Throughout alcoholic fermentation S

Throughout alcoholic fermentation S. cerevisiae cells must cope
with several stress conditions that could affect their growth and
viability. Glucose per se is a powerful signaling molecule in yeast.
When glucose concentration falls below 0.2%, cells stop dividing for a
few hours. After this lag phase, cells start to consume ethanol
(obtained from the former glucose catabolism) by respiration (natural
diauxic shift) [29]. A yeast model of glucose restriction (0.5% glucose)
was chosen in order to study the effect of glucose limitation on its
proteome. The aim of this study was to analyze the proteome changes
during growth under both high glucose concentration and glucose
restriction in yeast. As a result, we noticed differential expressions of
groups of proteins. Yeast grown in these conditions shows different
growth rates and fermentative behaviors. The different expression
patterns could be related to the stress caused by high glucose
concentration and to the previously demonstrated beneficial effect of
glucose restriction.
2. Materials and methods
2.1. Strains
The S. cerevisiae strain used in this study is wild-type strain W303-
1A, MATa, ura3-52, trp1Δ2, leu2-3_112, his3-11, ade2-1, can1-100
(accession no. 20000A; EUROSCARF, Frankfurt a.M., Germany).
2.2. Growth conditions
Yeast cells were grown at 30 °C in synthetic complete (SC)
medium containing 0.67% w/v of Yeast Nitrogen Base without Amino
Acids (USbiological) supplemented with complete Amino Acid
dropout solution (USbiological). 0.5% glucose, 2% glucose and 20%
glucose were used as carbon sources. Cells were picked from fresh
colonies and grown overnight in SC medium with 0.5%, 2% and 20%
glucose. Cells were then diluted in their respective fresh media to an
optical density at 600 nm of 0.2 O.D./ml using flasks with volume/
medium ratio of 3:1. Growth was monitored by measuring the
turbidity of the culture at 600 nm (OD600) on a spectrophotometer
until they reached the cellular density of 0.8 O.D./ml.
2.3. Ethanol and glucose measurement
For ethanol and glucose determination, cells were grown in SC
medium containing a fermentable carbon source (0.5% glucose, 2%
glucose and 20% glucose) to an optical density (600 nm) of 0.8 O.D./
ml. One milliliter of the growth was harvested at exponential phase
and then centrifuged. The cleared supernatant was collected to
estimate the ethanol production and the residual glucose. Ethanol was
determined using the alcohol-dehydrogenase/aldehyde-dehydrogenase
