินหรือ
ครีให้สูงขึ้นไปเกินสามครั้งเป็นสัญญาณมาตรฐาน
เบี่ยงเบนของสัญญาณว่าง ความแม่นยำของยอด
ความสูงประมาณโดยการเลียนแบบการฉีด 2
10 มาตรฐานโซลูชั่นที่มี 20 และ 50mgl − 1 ของอัลบูมินหรือครี .
2.5ตัวอย่างปัสสาวะการเตรียม
ตัวอย่างที่เก็บจากผู้ป่วยเบาหวานแล้วเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 C .
−◦ก่อนการวิเคราะห์ ตัวอย่างปัสสาวะโซลูชั่น
กรองด้วยกระดาษกรอง ( whatman # 1 ) เพื่อเอาอนุภาคขนาดเล็ก .
ถัดไป กรองสารละลายที่เจือจางด้วยน้ำอย่างน้อย 600 พับ
ตรวจหาอัลบูมินและ 80 เท่า กับ
dihydrogenphosphate โพแทสเซียม 0.03m ตรวจหาครี .ตัวอย่างโซลูชั่น
ได้มีความเข้มข้นในช่วงของการปรับแต่งกราฟ
[ 32 ] วิธี Bradford โปรตีนและเอนไซม์ ครี (
[ 33,34 ] ถูกใช้เพื่อวัตถุประสงค์ในการเปรียบเทียบ .
2.6 การวิเคราะห์ข้อมูล
มาตรฐานและวิเคราะห์ และ absorbances ถูก
แบบบูรณาการ เส้นโค้งมาตรฐานได้ โดยวางแผนสุทธิ
กับครูและค่าความเข้มข้นที่เหมาะสมกับสมการ
เปรียบเทียบระหว่างสองระบบการวัดที่
น่าจะเทียบเท่า ผลการทดสอบโดย Paired t-test
แผนการสอบเทียบ วิธีการนี้ได้รับการอธิบายในรายละเอียดอื่น ๆ 35,36
[ ]
3 ผลและการอภิปราย
ในงานนี้ ปฏิกิริยาเฉพาะสองใช้แยกกัน
เพื่อศึกษาระดับโปรตีนอัลบูมินและครี . แรก , eosin Y คือ
) รูปแบบสีซับซ้อนกับอัลบูมิน . ความเข้มข้นที่ซับซ้อนนี้สามารถตรวจสอบ
โดยการดูดซึมที่ 547 nm .
ที่ pH ต่ำกว่า 3 , การดูดกลืนแสงของ Unbound eosin y เป็นอย่างมาก
ลดลง หลังจาก ผูกพัน กับ อัลบูมิน กะของการดูดซึม
เกิดขึ้นพร้อมกับการเพิ่มขึ้นความไว เพิ่มนี้ไปบาง
,ขอบเขตที่เป็นสัดส่วนกับปริมาณอัลบูมิน . 2
ครีขั้นกำหนดโดยปฏิกิริยา เจฟฟี่ ซึ่งครี
ปริมาณผลิตสี ส้มกับโซเดียมพิเครต
ในด่างปานกลาง หลังจากที่ให้ผสมที่อุณหภูมิห้องเพื่อการพัฒนาสี absorbancewas วัด 500 นาโนเมตร เหล่านี้
2 ระบบตรวจจับรูปแบบพื้นฐานของ i
เสนอระบบ SIA เพื่อกำหนดต่อเนื่องของอัลบูมินและ
ครี และ / หรือ อัตราส่วนในตัวอย่างปัสสาวะ .
1 . การเพิ่มประสิทธิภาพของตัวแปรในการหาปริมาณอัลบูมิน
3.1.1 . ผลของพีเอช
อิทธิพลของพีเอชในการดูดกลืนแสง ( ที่ความสูงสูงสุดของ eosin y )
) อัลบูมินคอมเพล็กซ์เป็นสิ่งสำคัญเพราะการสร้างที่ซับซ้อน และ signalwere
ว่างมีผลอย่างมาก .ค่า pH ที่เหมาะสมของกรดเกลือสำหรับการก่อตัวของ eosin y
( 0.006 % ) และอัลบูมิน ( 50mgl − 1 ) ถูกสอบสวนจาก pH 2.0
4.5 . ที่ pH ต่ำกว่า 2.0 , eosin y ตะกอน . ดังแสดงในรูปที่ 2A
, สัญญาณของ BSA ( ) และว่าง ( ) เพิ่มขึ้นกว่าการตรวจสอบ pH
ช่วง ผลการทดลองนี้ชี้ให้เห็นว่า การก่อตัวของสีซับซ้อน
ขนาดกลางกว่าเมื่อเทียบกับกรดหรือเป็นกลาง
ด่างปานกลาง นอกจากนี้ยังพบว่าสีที่ซับซ้อนใน pH 2.5
สื่อให้สัญญาณสุทธิสูงสุด ( ) ดังนั้น สื่อกรดเกลือ
ที่ pH 2.5 ได้รับเลือกให้เป็นโซลูชั่นที่เหมาะสมสำหรับการตรวจหาโปรตีนอัลบูมิน
.
