2.3. Scanning electron microscopy (

2.3. Scanning electron microscopy (SEM)
The brown rice was broken manually. After coating with Pt ions
in an argon atmosphere for 30 min (IB-5 ion coater, Eiko Co.), the
cross-sections were stuck on double-adhesive tape fixed to a metallic stud. The starch granules were visualised with an electron
microscope (TM-1000, Tabletop Microscope, Hitachi, Ltd., Japan) at
15 kV.
2.4. Preparation and assay of enzymes involved in starch synthesis
The panicles stored at 70 C were de-hulled manually, and the
fresh weight of 20 grains was recorded. The enzymes were
extracted and analysed according to the methods described by
Chen, Jiang, Wu, and Shi (2001). Four key enzymes in the starch
synthesis process, namely ADP-glucose pyrophosphorylase (AGP),
starch synthase (SS), starch branching enzyme (BE), and debranching
enzyme (DBE), were analysed. All of the procedures were
performed in triplicate and on ice.
2.5. Starch molecular weight analysis with GPC
The molecular weight of the polyglucans was determined using
the method developed by Kubo et al. (1999) with minor modifications.
Briefly, 100 mg of rice flours was suspended in 2 mL of 1 M
NaOH. After agitation for 30 min at room temperature, 2 mL of distilled
water was added to the sample suspension, and the mixture
was centrifuged at 2000g and 25 C for 5 min. Then, 50 lL of the
supernatant was applied to a Waters GPC 515 separation system
with a 2410 refractive index detector (Waters, Milford, USA). The
column used was TSK-Gel4000SWXL (7.8  300 mm) and was
equilibrated with 0.1 M NaNO3 prior to use. The samples were
eluted with 0.1% NaCl solution at a flow rate of approximately
0.7 mL/min at room temperature. Five glucans (Sigma) with MP
of 2000 KDa, 188 KDa, 76.9 KDa, 43.2 KDa, and 10.5 KDa were used
to construct the standard curve, and the molecular weights of the
samples were calculated using the software associated with the
analysis machine.
2.6. Statistic analysis
Principle Component Analysis was performed using the SPSS
16.0 software (SPSS Inc., Chicago IL, USA). Correlation matrix was
evaluated to compare the correlations between each parameter.
3. Results
3.1. RS, AAC, reducing sugars, and grain weights
The RS content in MR4, MR7, and MR1 increased from 3.3%,
0.17%, and 3.21% at 5 DAF to 9.04%, 0.8%, and 4.5% at 25 DAF,
respectively, and this increase was accompanied by gradual
increases in the AAC and the grain weight (Table 1). The grain grew
fast and showed the highest filling rates during the first 5 days, and
the grains of the high-RS mutants MR1 and MR4 developed slower
than the low-RS mutant MR7 (Table 1). At the same developing
stages, the RS content, AAC in MR4 and MR1were significantly
higher than in MR7. The content of reducing sugars in three materials
were all markedly decreased from 5 DAF to 15 DAF and then
remained stable at a low level (Table 1), which showed reverse
changes as RS content and AAC. When analysed with PCA, the RS
content clustered with AAC and grain weight, which indicated that
they correlated positively to each other and the RS content showed
negative correlation with the content of reducing sugars as they
were in the opposite directions (Fig. 1). That the increase in the