method (the assay was performed according to the “K-etoh” kit
from Megazymes (Ireland)). Glucose was determined according to the
Accu-Chek® Active Glucose (Roche Diagnostics) protocol.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต้องรับมือ S. cerevisiae เซลล์ทั่วหมักแอลกอฮอล์กับสภาพความเครียดต่าง ๆ ที่อาจมีผลต่อการเจริญเติบโต และชีวิต กลูโคสเป็นโมเลกุล signaling มีประสิทธิภาพในยีสต์ต่อ seเมื่อความเข้มข้นกลูโคสลดลงต่ำกว่า 0.2% เซลล์หยุดแบ่งสำหรับการไม่กี่ชั่วโมง หลังจากระยะนี้ความล่าช้า เซลล์เริ่มต้นการใช้เอทานอล(รับจากแคแทบอลิซึมกลูโคสอดีต) โดยการหายใจ (ธรรมชาติกะ diauxic) [29] ยีสต์แบบจำลองของการจำกัดกลูโคส (กลูโคส 0.5%)ถูกเลือกเพื่อศึกษาผลของน้ำตาลในข้อจำกัดของproteome การ จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้เป็นการ วิเคราะห์การเปลี่ยนแปลง proteomeในระหว่างการเจริญเติบโตภายใต้ความเข้มข้นสูงกลูโคสและกลูโคสข้อจำกัดในยีสต์ ดังนั้น เราได้สังเกตนิพจน์ส่วนที่แตกต่างของกลุ่มของโปรตีน ยีสต์เติบโตขึ้นในเงื่อนไขเหล่านี้แสดงความแตกต่างกันอัตราการเจริญเติบโตและพฤติกรรม fermentative นิพจน์ต่าง ๆรูปแบบอาจเกี่ยวข้องกับความเครียดที่เกิดจากน้ำตาลกลูโคสสูงความเข้มข้น และก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นถึงผลประโยชน์ของกลูโคสจำกัด2. วัสดุและวิธีการ2.1 สายพันธุ์พันธุ์ S. cerevisiae ใช้ในการศึกษานี้จะต้องใช้ชนิดป่า W303-1A ภะรัตมะตะ ura3-52, trp1Δ2, leu2 3_112, his3-11, ade2-1, can1-100(หมายเลขทะเบียน 20000A EUROSCARF แฟรงค์เฟิร์ตน. เยอรมนี)2.2 การเงื่อนไขเจริญเติบโตมีปลูกเซลล์ยีสต์ที่ 30 ° C ในสมบูรณ์สังเคราะห์ (SC)กลางประกอบด้วย 0.67% w/v ของฐานไนโตรเจนยีสต์โดยอะมิโนกรด (USbiological) เสริม ด้วยกรดอะมิโนที่สมบูรณ์โซลูชันเป็นถอน (USbiological) 0.5 กลูโคส% น้ำตาลกลูโคส 2% และ 20%มีใช้กลูโคสเป็นแหล่งคาร์บอน เซลล์ที่รับจากสดอาณานิคมและแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์ปลูกใน SC ด้วย 0.5%, 2% และ 20%กลูโคส เซลล์ที่ถูกผสมแล้วสื่อสดของพวกเขาเกี่ยวข้องกับการความหนาแน่นของแสงที่ 600 nm ของ 0.2 O.D./ml ด้วยน้ำเสียง /ขนาดอัตราส่วน 3:1 เจริญเติบโตถูกตรวจสอบ โดยการวัดการความขุ่นของวัฒนธรรมที่ 600 nm (OD600) บนตัวเครื่องทดสอบกรดด่างจนพวกเขาถึงความหนาแน่นโทรศัพท์มือถือของ 0.8 O.D./ml2.3 การวัดเอทานอลและกลูโคสสำหรับการกำหนดเอทานอลและกลูโคส เซลล์ถูกปลูกใน SCขนาดกลางที่ประกอบด้วยแหล่งคาร์บอน fermentable (0.5% กลูโคส 2%กลูโคสและกลูโคส 20%) จะมีความหนาแน่นออปติคอล (600 nm) ของ 0.8 O.D./มล Milliliter หนึ่งของการเจริญเติบโตถูกเก็บเกี่ยวในระยะเนนและ centrifuged แล้ว Supernatant แล้วรวบรวมไว้เพื่อประเมินการผลิตเอทานอลและกลูโคสส่วนที่เหลือ มีเอทานอลกำหนดใช้ในแอลกอฮอล์-dehydrogenase/แอล ดีไฮด์-dehydrogenaseวิธีการ (การทดสอบทำตามชุด "K-etoh"จาก Megazymes (ไอร์แลนด์)) กลูโคสถูกกำหนดตามโพรโทคอลเชค Accu ®ใช้งานกลูโคส (Roche วินิจฉัย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตลอดหมักแอลกอฮอล์เซลล์ S. cerevisiae ต้องรับมือ