3.1.2 . ผลของความเข้มข้นที่เหมาะสมโอซิน Y
Y เพื่อตรวจหา albumin คือความเข้มข้นโอซิน
เมื่อใช้ 50mgl − 1 ของอัลบูมินที่ pH 2.5 ย้อมสารเคมี
ที่มีความเข้มข้นตั้งแต่ 0.001 ถึง 0.1 % ที่ใช้
เป็นวัดการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นที่ระบุและวางแผน
กับ eosin y ความเข้มข้น ( รูปที่ 2B ) สัญญาณเพิ่มขึ้น
ประมาณ 95% จากความเข้มข้นเริ่มต้น ( 0.001 % ) อย่างไรก็ตาม
ที่ว่างเปล่าสัญญาณเพิ่มขึ้น ดังนั้น สัญญาณเน็ตก็ถือว่า
พบว่าสัญญาณเน็ตสูงสุด คือสังเกตที่ 0.03 %
eosin y .เพราะฉะนั้น 0.03% โดยเลือกที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการตรวจหาปริมาณอัลบูมินโอซิน
Y .
3.1.3 . ผลของสารเคมีที่ใช้ และมาตรฐาน / ตัวอย่างปริมาณ
ผลของ eosin y ในหมวดเ งานลำดับคือ
ตรวจสอบมากกว่าช่วงตั้งแต่ 50 ถึง 200 ผมในช่วงเวลา 25 L
ใช้ 0.03 % eosin y ในสารละลาย pH 2.5 ความสัมพันธ์ระหว่าง
สัญญาณเฉลี่ย 50 L − 1 อัลบูมินและปริมาณที่แสดงในรูปที่ 3
2 . จะเห็นได้ว่า สัญญาณลดลงสุทธิกับ
เพิ่มปริมาณสารเคมี . ดังนั้น การกระทำของปริมาณ 50 L
ได้รับเลือกในภายหลังเพื่อทำงาน นอกจากนี้ ผลของการใช้มาตรฐาน /
volumewas ตรวจสอบมากกว่าช่วง 25 – 150 l ที่
กำหนดเวลาต่อเนื่องของอัลบูมินและครีในตัวอย่างปัสสาวะเป็น บริษัท จดทะเบียนใน
โต๊ะ 1 ไหลเส้นเริ่มต้นที่เต็มไป ด้วยน้ำโดยใช้
ปั๊มเข็มฉีดยาและการเลือกวาล์ว การตรวจวัดอัลบูมินถูก
เริ่มสำลัก 50 ลิตร eosin y ( พอร์ต# 2 ) เข้าระบบ
แล้ว 100 ลิตร ( มาตรฐานหรือตัวอย่างสารละลาย ( พอร์ต#
3 )ที่ใช้เป็นพาหะธาร การผสมของสารเคมี
และตัวอย่างมาตรฐาน / ส่งเสริมหลังจากรอบที่สามของการพลิกกลับไหล
ผลิตอัลบูมินและ eosin y ที่ซับซ้อน สินค้าที่ผลิต
ถูกจ่ายผ่านพอร์ต# 9 สำหรับค่าตรวจสอบ
ที่ 547 nm . หลังจากการตรวจสอบผลิตภัณฑ์ ระบบการส่งน้ำทำความสะอาด
.
เริ่มครีกำหนดกระบวนการ , 100 l
ด่างพิเครต ( พอร์ต# 5 ) คือ aspirated เข้าไปถือม้วนตามด้วย
150 ลิตรมาตรฐานครีหรือตัวอย่างสารละลาย ( พอร์ต# 6 ) กลับไหล
ได้ส่งเสริมการผสมของสารเคมีและ
มาตรฐาน / ตัวอย่างผ่านทางพอร์ตของการไหลของเซลล์วาล์ว
สี zonewas ผลิตหลังจากสาม flowreversals ดำเนินการ
, แล้วย้ายไปหน่วยตรวจจับค่า
ติดตามที่500 nm .
