Enzymatic activity was measured ind

Enzymatic activity was measured individually in octopuses at the end of the
20 day feeding period. Enzymatic activity of animals fed alginate-bound crab
meat was not determined due to the high mortality observed in octopus fed this
diet.
Salivary (posterior) and digestive glands were dissected and stored at
−40 °C until assayed. All animals were fasted 12 h before sampling. Frozen
samples were homogenized at 4 °C in 500 μL ice-cold pyrogen-free water.
Homogenates were centrifuged at 13,200 rpm(change to ×g) for 20 min at 4 °C.
The supernatant was diluted in 10 volumes of ice-cold pyrogen-free water.
Homogenates were immediately used for enzyme assays. The soluble-protein
content was measured in diluted homogenates (Bradford, 1976) using the BioRad
protein determination kit (Biorad@-500-0006). Samples were read in a
Biorad model 550 microplate reader at 495 nm. All assays were run in duplicate.
General proteases activity was measured in homogenates using azocoll
(Sigma A-4341) as substrate in phosphate buffer, pH 7. Absorbance was read
with a spectrophotometer (Spectronic model 21D) at 520 nm. One unit is defined
as the amount of enzyme that catalyzes the release of azo dye causing a
ΔA/Δt= 0.001 min−1
. Trypsin activity was measured in diluted (1:100) homogenates
using benzoil-arginine-para-nitro-anilide (100 mM BAPNAl) as substrate
in a buffer (0.1 M Tris, 0.05 M NaCl, pH 7.5) at 4 °C. Absorbance was
read at 405 nm. Leucine amino peptidase (Leu-amino peptidase) was measured
in diluted (1:10) homogenates using 100 mM L-leucine-p-nitro-anilide (LPNA)
as substrate in a buffer (0.1 M Tris, pH 8) at 25 °C. Absorbance was read at
410 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เอนไซม์มีวัดแต่ละรายการในมือเมื่อสิ้นสุดการระยะเวลา 20 วันให้อาหาร เอนไซม์ของสัตว์เลี้ยงปูกับแอลจิเนตเนื้อไม่กำหนดเนื่องจากการตายสูงที่พบในปลาหมึกอาหารนี้อาหารน้ำลาย (หลัง) และต่อมย่อยอาหาร dissected และเก็บไว้ที่−40 ° C จน assayed สัตว์ทั้งหมดถูกเชื่อ 12 ชม.ก่อนสุ่มตัวอย่าง แช่แข็งตัวอย่างที่ homogenized 4 ° c 500 μL เย็นฟรี pyrogen น้ำHomogenates ถูกเหวี่ยงที่ 13,200 rpm (เปลี่ยนแปลง× g) สำหรับ 20 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสSupernatant ถูกเจือจางในน้ำเย็นฟรี pyrogen 10Homogenates ใช้สำหรับเอนไซม์ assays ทันที การละลายโปรตีนมีวัดเนื้อหาใน homogenates เจือจาง (แบรดฟอร์ด 1976) โดยใช้การ BioRadชุดวัดปริมาณโปรตีน (Biorad@-500-0006) ตัวอย่างที่ถูกอ่านในการBiorad รุ่น 550 microplate อ่าน 495 nm ทั้งหมด assays ถูกเรียกใช้ในรายการซ้ำมีวัดกิจกรรมทั่วไป proteases ใน homogenates โดยใช้ azocoll(Sigma A-4341) เป็นพื้นผิวในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ค่า pH 7 ถูกอ่าน absorbanceด้วย spectrophotometer (แบบ Spectronic 21D) ที่ 520 nm มีกำหนดหน่วยจำนวนเอนไซม์ที่ catalyzes ปล่อยให้สีย้อม azoΔA/Δt = 0.001 min−1. ทริปซินกิจกรรมที่มีวัดที่เจือจาง (1: 100) homogenatesใช้ benzoil-อาร์จินีนพาราไนโตร-anilide (100 มม. BAPNAl) เป็นพื้นผิวในบัฟเฟอร์ (0.1 M ทริ 0.05 M NaCl ค่า pH 7.5) ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ถูก absorbanceอ่าน 405 nm ไธร peptidase อะมิโน (กรดอะมิโนลิว peptidase) ที่มีวัดในการเจือจาง (1:10) homogenates ที่ใช้ 100 mM L-ไธร-p-ไนโตร-anilide (LPNA)เป็นพื้นผิวในบัฟเฟอร์ (0.1 M ทริ ค่า pH 8) ที่ 25 ° c ถูกอ่าน absorbance ที่410 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เอนไซม์วัดรายบุคคลในหมึกในตอนท้ายของ
ระยะเวลาการให้อาหาร 20 วัน เอนไซม์ของสัตว์เลี้ยงอัลจิเนตที่ถูกผูกไว้ปู
เนื้อไม่ได้กำหนดเนื่องจากการตายสูงสังเกตในปลาหมึกเลี้ยงนี้
อาหาร.
น้ำลาย (หลัง) และต่อมย่อยอาหารถูกชำแหละและเก็บไว้ที่
-40 องศาเซลเซียสจน assayed สัตว์ทุกตัวได้รับการอดอาหาร 12 ชั่วโมงก่อนการสุ่มตัวอย่าง แช่แข็ง
ตัวอย่างที่ถูกปั่นที่ 4 องศาเซลเซียสใน 500 ไมโครลิตรน้ำ pyrogen ฟรีเย็น.
homogenates ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 13,200 รอบต่อนาที (เปลี่ยนแปลง× g) เป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 ° C.
สารละลายเจือจางใน 10 เล่มของเย็น pyrogen ฟรีน้ำ.
homogenates ถูกนำมาใช้ทันทีสำหรับสมรรถนะของเอนไซม์ ละลายโปรตีน
เนื้อหาวัดใน homogenates เจือจาง (แบรด, 1976) โดยใช้ BioRad
ชุดโปรตีน (Biorad @ -500-0006) ตัวอย่างที่ถูกอ่านใน
Biorad รุ่นอ่าน 550 microplate ที่ 495 นาโนเมตร ตรวจทั้งหมดได้ทำงานในที่ซ้ำกัน.
ทั่วไปกิจกรรมโปรตีเอสวัดใน homogenates ใช้ azocoll
(Sigma A-4341) เป็นสารตั้งต้นในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 7. การดูดกลืนแสงได้อ่าน
ด้วย spectrophotometer (SPECTRONIC รุ่น 21D) ที่ 520 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยจะถูกกำหนด
เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่กระตุ้นการเปิดตัวของสีย้อม azo ก่อให้เกิด
ΔA / Δt = 0.001
นาที 1 กิจกรรม trypsin วัดในเจือจาง (1: 100) homogenates
ใช้ benzoil อาร์จินี-พาราไนโตร anilide (100 มิลลิเมตร BAPNAl) เป็นสารตั้งต้น
ในบัฟเฟอร์ (0.1 M Tris, 0.05 M NaCl ค่า pH 7.5) ที่ 4 ° C การดูดกลืนแสงที่ถูก
อ่านได้ที่ 405 นาโนเมตร Leucine peptidase อะมิโน (peptidase Leu อะมิโน) วัด
ในเจือจาง (01:10) homogenates ใช้ 100 mm L-leucine-P-Nitro-anilide (LPNA)
เป็นสารตั้งต้นในบัฟเฟอร์ (0.1 M Tris ค่า pH 8) ที่ 25 ° ซี การดูดกลืนแสงได้อ่านที่
410 นาโนเมตร