กับภาวะกดดันหลายอย่างที่อาจมีผลต่อการเจริญเติบโตและของพวกเขา
ที่มีศักยภาพ กลูโคสต่อเป็นโมเลกุลส่งสัญญาณที่มีประสิทธิภาพในยีสต์
เมื่อความเข้มข้นของกลูโคสลดลงต่ำกว่า 0.2% เซลล์หยุดการหารสำหรับ
ไม่กี่ชั่วโมง หลังจากขั้นตอนการล่าช้านี้เซลล์เริ่มต้นที่จะใช้เอทานอล
(ที่ได้รับจาก catabolism กลูโคสอดีต) โดยการหายใจ (ธรรมชาติ
กะ diauxic) [29] รูปแบบยีสต์ของการ จำกัด ระดับน้ำตาล (กลูโคส 0.5%)
ได้รับการคัดเลือกเพื่อศึกษาผลกระทบของข้อ จำกัด ของน้ำตาลกลูโคสในของ
โปรตีน จุดมุ่งหมายของการศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงของโปรตีน
ระหว่างการเจริญเติบโตภายใต้ความเข้มข้นของกลูโคสสูงและน้ำตาล
จำกัด ในยีสต์ เป็นผลให้เราสังเกตเห็นการแสดงออกที่แตกต่างของ
กลุ่มของโปรตีน ยีสต์เติบโตในเงื่อนไขเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงความแตกต่าง
ของอัตราการเจริญเติบโตและพฤติกรรมการหมัก การแสดงออกที่แตกต่างกัน
รูปแบบที่อาจจะเกี่ยวข้องกับความเครียดที่เกิดจากน้ำตาลในเลือดสูง
ความเข้มข้นและเพื่อแสดงให้เห็นถึงผลประโยชน์ก่อนหน้านี้
ข้อ จำกัด กลูโคส
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 สายพันธุ์
สายพันธุ์ S. cerevisiae ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้เป็นสายพันธุ์ป่าชนิด W303-
1A, Mata, ura3-52, trp1Δ2, leu2-3_112, his3-11, ade2-1, can1-100
(เข้าไม่ 20000A. EUROSCARF, แฟรงค์เฟิร์ต, เยอรมนี)
2.2 สภาวะการเจริญเติบโต
ของเซลล์ยีสต์มีปลูกอยู่ที่ 30 ° C ในที่สมบูรณ์สังเคราะห์ (SC)
ขนาดกลางที่มี 0.67% w / v ของยีสต์ฐานไนโตรเจนโดยไม่ต้องอะมิโน
กรด (USbiological) เสริมด้วยกรดอะมิโนที่สมบูรณ์
แก้ปัญหาการออกกลางคัน (USbiological) 0.5% น้ำตาลกลูโคส 2% และ 20%
กลูโคสถูกนำมาใช้เป็นแหล่งคาร์บอน เซลล์ที่ถูกเลือกจากสด
อาณานิคมและเติบโตขึ้นในชั่วข้ามคืนใน SC กลางที่มี 0.5%, 2% และ 20%
กลูโคส เซลล์ที่ถูกเจือจางแล้วในสื่อสดของพวกเขาที่เกี่ยวข้องกับ
ความหนาแน่นของแสงที่ 600 นาโนเมตร 0.2 OD / ml โดยใช้ขวดที่มีปริมาณการ /
อัตราส่วนสื่อกลางในการที่ 3: 1 การเจริญเติบโตคือการตรวจสอบโดยการวัด
ความขุ่นของวัฒนธรรมที่ 600 นาโนเมตร (OD 600) ในสเปก
จนกว่าพวกเขาจะมาถึงความหนาแน่นของเซลล์ 0.8 OD / ml
2.3 เอทานอลและกลูโคสวัด
สำหรับเอทานอลและความมุ่งมั่นกลูโคสเซลล์ที่ถูกปลูกใน SC
ขนาดกลางที่มีแหล่งคาร์บอนที่ย่อย (0.5% กลูโคส 2%
กลูโคสและน้ำตาลกลูโคส 20%) กับความหนาแน่นของแสง (600 นาโนเมตร) 0.8 OD /
มิลลิลิตร หนึ่งมิลลิลิตรของการเจริญเติบโตเก็บเกี่ยวในขั้นตอนการชี้แจง
แล้วหมุนเหวี่ยง ใสเคลียร์ถูกเก็บรวบรวมเพื่อ
ประเมินการผลิตเอทานอลและกลูโคสที่เหลือ เอทานอลได้รับการ
คำนวณโดยใช้เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ dehydrogenase / ก้น-dehydrogenase