2.4 . การปรับเส้นโค้ง , ขีด จำกัด ของการตรวจสอบและการสอบเทียบความแม่นยำ
ภายใต้เงื่อนไขที่ดีที่สุดกับ
มาตรฐานโซลูชั่นที่ครอบคลุมช่วงความเข้มข้น 0
100mgl − 1 สำหรับอัลบูมินและ 0 ถึง 200mgl − 1 สำหรับ creatinine ตามลำดับ .
สำหรับแต่ละมาตรฐานโซลูชั่น 3 ทำซ้ำ ฉีดถูก
ดําเนินการ ข้อมูลการปรับแต่งโดยใช้โปรแกรม
ถดถอยเชิงเส้นโดยใช้การวิเคราะห์ Excel ซอฟต์แวร์ ข้อจำกัดของการตรวจสอบคือ
คำนวณผ่าน 3 แบบปริมาณอัลบูมินหรือ
ครีให้สูงขึ้นไปเกินสามครั้งเป็นสัญญาณมาตรฐาน
เบี่ยงเบนของสัญญาณว่าง ความแม่นยำของยอด
ความสูงประมาณโดยการเลียนแบบการฉีด 2
10 มาตรฐานโซลูชั่นที่มี 20 และ 50mgl − 1 ของอัลบูมินหรือครี .
2.5ตัวอย่างปัสสาวะการเตรียม
ตัวอย่างที่เก็บจากผู้ป่วยเบาหวานแล้วเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 C .
−◦ก่อนการวิเคราะห์ ตัวอย่างปัสสาวะโซลูชั่น
กรองด้วยกระดาษกรอง ( whatman # 1 ) เพื่อเอาอนุภาคขนาดเล็ก .
ถัดไป กรองสารละลายที่เจือจางด้วยน้ำอย่างน้อย 600 พับ
ตรวจหาอัลบูมินและ 80 เท่า กับ
dihydrogenphosphate โพแทสเซียม 0.03m ตรวจหาครี .ตัวอย่างโซลูชั่น
ได้มีความเข้มข้นในช่วงของการปรับแต่งกราฟ
[ 32 ] วิธี Bradford โปรตีนและเอนไซม์ ครี (
[ 33,34 ] ถูกใช้เพื่อวัตถุประสงค์ในการเปรียบเทียบ .
2.6 การวิเคราะห์ข้อมูล
มาตรฐานและวิเคราะห์ และ absorbances ถูก
แบบบูรณาการ เส้นโค้งมาตรฐานได้ โดยวางแผนสุทธิ
กับครูและค่าความเข้มข้นที่เหมาะสมกับสมการ
เปรียบเทียบระหว่างสองระบบการวัดที่
น่าจะเทียบเท่า ผลการทดสอบโดย Paired t-test
แผนการสอบเทียบ วิธีการนี้ได้รับการอธิบายในรายละเอียดอื่น ๆ 35,36
[ ]
3 ผลและการอภิปราย
ในงานนี้ ปฏิกิริยาเฉพาะสองใช้แยกกัน
เพื่อศึกษาระดับโปรตีนอัลบูมินและครี . แรก , eosin Y คือ
) รูปแบบสีซับซ้อนกับอัลบูมิน . ความเข้มข้นที่ซับซ้อนนี้สามารถตรวจสอบ
โดยการดูดซึมที่ 547 nm .
ที่ pH ต่ำกว่า 3 , การดูดกลืนแสงของ Unbound eosin y เป็นอย่างมาก
ลดลง หลังจาก ผูกพัน กับ อัลบูมิน กะของการดูดซึม
เกิดขึ้นพร้อมกับการเพิ่มขึ้นความไว เพิ่มนี้ไปบาง
,ขอบเขตที่เป็นสัดส่วนกับปริมาณอัลบูมิน . 2
ครีขั้นกำหนดโดยปฏิกิริยา เจฟฟี่ ซึ่งครี
ปริมาณผลิตสี ส้มกับโซเดียมพิเครต
ในด่างปานกลาง หลังจากที่ให้ผสมที่อุณหภูมิห้องเพื่อการพัฒนาสี absorbancewas วัด 500 นาโนเมตร เหล่านี้
2 ระบบตรวจจับรูปแบบพื้นฐานของ i
เสนอระบบ SIA เพื่อกำหนดต่อเนื่องของอัลบูมินและ
ครี และ / หรือ อัตราส่วนในตัวอย่างปัสสาวะ .
