2. Materials and methods
2.1. Bacterial cultures and preparation of inocula
Four pathogenic bacteria (L. monocytogenes NCTC 11994, S. aureus
subsp. aureus ATCC 23235, S. enterica serotype Enteritidis CECT —
Spanish Type Culture Collection — 556 and E. coli ATTC 12806) and
two spoilage bacteria (B. thermosphacta ATCC 11509 and P. fluorescens
ATCC 13525) were used for the research. The strains were maintained
at 3±1 °C in tryptone soy agar (TSA; Oxoid Ltd., Hampshire,
England) slants. Before inoculation, strains were sub-cultured twice
on TSA with 0.6% yeast extract (TSA–YE) plates that were incubated
at 35 °C (L. monocytogenes, S. aureus, S. enterica and E. coli) or 25 °C
(B. thermosphacta and P. fluorescens) for 48 h. Individual colonies on
TSA–YE were used to inoculate tubes containing 10 mL of tryptone soy
broth (TSB; Oxoid) adjusted at pH 6.2 with 1 mol/L of HCl or NaOH
(Del Río et al., 2008) and incubated, without shaking, at 35 °C for 18 h
to achieve viable cell populations of 109 cfu/mL. From these cultures, a
decimal dilution was prepared in sterile 0.1% (w/v) peptone water (PW;
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 วัฒนธรรมของเชื้อแบคทีเรียและการเตรียมเชื้อตั้งต้น
สี่แบคทีเรียก่อโรค (L. monocytogenes NCTC 11994, S. aureus
ATCC subsp aureus 23235, S. enterica serotype Enteritidis CECT. -
สเปนประเภทวัฒนธรรม Collection - 556 และ E. coli ATTC 12806) และ
สองแบคทีเรียเน่าเสีย ( B. thermosphacta ATCC 11509 และ P. fluorescens
ATCC 13525) ถูกนำมาใช้สำหรับการวิจัย สายพันธุ์ที่ได้รับการเก็บรักษาไว้
ที่ 3 ± 1 ° C ในอาหารเลี้ยงเชื้อถั่วเหลืองทริปโตน (TSA; Oxoid จำกัด นิวแฮมป์เชียร์
อังกฤษ) slants ก่อนที่จะฉีดวัคซีนสายพันธุ์ที่ถูกย่อยเลี้ยงเป็นครั้งที่สอง
เมื่อวันที่ทีเอสเอที่มีสารสกัดจากยีสต์ 0.6% (TSA-YE) แผ่นที่ถูกบ่ม
ที่ 35 องศาเซลเซียส (monocytogenes ลิตร, S. aureus, S. enterica และ E. coli) หรือ 25 ° C
(บี thermosphacta และ P. fluorescens) เวลา 48 ชั่วโมง อาณานิคมแต่ละ
TSA-YE ถูกนำมาใช้ในการฉีดวัคซีนที่มีหลอด 10 ml ของถั่วเหลืองทริปโตน
น้ำซุป (TSB; Oxoid) ปรับค่า pH 6.2 ที่มี 1 โมล / ลิตร HCl หรือ NaOH
และบ่มโดยไม่ต้องสั่น (del Rio et al, 2008). , ที่ 35 ° C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง
เพื่อให้บรรลุประชากรเซลล์ทำงานได้จาก 109 cfu / ml จากวัฒนธรรมเหล่านี้
เจือจางทศนิยมได้รับการจัดทำขึ้นเป็นหมัน 0.1% (w / v) น้ำเปปโตน (PW;
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัฒนธรรมของแบคทีเรียและการเตรียม inocula
4 เชื้อโรคแบคทีเรีย ( L . monocytogenes nctc ผู้ , S . aureus
subsp . aureus ATCC 23235 เอส enterica โรทัย enteritidis CECT -
สเปนประเภทวัฒนธรรมของสะสม - และ E . coli 3 12806 )
2 แบคทีเรียการเน่าเสีย ( พ. thermosphacta ATCC 11509 และ P . fluorescens
ATCC 13525 ) สถิติที่ใช้ในการวิจัยสายพันธุ์ที่ถูกเก็บรักษาไว้
3 ± 1 ° C ในทริพโทนเหลือง ( TSA ; oxoid จำกัด , Hampshire ,
อังกฤษ ) slants . ก่อนที่เชื้อเพาะเลี้ยงสายพันธุ์ย่อยสองครั้ง
บน TSA ที่มีสารสกัดจากยีสต์ 0.6% ( TSA ) ท่าน ) จานที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 35 องศา C
( L . monocytogenes , S . aureus และ S . enterica E . coli ) หรือ 25 ° C
( B . thermosphacta และ P . fluorescens ) 48 ชั่วโมง แต่ละโคโลนีบน
TSA และท่านเคยฉีดหลอดบรรจุ 10 ml ของทริพโทนซุปถั่วเหลือง
( TSB ; oxoid ) ปรับพีเอช 6.2 1 mol / L หรือ NaOH HCl
( del R í o et al . , 2008 ) และบ่มโดยไม่สั่น ที่ 35 ° C 18 H
เพื่อให้เซลล์ได้ จำนวน 109 CFU / ml จากวัฒนธรรมเหล่านี้ ,
( ทศนิยมเตรียมในการฆ่าเชื้อ 0.1% ( w / v ) เปปโตนน้ำ ( PW ;
การแปล กรุณารอสักครู่..