RS content and the AAC with the initiation of grain filling indicates
that starch is synthesised to fill the whole grain and that the grain
development contributed to the formation of RS.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. สแกน microscopy อิเล็กตรอน (SEM)ข้าวกล้องถูกตัดขาดด้วยตนเอง หลังจากเคลือบด้วยประจุ Ptในบรรยากาศอาร์กอนใน 30 นาที (IB-5 ไอออน coater, Eiko Co.), การcross-sections ติดอยู่บนเทปกาวคู่ถาวรกับแกนโลหะ เม็ดแป้งถูก visualised กับอิเล็กตรอนกล้องจุลทรรศน์ (TM-1000, Tabletop กล้องจุลทรรศน์ ฮิตาชิ จำกัด ญี่ปุ่น) ที่15 kV2.4 การเตรียมและทดสอบเอนไซม์เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์แป้งPanicles เก็บที่ 70 C ถูก de-hulled ด้วยตนเอง และน้ำหนักสดของธัญพืช 20 ถูกบันทึก เอนไซม์ได้สกัด และ analysed ตามวิธีอธิบายไว้โดยเฉิน เจียง อู่ และชิ (2001) เอนไซม์หลักสี่ในแป้งกระบวนการสังเคราะห์ ได้แก่กลูโคส ADP pyrophosphorylase (AGP),starch synthase (SS), แป้งสาขาเอนไซม์ (จะ), และ debranchingเอนไซม์ (DBE), ถูก analysed ขั้นตอนทั้งหมดได้ดำเนินการ ใน triplicate และน้ำแข็ง2.5 วิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุลแป้งกับ GPCน้ำหนักโมเลกุลของ polyglucans ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการที่พัฒนาโดยคุโบะ et al. (1999) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยสั้น ๆ แป้งข้าว 100 มก.ถูกหยุดชั่วคราวใน mL 2 ม. 1NaOH หลังจากอาการกังวลต่อ 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง 2 mL ของกลั่นเพิ่มการระงับอย่าง ส่วนผสมน้ำมี centrifuged 2000g และ 25 C สำหรับ 5 นาที 50 แล้ว จะของใช้กับระบบแยกน้ำ GPC 515 supernatantกับที่ 2410 ดรรชนีจับ (น้ำ ลฟอร์ด สหรัฐอเมริกา) ที่คอลัมน์ที่ใช้ได้ทีเอสเค-Gel4000SWXL (7.8 มม.) และมีequilibrated ด้วย 0.1 M NaNO3 ก่อนใช้ ตัวอย่างดีeluted ด้วยโซลูชัน NaCl 0.1% ที่อัตราการไหลประมาณ0.7 mL/นาที ที่อุณหภูมิห้อง Glucans ห้า (ซิกมา) กับ MP2000 KDa, 188 KDa, 76.9 KDa, 43.2 KDa และ 10.5 KDa ใช้การสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน และน้ำหนักโมเลกุลของการตัวอย่างคำนวณได้โดยใช้ซอฟต์แวร์ที่เกี่ยวข้องกับการเครื่องวิเคราะห์2.6. สถิติวิเคราะห์ทำการวิเคราะห์ส่วนประกอบหลักโดยใช้โปรแกรมซอฟต์แวร์ 16.0 (โปรแกรม Inc., IL ชิคาโก สหรัฐอเมริกา) เมตริกซ์สหสัมพันธ์ได้ประเมินเพื่อเปรียบเทียบความสัมพันธ์ระหว่างแต่ละพารามิเตอร์3. ผลลัพธ์3.1. RS, AAC ลดน้ำตาล และน้ำหนักของเมล็ดข้าวเนื้อหา RS MR4, MR7 และ MR1 เพิ่มขึ้นจาก 3.3%0.17% และ 3.21% เยอรมัน 5 9.04%, 0.8% และ 4.5% เยอรมัน 25ตามลำดับ และพร้อมกับการเพิ่มขึ้น โดย gradualเพิ่ม AAC และน้ำหนักเมล็ด (ตาราง 1) การเติบโตของเมล็ดข้าวรวดเร็ว และแสดงให้เห็นอัตราบรรจุสูงสุดในช่วง 5 วันแรก และเกรนของสายพันธุ์สูง RS MR1 และ MR4 พัฒนาช้ากว่า mutant RS ต่ำ MR7 (ตารางที่ 1) ในการพัฒนาเดียวกันระยะ เนื้อหา RS, AAC MR4 และ MR1were อย่างมีนัยสำคัญสูงขึ้นกว่าใน MR7 เนื้อหาลดน้ำตาลวัสดุสามได้อย่างเด่นชัดทั้งหมดลดลงจากเยอรมัน 5 ไปเยอรมัน 15 แล้วยังคงทรงตัวในระดับต่ำ (ตารางที่ 1), ซึ่งแสดงให้เห็นกลับการเปลี่ยนแปลงเป็นเนื้อหา RS และ AAC เมื่อ analysed กับ PCA, RSเนื้อหาที่จับกลุ่มกับ AAC และเมล็ดข้าวน้ำหนัก ซึ่งบ่งชี้ที่พวกเขา correlated บวกกัน และแสดงให้เห็นว่าเนื้อหา RSลบความสัมพันธ์กับเนื้อหาลดน้ำตาลเหล่านั้นอยู่ในทิศทางตรงกันข้าม (Fig. 1) ที่เพิ่มขึ้นในการบ่งชี้ว่า เนื้อหาของ RS และ AAC ด้วยเริ่มต้นของการบรรจุข้าวว่า แป้งเป็น synthesised กับข้าวทั้งหมดและของเมล็ดข้าวพัฒนาส่วนการก่อตัวของ RS

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกน (SEM)
