weightmeasurementsOne single colony

weightmeasurementsOne single colony carrying the plasmid pET21-60EGP wasused to inoculate 120 mL of LB medium supplemented with100 g.mL−1of ampicillin and incubated at 37◦C for 12 h.This seed culture was used to inoculate 0.5 L of TB ordefined media (Gustavsson et al., 2011) ((NH4)2SO47 g L−1,KH2PO41.6 g L−1, Na2HPO4·7H2O 9.94 g L−1, glucose 20 g L−1, 1 mLMgSO41 M, 1 mL Trace metals- CaCl2·2H2O 0.05 g L−1, FeCl·6H2O1.67 g L−1, ZnSO4·7H2O 0.018 g L−1, CuSO40.016 g L−1, MnCl2.4H2Og L−1, MnCl2·4H2O 0,013 g L−1, CoCl2·6H2O 0,018 g L−1, EDTA.2Na2,14 g L−1) to an final OD600of 0.1 into a 1.3 L BioFlo 110 fermenter(New Brunswick Scientific). Culture pH was controlled using 1 Msodium hydroxide, while dissolved oxygen (dO2) was controlledusing agitation between 300 and 600 rpm. For batch runs, cultureswere grown at 37◦C for 4 h (TB media) or 8 h (defined media), andexpression was induced with 1 mM IPTG. Cells were harvested 2 hafter induction. Batch runs were run at a pH set point of 7 andthe oxygen set point was set to >20%. For the defined media fedbatch strategy, cells were allowed to grow in batch mode at 37◦Cuntil glucose was depleted from the media, indicated by a sharpincrease in dO2 (dO2 >50%). At this point, 2 g of glucose was addedto the vessel. If oxygen levels decreased again to >50%, 2 g of glucosewere added. This procedure continued until the nitrogen sourcewas depleted, indicated by stable oxygen level after addition ofglucose. After 8 h, induction was initiated by addition of 1 mM IPTGfor both batch and fed-batch. Cells were harvested at various timepoints after induction and centrifuged at 5000 × g for 10 min. Cellpellets were stored at −80◦C and further analyzed. For dry weightmeasurements, 1–5 mL of culture were filtered through pre-weightcellulose acetate membrane, 22 m pore size and 45 mm diameter.The filter was then heated at 70◦C for 48 h and weighed.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาณานิคมเดียว weightmeasurementsOne พก wasused pET21 60EGP plasmid ปลูกฝีของปอนด์กลาง 120 มล.เสริมโกคอ g.mL−1of with100 และได้รับการกกที่ 37◦C สำหรับ 12 h.This เมล็ดวัฒนธรรมใช้ฉีด 0.5 L สื่อ ordefined TB (Gustavsson et al. 2011) ((NH4) 2SO47 g KH2PO41.6 g L−1, g Na2HPO4·7H2O 9.94 L−1 L−1 กลูโคส 20 กรัม L−1, 1 mLMgSO41 M , 1 mL ติดตามโลหะ-CaCl2·2H2O 0.05 g L−1, g FeCl·6H2O1.67 L−1, ZnSO4·7H2O g 0.018 L−1, g CuSO40.016 L−1, MnCl2.4H2Og L−1, g MnCl2·4H2O 0,013 CoCl2·6H2O 0,018 g EDTA.2Na2,14 g L−1, L−1, L−1) ไปเป็น OD600of สุดท้าย 0.1 ใน