Amplification of Nitrogenase nirH G

Amplification of Nitrogenase nirH Gene Amplicoms The gene that codes for the Fe protein polypeptide of the nitrogenase enzyme is the nifH gene. Thus, the detection of he mind Eene in the genomic A sample of a bacterial isolate would label that particular isolate as a nitrogen fixer. In order to amplify the nifH gene, a nested PCR using outer primers FGPHI(5'-TACGGCALARGGTGG NATHG-3'), PolR(5 ATSGCCATCAT YNTCRCCGGA- 3 and inner primers PolF(5 TGC GAYCCSA ARGCB GAA CTC-3) and AoER(5'-GACGATGTAGATYTCCTG- 3) BII was performed in a Esco S t MaxPro Thermal Cycler. In the first step, a 25 ul PCR mixture consisted of 12 5 Hi Dream Tag Green PCR Master Mix 2x Ther moscientifico. 2 pi Genomic DNA prepared with Zymo Research Fungal/Bacterial DNA MiniPrep 0.5 HM o each primer and 10 pl nuclease-free water ThermoScien tific). The reaction was carried out as follows: initial denaturation at 94 °C for 4 min, 30 cycles at 94 C for 1 min. 55 C for 1 min and 72 5C for 2 mun. and final extension at 72 C for 5 min. In the second step, a 25 pl PCR mixture consisted of 12.5 pl DreamTag Green PCR Master Mix 2 x ThermoScientifico. 2 pl template from the first step, 0.5 M of each primer and 10 pl Nuclease free water. The reaction was camed out as n the first step except the annealing temperature was set to 56 dC instead of 55 oC. A strain of Enterobacie sp. MoP l-1[4] was used as a positive control. The PCR products were sepa rated by electrophoresis in 1.2 agarose gels stained with ethidium bromide Sigma-Aldrich) and visualized under UV lighl.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขยายของ Nitrogenase nirH Amplicoms ยีนยีนที่รหัส polypeptide โปรตีน Fe ของเอนไซม์ nitrogenase เป็น ยีน nifH ดังนั้น ตรวจเขาใจ Eene ที่ genomic ตัวอย่างของการแยกเชื้อแบคทีเรียจะป้ายชื่อที่แยกเฉพาะเป็นผู้ให้บริการเป็นไนโตรเจน การขยายยีน nifH, PCR ซ้อนกันโดยใช้ไพรเมอร์นอก FGPHI (5'-TACGGCALARGGTGG NATHG-3'), PolR (5 ATSGCCATCAT YNTCRCCGGA-3 และภายในไพรเมอร์ PolF (5 TGC GAYCCSA ARGCB CTC เฒ่า-3) และทำใน t S เอสโก Cycler ร้อน MaxPro AoER(5'-GACGATGTAGATYTCCTG-3) BII ในขั้นแรก ส่วนผสม PCR 25 ul ประกอบด้วย 12 5 Hi ฝันป้ายเขียวผสม PCR หลัก moscientifico เธอ x 2 ปี่ 2 Genomic DNA พร้อม Zymo วิจัย Fungal/แบคทีเรีย DNA MiniPrep HM 0.5 o แต่ละสีรองพื้นและ 10 pl ฟรี nuclease น้ำ ThermoScien tific) ปฏิกิริยาที่ถูกดำเนินการดังนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 94 ° C สำหรับ 4 min, 30 รอบที่ 94 C สำหรับ 1 นาที 55 C 1 นาที และ 72 5C สำหรับ 2 หมื่น และสุดท้ายขยายที่ 72 C สำหรับ 5 นาที ในขั้นตอนสอง 25 เป็น pl PCR ส่วนผสมประกอบด้วย 12.5 pl DreamTag เขียว PCR หลักผสม 2 x ThermoScientifico แม่ pl 2 ขั้นแรก 0.5 M ของแต่ละสีรองพื้นและ 10 pl Nuclease ฟรีน้ำ ปฏิกิริยา camed ออกเป็นขั้นตอนแรกยกเว้นอุณหภูมิหลอมถูกตั้งค่าให้ 56 n dC แทน 55 oC. ต้องใช้ของ Enterobacie sp. MoP l-1 [4] ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก ผลิตภัณฑ์ PCR ได้คะแนน electrophoresis ในเจ agarose 1.2 สีกับโบรไมด์ ethidium ซิก Aldrich sepa) และ visualized ภายใต้ UV lighl