ข้าวสีน้ำตาลถูกทำลายด้วยตนเอง หลังจากการเคลือบด้วยไอออน Pt
ในชั้นบรรยากาศอาร์กอนสำหรับ 30 นาที (IB-5 ไอออน Coater, Eiko จำกัด )
ที่ข้ามส่วนติดอยู่บนเทปสองกาวจับจ้องไปที่แกนโลหะ เม็ดแป้งถูกมองเห็นกับอิเล็กตรอนกล้องจุลทรรศน์ (TM-1000, โต๊ะกล้องจุลทรรศน์ฮิตาชิ จำกัด ประเทศญี่ปุ่น) ที่ 15 กิโลโวลต์. 2.4 การเตรียมและการวิเคราะห์ของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องในการสังเคราะห์แป้งช่อดอกที่เก็บไว้ที่? 70? C ถูก de-hulled ตนเองและน้ำหนักสด20 เม็ดได้รับการบันทึก เอนไซม์ที่ถูกสกัดและวิเคราะห์ตามวิธีการที่อธิบายโดยเฉินเจียงวูและชิ(2001) สี่เอนไซม์สำคัญในแป้งกระบวนการสังเคราะห์คือ pyrophosphorylase ADP กลูโคส (AGP), เทสตาร์ช (เอสเอส) เอนไซม์แยกแป้ง (พ.ศ. ) และ debranching เอนไซม์ (DBE) ถูกนำมาวิเคราะห์ ทุกขั้นตอนมีการดำเนินการในการเพิ่มขึ้นสามเท่าและบนน้ำแข็ง. 2.5 แป้งวิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุลด้วย GPC น้ำหนักโมเลกุลของ polyglucans ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการที่พัฒนาโดยคูโบะ, et al (1999) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย. สั้น ๆ , 100 mg ของแป้งข้าวถูกระงับใน 2 มิลลิลิตร 1 M NaOH หลังจากที่กวนเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง 2 มิลลิลิตรกลั่นน้ำถูกบันทึกอยู่ในการระงับตัวอย่างและส่วนผสมที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่2000 g และ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที จากนั้น 50 LL ของสารละลายถูกนำไปใช้กับน้ำระบบGPC 515 แยกกับเครื่องตรวจจับดัชนีหักเห2410 (Waters, ฟอร์ดสหรัฐอเมริกา) คอลัมน์ที่ใช้เป็น TSK-Gel4000SWXL (7.8? 300 มิลลิเมตร) และได้รับการequilibrated 0.1 M NaNO3 ก่อนที่จะใช้ กลุ่มตัวอย่างถูกชะกับ 0.1% วิธีการแก้ปัญหาโซเดียมคลอไรด์ที่อัตราการไหลประมาณ 0.7 มิลลิลิตร / นาทีที่อุณหภูมิห้อง ห้ากลูแคน (ซิกม่า) กับ MP 2000 KDa 188 KDa, 76.9 KDa 43.2 KDa และ 10.5 KDa ถูกนำมาใช้ในการสร้างกราฟมาตรฐานและน้ำหนักโมเลกุลของตัวอย่างที่ถูกคำนวณโดยใช้ซอฟแวร์ที่เกี่ยวข้องกับเครื่องวิเคราะห์. 2.6 . การวิเคราะห์สถิติหลักการวิเคราะห์องค์ประกอบได้รับการดำเนินการโดยใช้โปรแกรม SPSS 16.0 ซอฟแวร์ (SPSS อิงค์ชิคาโกอิลลินอยส์สหรัฐอเมริกา) สัมพันธ์เมทริกซ์ได้รับการประเมินเพื่อเปรียบเทียบความสัมพันธ์ระหว่างแต่ละพารามิเตอร์. 3 ผล3.1 อาร์เอส, AAC, ลดน้ำตาลและเม็ดน้ำหนักเนื้อหาที่อาร์เอสในMR4, MR7 และ MR1 เพิ่มขึ้นจาก 3.3%, 0.17% และ 3.21% ใน 5 DAF 9.04%, 0.8% และ 4.5% ณ วันที่ 25 DAF, ตามลำดับ และการเพิ่มขึ้นนี้มาพร้อมกับค่อยๆเพิ่มขึ้นในAAC และน้ำหนักเมล็ดข้าว (ตารางที่ 1) เมล็ดข้าวที่เพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วและแสดงให้เห็นอัตราสูงสุดเติมในช่วง 5 วันแรกและธัญพืชของอาร์เอสกลายพันธุ์สูงMR1 และ MR4 พัฒนาช้ากว่ากลายพันธุ์ต่ำMR7 อาร์เอส (ตารางที่ 1) ในการพัฒนาเดียวกันขั้นตอนเนื้อหาที่อาร์เอส, AAC ใน MR4 และ MR1were อย่างมีนัยสำคัญสูงกว่าในMR7 เนื้อหาของการลดน้ำตาลในสามวัสดุทั้งหมดลดลงอย่างเห็นได้ชัดตั้งแต่ 5 ถึง 15 DAF DAF แล้วยังคงมีเสถียรภาพในระดับต่ำ(ตารางที่ 1) ซึ่งแสดงให้เห็นว่ากลับมีการเปลี่ยนแปลงเนื้อหาเป็นอาร์เอสและAAC เมื่อวิเคราะห์ด้วย PCA, อาร์เอสเนื้อหาคลัสเตอร์กับAAC และน้ำหนักเมล็ดซึ่งชี้ให้เห็นว่าพวกเขามีความสัมพันธ์เชิงบวกกับแต่ละอื่นๆ และเนื้อหาที่แสดงให้เห็นว่าอาร์เอสมีความสัมพันธ์เชิงลบที่มีเนื้อหาของการลดน้ำตาลในขณะที่พวกเขาอยู่ในทิศทางตรงข้าม(รูปที่ 1). ที่เพิ่มขึ้นในการที่เนื้อหาอาร์เอสและ AAC กับการเริ่มต้นของการบรรจุข้าวบ่งชี้ว่าแป้งถูกสังเคราะห์ในการกรอกข้อมูลธัญพืชและเมล็ดข้าวที่พัฒนาส่วนร่วมในการก่อตัวของอาร์เอส