fermenter BioFlo 110 เครื่อง 1.3 L (วิทยาศาสตร์นิวบรันสวิค) ควบคุมค่า pH วัฒนธรรมใช้ไฮดรอกไซด์ Msodium 1 ในขณะที่ค่าออกซิเจนละลายน้ำ (dO2) ก่อกวน controlledusing ระหว่าง 300 และ 600 rpm สำหรับชุดทำงาน ปลูกที่ 37◦C 4 h (TB สื่อ) หรือ 8 ชั่วโมง (กำหนดสื่อ), cultureswere andexpression ถูกเหนี่ยวนำ ด้วย IPTG 1 มม. เซลล์ที่ถูกเหนี่ยวนำ 2 hafter เก็บเกี่ยว ชุดทำงานถูกเรียกใช้ที่จุดตั้งค่า pH 7 และตั้งค่าจุดชุดออกซิเจนการ > 20% สำหรับกลยุทธ์ fedbatch กำหนดสื่อ เซลล์ได้รับอนุญาตให้ขยายในโหมดชุดที่ 37◦Cuntil กลูโคสถูกหมดจากสื่อ sharpincrease ใน dO2 ระบุ (dO2 > 50%) ที่จุดนี้ 2 กรัมน้ำตาลกลูโคสถูก addedto เรือ ถ้าระดับออกซิเจนลดลงอีกเป็น > 50%, 2 กรัมของ glucosewere เพิ่มขึ้น ขั้นตอนนี้ต่อเนื่องจนถึง sourcewas ไนโตรเจนที่หมดลง ระบุระดับออกซิเจนมีเสถียรภาพหลังจาก ofglucose หลังจาก 8 ชั่วโมง เหนี่ยวนำเริ่ม ด้วย 1 มม. IPTGfor ทั้งชุดและชุดงานเลี้ยง เก็บเกี่ยวที่ timepoints ต่าง ๆ หลังจากการเหนี่ยวนำ และจากเซลล์ที่ 5000 × g 10 นาที Cellpellets ถูกเก็บไว้ที่ −80◦C และวิเคราะห์เพิ่มเติม สำหรับ weightmeasurements แห้ง 1 – 5 mL ของวัฒนธรรมถูกกรองผ่านเมมเบรนของอะซิเต weightcellulose ก่อน ขนาดของรูพรุน 22 เมตร และเส้นผ่าศูนย์กลาง 45 มม. ตัวกรองถูกความร้อนที่ 70◦C สำหรับ 48 ชั่วโมง แล้วชั่งน้ำหนัก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

weightmeasurementsOne อาณานิคมเดียวถือพลาสมิด pET21-60EGP wasused การฉีดวัคซีน 120 มล LB กลาง with100 เสริม? g.mL-1of ampicillin และบ่มที่37◦Cสำหรับการเพาะเลี้ยงเมล็ด 12 h.This ถูกใช้ในการฉีดวัคซีน 0.5 L ของสื่อวัณโรค ordefined ( Gustavsson et al. 2011) ((NH4) 2SO47 กรัม L-1 KH2PO41.6 L-1 กรัม, Na2HPO4 · 7H2O 9.94 กรัม L-1 กลูโคส 20 กรัม L-1, 1 mLMgSO41 M, 1 มิลลิลิตร Trace metals- CaCl2 · 2H2O 0.05 L-1 กรัม, FeCl · 6H2O1.67 L-1 กรัม, ZnSO4 · 7H2O 0.018 กรัม L-1, L-1 CuSO40.016 กรัม MnCl2.4H2Og L-1 MnCl2 · 4H2O 0,013 กรัม L- 1 COCl2 · 6H2O 0,018 กรัม L-1, L-1 EDTA.2Na2,14 ช) สุดท้าย OD600of 0.1 เป็น 1.3 L BioFlo 110 ถังหมัก (New Brunswick วิทยาศาสตร์) ค่า pH วัฒนธรรมได้รับการควบคุมการใช้ 1 Msodium ไฮดรอกไซในขณะที่ปริมาณออกซิเจนละลายน้ำ (dO2) คือ controlledusing ปั่นป่วนระหว่าง 300 และ 600 รอบต่อนาที สำหรับชุดวิ่ง cultureswere เติบโตที่37◦C 4 h (สื่อ TB) หรือ 8 ชั่วโมง (Media กำหนด), andexpression ถูกชักนำด้วย 1 มิลลิ IPTG เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยว 2 hafter เหนี่ยวนำ วิ่งแบทช์ทำงานที่จุดตั้งค่า pH 7 andthe จุดชุดออกซิเจนถูกกำหนดให้> 20% สำหรับกลยุทธ์การ fedbatch สื่อที่กำหนดไว้เซลล์ได้รับอนุญาตให้เจริญเติบโตได้ในโหมดแบทช์ที่ระดับน้ำตาลใน37◦Cuntilถูกหมดจากสื่อที่ระบุโดย sharpincrease ใน dO2 (dO2> 50%) ณ จุดนี้ 2 กรัมของน้ำตาลกลูโคสเป็น