1 . การเพิ่มประสิทธิภาพของตัวแปรในการหาปริมาณอัลบูมิน
3.1.1 . ผลของพีเอช
อิทธิพลของพีเอชในการดูดกลืนแสง ( ที่ความสูงสูงสุดของ eosin y )
) อัลบูมินคอมเพล็กซ์เป็นสิ่งสำคัญเพราะการสร้างที่ซับซ้อน และ signalwere
ว่างมีผลอย่างมาก .ค่า pH ที่เหมาะสมของกรดเกลือสำหรับการก่อตัวของ eosin y
( 0.006 % ) และอัลบูมิน ( 50mgl − 1 ) ถูกสอบสวนจาก pH 2.0
4.5 . ที่ pH ต่ำกว่า 2.0 , eosin y ตะกอน . ดังแสดงในรูปที่ 2A
, สัญญาณของ BSA ( ) และว่าง ( ) เพิ่มขึ้นกว่าการตรวจสอบ pH
ช่วง ผลการทดลองนี้ชี้ให้เห็นว่า การก่อตัวของสีซับซ้อน
ขนาดกลางกว่าเมื่อเทียบกับกรดหรือเป็นกลาง
ด่างปานกลาง นอกจากนี้ยังพบว่าสีที่ซับซ้อนใน pH 2.5
สื่อให้สัญญาณสุทธิสูงสุด ( ) ดังนั้น สื่อกรดเกลือ
ที่ pH 2.5 ได้รับเลือกให้เป็นโซลูชั่นที่เหมาะสมสำหรับการตรวจหาโปรตีนอัลบูมิน
.
3.1.2 . ผลของความเข้มข้นที่เหมาะสมโอซิน Y
Y เพื่อตรวจหา albumin คือความเข้มข้นโอซิน
เมื่อใช้ 50mgl − 1 ของอัลบูมินที่ pH 2.5 ย้อมสารเคมี
ที่มีความเข้มข้นตั้งแต่ 0.001 ถึง 0.1 % ที่ใช้
เป็นวัดการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นที่ระบุและวางแผน
กับ eosin y ความเข้มข้น ( รูปที่ 2B ) สัญญาณเพิ่มขึ้น
ประมาณ 95% จากความเข้มข้นเริ่มต้น ( 0.001 % ) อย่างไรก็ตาม
ที่ว่างเปล่าสัญญาณเพิ่มขึ้น ดังนั้น สัญญาณเน็ตก็ถือว่า
พบว่าสัญญาณเน็ตสูงสุด คือสังเกตที่ 0.03 %
eosin y .เพราะฉะนั้น 0.03% โดยเลือกที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการตรวจหาปริมาณอัลบูมินโอซิน
Y .
3.1.3 . ผลของสารเคมีที่ใช้ และมาตรฐาน / ตัวอย่างปริมาณ
ผลของ eosin y ในหมวดเ งานลำดับคือ
ตรวจสอบมากกว่าช่วงตั้งแต่ 50 ถึง 200 ผมในช่วงเวลา 25 L
ใช้ 0.03 % eosin y ในสารละลาย pH 2.5 ความสัมพันธ์ระหว่าง
สัญญาณเฉลี่ย 50 L − 1 อัลบูมินและปริมาณที่แสดงในรูปที่ 3
2 . จะเห็นได้ว่า สัญญาณลดลงสุทธิกับ
เพิ่มปริมาณสารเคมี . ดังนั้น การกระทำของปริมาณ 50 L
ได้รับเลือกในภายหลังเพื่อทำงาน นอกจากนี้ ผลของการใช้มาตรฐาน /
volumewas ตรวจสอบมากกว่าช่วง 25 – 150 l ที่
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ฉันและครอบครัวของฉัน
- ขอบคุณที่คุณอยู่ข้างๆ ฉัน ขอโทษ เรื่องที
- It's become a different quarterback, or
- I want the whole world to know Galaxy Pr
- countries
- Have you received below mail we've sent
- I live delayed
- พวกเรากำลังเรียน
- 简索尔兹伯里填充丰满
- ิbad some time
- 政策はMIDICAL工場と共用するつもりです
- Said the hospital would implement tighte
- abbreviations and terms use in this inst
- Due*
- Interface Public Members
- is going to be
- The red- croened crane flies 600 miles f
- The pretreated proteins were hydrolyzed
- 特别说下“魔龙深渊”的地图跑法蛮有意思的，1-2层随机外加双腿很快就会到达，但是
- จัดขึ้นปีละครั้ง
- ฉันไม่เป็นไร
- 1) The Eastern Sarus Cranes that living
- ชั้นผลิตภัณฑ์ทำความสะอาดช่องปาก อยู่ในพื
- it will be lost