วิธี (การทดสอบได้รับการดำเนินการตาม "K-EtOH" ชุด
จาก Megazymes (ไอร์แลนด์)) กลูโคสถูกกำหนดตาม
Accu-Chek®ใช้งานกลูโคส (Roche Diagnostics) โปรโตคอล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตลอดการหมักแอลกอฮอล์ S . cerevisiae เซลล์ต้องรับมือ
หลายความเครียดที่อาจมีผลต่อการเจริญเติบโตและ
ความมีชีวิตของตน กลูโคสต่อ SE เป็นพลังสัญญาณโมเลกุลในยีสต์
เมื่อความเข้มข้นของกลูโคสต่ำกว่า 0.2% , เซลล์หยุดแบ่งสำหรับ
ไม่กี่ชั่วโมง หลังจาก lag phase , เซลล์เริ่มบริโภคแอลกอฮอล์
( ซึ่งได้จากกระบวนการสลายกลูโคสโดยการหายใจ ( อดีต ) ธรรมชาติ
diauxic กะ ) [ 29 ] แบบจำลองของยีสต์จำกัดกลูโคสกลูโคส 0.5 % )
ถูกเลือกเพื่อศึกษาผลของการจำกัดกลูโคสใน
โปรตีโอม . จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้คือ เพื่อวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงโปรตีนในการเจริญเติบโตภายใต้
ทั้งสูงและปริมาณน้ำตาลกลูโคสกลูโคส
จำกัดในยีสต์ ผลเราสังเกตเห็นความแตกต่างการแสดงออก
กลุ่มของโปรตีน ยีสต์เติบโตขึ้นในเงื่อนไขเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงอัตราการเจริญเติบโตแตกต่างกัน
และพฤติกรรมวิศวกรรมเคมี . รูปแบบการแสดงออก
ต่างกันอาจจะสัมพันธ์กับความเครียดเกิดจากความเข้มข้นของกลูโคส
สูงและก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นถึงประโยชน์ ผลของการจำกัดกลูโคส
.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . สายพันธุ์
SS . cerevisiae สายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ คือ สายพันธุ์ของ w303 -
1A , Mata , ura3-52 trp1 Δ , 2 , leu2-3_112 his3-11 ade2-1 can1-100
, , , ( การไม่ 20000a ; euroscarf AM , แฟรงค์เฟิร์ต , เยอรมนี ) .
2.2 . สภาวะเจริญ
ยีสต์เซลล์ปลูก 30 ° C ในสมบูรณ์สังเคราะห์ ( SC )
อาหารที่ 0.67 % W / V ของกรดอะมิโนไนโตรเจนเบสยีสต์โดยไม่
( usbiological ) เสริมด้วยกรดอมิโน
มหิดล โซลูชั่น ( usbiological ) กลูโคส 0.5% กลูโคส กลูโคส 2 % และ 20 %
ถูกใช้เป็นแหล่งคาร์บอน เซลล์ที่ถูกเลือกจากอาณานิคมสด
และเติบโตค้างคืนใน SC กลาง 0.5 2% และกลูโคส 20 %

เซลล์ แล้วเจือจางในสื่อสดของตนเพื่อ
ซิกแซ็กที่ 600 nm 0.2 OD / ml โดยใช้ขวดที่มีปริมาตร /
( อัตราส่วน 3 : 1 . การตรวจสอบโดยการวัด
ความขุ่นของวัฒนธรรมที่ 600 nm ( od600 ) บนวัสดุ
จนกว่าพวกเขาจะถึงความหนาแน่นของเซลล์ 0.8 O.D . / มล.
2.3 เอทานอล และการวัดปริมาณกลูโคส
เอทานอลและกลูโคส เซลล์ที่ถูกปลูกใน SC
ขนาดกลางที่มีแหล่งคาร์บอน กรัม ( 0.5% กลูโคส กลูโคส และร้อยละ 2
20 เปอร์เซ็นต์กลูโคส ) มีความหนาแน่นของแสง ( 600 nm ) 0.8 OD /
%หนึ่งมิลลิลิตรของการเจริญเติบโตเก็บเกี่ยวในที่ชี้แจงขั้นตอน
แล้วระดับ . การล้างนำรวบรวมเพื่อ
ประมาณการการผลิตเอทานอลและน้ำตาลส่วนที่เหลือ เอทานอลเป็นแอลกอฮอล์ดีไฮโดรจีเนส /
หาได้โดยใช้วิธี dehydrogenase
( อัลดีไฮด์ ( การปฏิบัติตาม " k-etoh " ชุด
จาก megazymes ( ไอร์แลนด์ ) กลูโคส พิจารณาตาม