addedto เรือ หากระดับออกซิเจนลดลงอีกครั้งเพื่อ> 50%, 2 กรัมของ glucosewere เพิ่ม ขั้นตอนนี้จะดำเนินต่อไปจนกระทั่งไนโตรเจน sourcewas หมดที่ระบุโดยระดับออกซิเจนที่มีเสถียรภาพหลังจากนอกจาก ofglucose หลังจาก 8 ชั่วโมง, การเหนี่ยวนำได้ริเริ่มขึ้นโดยการเติม 1 มิลลิ IPTGfor ทั้งชุดและชุดเฟด เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยว timepoints ต่างๆหลังจากการเหนี่ยวนำและหมุนเหวี่ยงที่ 5000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาที Cellpellets ถูกเก็บไว้ที่-80◦Cและวิเคราะห์ต่อไป สำหรับ weightmeasurements แห้ง 1-5 มิลลิลิตรของวัฒนธรรมถูกกรองผ่านเยื่อก่อน weightcellulose acetate 22? Size M รูขุมขนและ 45 มมกรอง diameter.The ถูกความร้อนแล้ว70◦Cเป็นเวลา 48 ชั่วโมงและชั่งน้ำหนัก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

weightmeasurementsone เดียวอาณานิคมแบก pet21-60egp พลาสมิดและฉีดวัคซีน 120 ml ปอนด์ MS with100 g.ml − 1of แอมพิบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 12 ชั่วโมง ◦นี้เพาะเมล็ด ใช้ฉีด 0.5 ลิตร วัณโรค ordefined สื่อ ( gustavsson et al . , 2011 ) ( ( NH4 ) 2so47 G L − 1 , kh2po41.6 G l − 1 , na2hpo4 ด้วย 7h2o จำนวนกรัม L − 1 , − 1 กลูโคส 20 กรัมต่อลิตร , 1 mlmgso41 M 1 ml ร่องรอยโลหะ - ผลิตด้วย 2H2O-dx 0.05 g L − 1 , − 1 6h2o1.67 FeCl ด้วย G L , 7h2o znso4 ด้วย 0.018 G L − 1 , cuso40.016 G L − 1 , − 1 mncl2.4h2og l mncl2 ด้วย , 4h2o 0013 G L − 1 , cocl2 ด้วย 6h2o 0018 G L − 1 , − 1 G ผม EDTA 2na2,14 ) เป็นครั้งสุดท้าย od600of 0.1 เป็น 1.3 ลิตร bioflo 110 ถังหมัก ( บรุนซ์ใหม่ทางวิทยาศาสตร์ ) วัฒนธรรม Ph ถูกควบคุมโดยใช้ 1 msodium โซดาไฟ ในขณะที่ปริมาณออกซิเจนละลาย ( do2 ) คือ controlledusing การกวนระหว่าง 300 และ 600 รอบต่อนาที สำหรับชุดวิ่ง cultureswere ปลูกที่ 37 ◦ C 4 H ( TB สื่อ ) หรือ 8 H ( กำหนดสื่อ ) andexpression นำเข้ากับ 1 มิลลิเมตร เซลล์เก็บ 2 ฮาฟเตอร์ induction ชุดวิ่งเป็นวิ่งที่พีเอช 7 และจุดตั้งของออกซิเจนตั้งจุดเป็นชุด > 20% เพื่อกำหนดกลยุทธ์สื่อ fedbatch เซลล์ได้รับอนุญาตที่จะเติบโตในโหมดแบทช์ที่ 37 ◦ cuntil กลูโคสลดลงจากสื่อมวลชน , แสดงโดย sharpincrease ใน do2 ( do2 > 50% ) ณจุดนี้ , 2 กรัม กลูโคส โคพาหนะ ถ้าระดับออกซิเจนลดลงอีก 50 % 2 กรัม ทั้งเพิ่ม กระบวนการนี้อย่างต่อเนื่องจนไนโตรเจน sourcewas หมด ( ระดับออกซิเจนและมั่นคง หลังจาก ofglucose . หลังจาก 8 ชม. เริ่มโดยการเพิ่ม 1 มิล iptgfor ทั้งชุดและเฟดแบทช์ เซลล์มี timepoints ต่างๆหลังการเก็บเกี่ยว และระดับที่ 5 ×กรัมต่อ 10 นาที cellpellets อุณหภูมิ− 80 ◦ C และเพิ่มเติม วิเคราะห์ สำหรับ weightmeasurements แห้ง 1 – 5 ml ของวัฒนธรรมถูกกรองผ่านก่อน weightcellulose อะซีเตต , 22 เมตร ขนาดรู เส้นผ่าศูนย์กลาง 45 มม. กรองแล้วความร้อนที่ 70 ◦ C 48 ชั่วโมงและชั่งน้ำหนัก