2.4. Species identification using shortened primers
As a possible strategy to lower LOD of the multiplex PCR method,
several nucleotides in the 50 endof the primers were deleted to design
the truncated primers, which were 18-20 bp in length (Fig. 1). The
shortened primer sequences were as follows: forward common
primer SIM2 (50-AACATCTCATCATGATGAAA-30), mutton primer M2
(50-TGCTGTGGCTATTGTCGC-30), chicken primer C2 (50-GATGAA
GAAGAATGAGGCG-30), beef primer B2 (50-GTGTAAGACCCGTAATA
TAAG-30), and pork primer P2 (50-GTAGATTTGTGATGACCGTA-30).
Firstly, the PCR reactionwas run under the same conditions as Section
2.3, and the products were electrophoresed on 2% agarose gel with
0.5 mg/ml ethidium bromide. Then, the optimal conditions of multiplex
PCR were investigated by adjusting the annealing temperature
and ratio of primers. The expected size of the amplified fragments for
chicken, beef, mutton and pork were 201 bp, 248 bp, 306 bp and
373 bp, respectively.
2.4 การระบุชนิดโดยใช้ไพรเมอร์สั้นลง
เป็นกลยุทธ์ที่เป็นไปได้เพื่อลด LOD ของวิธี PCR multiplex
หลายนิวคลีโอใน 50 endof ไพรเมอร์ที่ถูกลบออกในการออกแบบ
ไพรเมอร์ถูกตัดทอนซึ่งเป็น 18-20 bp ยาว (รูปที่ 1) .
สั้นลำดับไพรเมอร์มีดังนี้ร่วมกันไปข้างหน้า
ไพรเมอร์ซิม 2 (50 aacatctcatcatgatgaaa-30), เนื้อแกะไพรเมอร์ m2
(50 tgctgtggctattgtcgc-30), ไพรเมอร์ไก่ c2 (50 gatgaa
gaagaatgaggcg-30), ไพรเมอร์เนื้อ b2 (50 gtgtaagacccgtaata
TAAG-30) และไพรเมอร์เนื้อหมู p2 (50 gtagatttgtgatgaccgta-30).
แรก pcr reactionwas ทำงานภายใต้เงื่อนไขเดียวกับส่วน
2.3 และผลิตภัณฑ์ที่ถูก electrophoresed บนเจล agarose 2% ด้วย
0.5 mg / ml ethidium โบรไมด์ แล้วเงื่อนไขที่ดีที่สุดของหลาย
PCR จากการตรวจสอบโดยการปรับอุณหภูมิการหลอม
และอัตราการใช้ไพรเมอร์ ขนาดที่คาดหวังของชิ้นส่วนเพื่อขยาย
ไก่, เนื้อวัวเนื้อแกะและเนื้อหมูได้ 201 bp, 248 bp, 306 bp และ 373 bp
ตามลำดับ.
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.4 ใช้ระบุชนิดลดลงไพรเมอร์
เป็นกลยุทธ์ได้ลงลอดของวิธีการ multiplex PCR,
นิวคลีโอไทด์หลายใน endof 50 ไพรเมอร์ที่ถูกลบออก
สังกะสี การตัดวัสดุ bp 18-20 ยาว (Fig. 1) ซึ่ง ใน
พื้นย่อลำดับได้ดังนี้: ไปข้างหน้าร่วม
พื้น SIM2 (50-AACATCTCATCATGATGAAA-30), mutton พื้น M2
(50-TGCTGTGGCTATTGTCGC-30), ไก่พื้น C2 (50-GATGAA
GAAGAATGAGGCG-30), เนื้อรองพื้น B2 (50-GTGTAAGACCCGTAATA
taag บิน-30), และหมูพื้น p 2 (50-GTAGATTTGTGATGACCGTA-30)
PCR reactionwas เรียกใช้ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันเป็นส่วนแรก
2.3 และผลิตภัณฑ์ถูก electrophoresed ในเจ 2% agarose กับ
0.5 mg/ml โบรไมด์ ethidium แล้ว เงื่อนไขดีที่สุดของล็ก
PCR ถูกตรวจสอบ โดยการปรับอุณหภูมิหลอม
และอัตราส่วนของไพรเมอร์ ขนาดที่คาดไว้ของชิ้นส่วนเอาต์สำหรับ
ไก่ เนื้อ mutton และหมู 201 bp, 248 bp, 306 bp และ
373 bp ตามลำดับ.
การแปล กรุณารอสักครู่..