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การขยายของน้ำหนักแห้ง nirH ยีน Amplicoms ยีนที่รหัสสำหรับ polypeptide โปรตีนเฟเอนไซม์ไนโตเป็นยีน nifH ดังนั้นการตรวจสอบของเขาคิด Eene ในจีโนมตัวอย่างของการแยกเชื้อแบคทีเรียจะติดป้ายแยกโดยเฉพาะอย่างยิ่งที่เป็นผู้ให้บริการไนโตรเจน เพื่อขยายยีน nifH เป็นวิธี PCR ที่ซ้อนกันโดยใช้ไพรเมอร์นอก FGPHI (5'-TACGGCALARGGTGG NATHG-3 ') PolR (5 ATSGCCATCAT YNTCRCCGGA- ไพรเมอร์ที่ 3 และภายใน PolF (5 TGC GAYCCSA ARGCB GAA CTC-3) และ Aoer ( 5'-GACGATGTAGATYTCCTG- 3) BII ได้ดำเนินการใน Esco S เสื้อ Maxpro Thermal Cycler. ในขั้นตอนแรก 25 ส่วนผสมยู PCR ประกอบด้วย 12 5 ฝันสวัสดีแท็กสีเขียว PCR โทผสม 2x Ther moscientifico. 2 ปี่จีโนมดีเอ็นเอเตรียมด้วย Zymo วิจัยเชื้อรา / แบคทีเรียดีเอ็นเอ miniprep 0.5 HM o แต่ละไพรเมอร์และ 10 พี Nuclease น้ำฟรี ThermoScien Tific) ปฏิกิริยาจะถูกดำเนินการดังต่อไปนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 นาที 30 รอบที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและ 72 5C สำหรับ 2 มูล และการขยายสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ในขั้นตอนที่สอง 25 พีส่วนผสม PCR ประกอบด้วย 12.5 พี DreamTag สีเขียว PCR โทผสม 2 x ThermoScientifico 2 แม่แบบพีจากขั้นตอนแรก, 0.5 M ของแต่ละไพรเมอร์และ 10 พี Nuclease น้ำฟรี ปฏิกิริยา camed ออกเป็น n ขั้นตอนแรกยกเว้นอุณหภูมิการหลอมถูกตั้งค่าให้ 56 DC แทน 55 องศาเซลเซียส สายพันธุ์ของ Enterobacie SP ซับ l-1 [4] ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวก ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกจัดอันดับโดย SEPA electrophoresis ใน 1.2 เจล agarose ย้อมด้วย ethidium bromide Sigma-Aldrich) และมองเห็นภายใต้แสงยูวี lighl

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเพิ่มปริมาณของไนโตรจีเนส nirh amplicoms ยีนยีนที่เป็นรหัสของโปรตีนและโพลีเปปไทด์ของไนโตรจีเนส เอนไซม์ คือ nifh ยีน ดังนั้น การตรวจหาเขาจิตใจ eene ในจีโนมของแบคทีเรียจากตัวอย่างจะติดป้ายที่เฉพาะแยกเป็นไนโตรเจน ช่างซ่อม เพื่อขยาย nifh ยีน , วิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่ซ้อนกันด้านนอก fgphi ( 5 ' - tacggcalarggtgg nathg-3 ' )POLR ( 5 atsgccatcat yntcrccgga - 3 และภายในชนิด polf ( 5 TGC gayccsa argcb GAA ctc-3 ) และ Aoer ( 5 ' - gacgatgtagatytcctg - 3 ) bii แสดงใน ESCO ของแม็กซ์โปร Thermal cycler . ในขั้นตอนแรก 25 UL PCR ส่วนผสมประกอบด้วย 12 5 สวัสดีความฝันแท็กสีเขียวซึ่งมีต้นแบบผสม 2x moscientifico . 2 pi genomic DNA ที่เตรียม zymo การวิจัยเชื้อรา / แบคทีเรีย ดีเอ็นเอ miniprep 05 อืม o แต่ละ primer และ 10 คุณนิวเคลียสฟรีน้ำ thermoscien tific ) ปฏิกิริยาที่ถูกดำเนินการดังนี้ ( เริ่มต้นที่ 94 ° C เป็นเวลา 4 นาที 30 รอบที่ 94 C เป็นเวลา 1 นาที 55 องศาเซลเซียสนาน 1 นาที 72 5C 2 มุน และเบอร์สุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ในขั้นตอนที่สอง ที่จะผสม จำนวน 12.5 และ 25 คุณ dreamtag สีเขียว PCR Master Mix 2 x thermoscientifico .2 . แม่แบบจากขั้นตอนแรก 0.5 M ของแต่ละสี และ 10 . นิวเคลียสฟรีน้ำ ปฏิกิริยาคือด้วยเป็น n ขั้นตอนแรกยกเว้นอุณหภูมิการอบอ่อนที่ถูกตั้งไว้ 56 DC แทน 55 องศาเซลเซียส สายพันธุ์ของ enterobacie sp . ซับ L-1 [ 4 ] ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกจัดอันดับโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสในเสภา 12 , เปื้อนทิเดียมโบรไมด์เจลซิกม่า Aldrich ) และมองเห็นภายใต้ lighl UV