2. Materials and methods2.1. Collec

2. Materials and methods
2.1. Collection of samples and isolation of E. coli
Six-hundred and sixty-three mastitis milk samples were
collected from 6 major dairy farms located in Beijing and the
surrounding area during the period from September 2012 to
October 2013. Clinical mastitis was determined by visual inspection
and presentation of mammary glands, along with
changes in milk morphology, while subclinical mastitis was
identified using the California Mastitis Test . Following
the latter protocol, the teat was disinfected with 70% ethanol
and the three initial streams were removed, quarter milk
samples were aseptically collected in sterile tubes, cooled with
freezer packs and transported to the laboratory . Milk
samples (50 ml) were cultured on trypticase soya agar (TSA;
Sigma, Shanghai, China) supplemented with 5% defibrinated
sheep blood. Presumptive isolated E. coli colonies were picked
and purified. Primary identification of the E. coli isolates was
done based on colony morphology, Gram stain and growth on
MacConkey agar and eosin methylene blue (EMB) agar
(Sigma, Beijing, China) . All suspected isolates were later
confirmed as E. coli by sequencing of 16S rDNA .
Confirmed E. coli isolates were stored in LuriaeBertani (LB)
broth (Invitrogen, Beijing, China) with 25% glycerol at
80 C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 การเก็บตัวอย่างและการแยกของเชื้อ E. coli
หกร้อยหกสิบสามตัวอย่างน้ำนมเต้านมที่ถูก
เก็บรวบรวมจาก 6 ฟาร์มโคนมใหญ่ตั้งอยู่ในกรุงปักกิ่งและ
พื้นที่โดยรอบในช่วงระยะเวลาตั้งแต่เดือนกันยายน 2012 ถึง
ตุลาคม 2013 คลินิกโรคเต้านมอักเสบถูกกำหนดโดยการตรวจสอบภาพ
และการนำเสนอของเต้านมพร้อมกับ
การเปลี่ยนแปลงในลักษณะทางสัณฐานวิทยานมในขณะที่ไม่แสดงอาการโรคเต้านมอักเสบได้รับการ
ระบุการใช้แคลิฟอร์เนียโรคเต้านมอักเสบทดสอบ ต่อไปนี้
โปรโตคอลหลังจุกนมได้รับการฆ่าเชื้อที่มีเอทานอล 70%
และสามลำธารเริ่มต้นถูกถอดออกนมไตรมาสที่
เก็บตัวอย่างปลอดเชื้อในหลอดหมันระบายความร้อนด้วย
แพ็คแช่แข็งและส่งไปยังห้องปฏิบัติการ นม
ตัวอย่าง (50 มล.) มีการเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อ trypticase ถั่วเหลือง (TSA;
Sigma, เซี่ยงไฮ้, จีน) เสริมด้วย 5% defibrinated
เลือดแกะ สันนิษฐานแยก E. coli อาณานิคมถูกหยิบ
และบริสุทธิ์ บัตรประจำตัวหลักของเชื้อ E. coli สายพันธุ์ที่ถูก
ทำขึ้นอยู่กับลักษณะทางสัณฐานวิทยาอาณานิคมคราบแกรมและการเจริญเติบโตใน
MacConkey agar และ Eosin เมทิลีนสีฟ้า (EMB) วุ้น
(Sigma, ปักกิ่ง, จีน) ทุกสายพันธุ์ที่น่าสงสัยหลังจากนั้น
ยืนยันว่าเป็นเชื้อ E. coli โดยลำดับของ 16S rDNA.
ยืนยันเชื้อ E. coli สายพันธุ์ที่ถูกเก็บไว้ใน LuriaeBertani (LB)
น้ำซุป (Invitrogen, ปักกิ่ง, จีน) กับกลีเซอรอล 25% ที่
80 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . การเก็บตัวอย่างและการแยกของ E . coli
หกร้อยหกสิบสามตัวอย่างนมเต้านมอักเสบเป็นหลัก 6
เก็บจากฟาร์มโคนมตั้งอยู่ในกรุงปักกิ่งและ
พื้นที่โดยรอบในช่วงเดือนกันยายน 2555

ตุลาคม 2013 เต้านมทางคลินิกถูกกำหนดโดยการตรวจสอบภาพและการนำเสนอ

ต่อมเต้านม พร้อมกับการเปลี่ยนแปลงของนมในขณะที่ซับคลินิเคิลเต้านมคือ
ระบุใช้แคลิฟอร์เนียเต้านมอักเสบแบบ ต่อไปนี้
โปรโตคอลหลังซีถูกฆ่าเชื้อด้วยแอลกอฮอล์ 70 %
3 เริ่มต้นกระแสออก ตัวอย่างนม
บริษัท aseptically เก็บในหลอดฆ่าเชื้อ , เย็นกับ
ตู้แช่แพ็คและส่งไปยังห้องปฏิบัติการ ตัวอย่างนม
( 50 มล. ) โดยเลี้ยงบนอาหาร trypticase ถั่วเหลือง ( TSA ;
ซิกมาเซี่ยงไฮ้ , ประเทศจีน ) เสริมด้วย 5 % ที่เอาไฟบรินออกแล้ว
แกะเลือด อาจจะเป็นไปได้ที่แยกเชื้อ E . coli อาณานิคมถูกเลือก
สกัดบริสุทธิ์ รหัสหลักของ E . coli สายพันธุ์คือ
เสร็จตามลักษณะของโคโลนี กรัมคราบและการเจริญเติบโตบน
Lynx และ eosin เมทธิลีนบลู ( EMB ) วุ้น
( Sigma , ปักกิ่ง , จีน ) ทุกคนสงสัยว่าไอโซเลทในภายหลัง
ยืนยันว่าเป็นเชื้ออีโคไล โดยลำดับของ 16S rDNA .
ยืนยันเชื้ออีโคไลสายพันธุ์ที่ถูกเก็บไว้ใน luriaebertani ( LB )
broth ( Invitrogen , ปักกิ่ง , จีน ) กับ 25 % กลีเซอรอลที่

80 C