undisturbed (Garcia et al., 2008).

undisturbed (Garcia et al., 2008). The attributes of bacteriophages
include the following: (i) They kill bacterial target cells; (ii) They
generally do not cross species or genus boundaries, and will
therefore not affect (a) the desired bacteria in foods (e.9., starter
cultures); (b) commensals in the gastrointestinal tract, or (c) the
accompanying bacterial flora in the environment; (iii) Bacteriophages
are generally composed entirely of proteins and nucleic
acids, therefore their breakdown products consist exclusively of
amino acids and nucleic acids (Carlton, Noordman, Biswas, Meester,
& Loessner, 2005). Thus, they are not xenobiotics, and, unlike
antibiotics and antiseptic agents, their introduction into and
distribution within a given environment may be seen as an
extension of a natural process (Carlton et al., 2005). Recently the
USFDA announced that it had approved the use of a bacteriophage
preparation made from six individually purified bacteriophages to
be used on ready-to-eat meat and poultry products as an antimicrobial
agentagainstL monoqttogenes (EBI Food Safety,2007). The
approved bacteriophage preparation is reported to be effective
against 170 strains of L monocytogenes (l-ang, 2006). The
commercial product named LISTEXru P100 was approved as a food
biopreservative and granted GRAS (Generally Recognized as Safe)
status (FDA,2006). This study was undertaken to investigate the
presence oflisteriaspp. in Brazilian fresh sausage and to investigate
the efficacy of P100 in reducing populations of L monocytogenes ofi
laboratory-inoculated Brazilian fresh sausage.
2. Materials and methods
2.1. lnvestigation of Listeria spp. in Brazilian fresh sausage
2.1.1. Sampling and laboratory procedures
Eighty samples, 40 of swine and 40 of chicken Brazilian fresh
sausage, were purchased at a local supermarket in Salvador, BA,
Brazil. Portions of 250 g of food were aseptically collected between
March and October of 2008 and samples were transported from the
place of collection to the laboratory in an insulated cold box filled
with ice. To detect bacteria in the samples the standard method of
the United States Department of Agriculture (USDA)/Food Safety
and Inspection Service (FSIS) (USDA/FSIS, 2005, chap. 8.04) was
used. One L monoqrtogenes positive control (L. monoqrtogenes Scott
A, a serotype 4b, ATCC 15313) and one uninoculated media negative
control were used for each set of concurrently analyzed samples.
After aseptically removing the casing in a class II biosafety cabinet
(l-abconco model 36210 class BII, Brazil), samples of 25 g were
blended with 225 ml of Modified Universiry of Vermont broth
([JVM, Difco Code No 022377) in a Stomacher (lTR model 1204,
serie126, Braz;i,24O bpm) for two min and incubated for 24h at
30 "C. Secondary enrichment was performed in Fraser broth (FB,
Difco Code No. 211767) at 35 "C for 24-48 h. If any degree of FB
darkening was evident (esculin hydrolysis), a volume of 100 pl of
the broth was streaked onto Modified Oxford Listeria Selective Agar
(MOX, Difco Code No. 222530), supplemented wirh moxalactam
20 mg/l and colistin sulfate 10 mg/I. Plates were incubared at 35 .C
for 24-48 h. After that, at least 20 suspect colonies, if available,
were streaked on 5% horse blood agar (blood agar base II, Difco Code
No. 0045/17) plates and incubated at 35 "C for 24h. After incubation,
plates were examined for colonies surrounded by a small zone
of p-hemolysis. Typical colonies were transferred to tryptic soy
broth (TSB, Difco Code No. 211825) supplemented with 0.6% (w/v)
yeast extract (Difco Code No. 211929) and confirmatory tests were
carried out for Gram stain, catalase activity and motility in semisolid
indol motility medium (SIM, Difco Code No. 217578) at 25 .C
for seven days, for the typical umbrella shape. For biochemical
confirmatory tests, Iisferio API (BioMerieux@ S.A., Marcy L Etoile,
France) was used. Serological slide agglutination tests were done
according to Seeliger and Hohne (1979) on all isolates presumed to
be Listeria, using commercially prepared antisera (Difco).
2.2. Control of L monocytogenes inoculated in Brazilian fresh
sausage using bacteriophage P10O
2.2.7. Bacterial srrains, bacteriophage, media and culture condinons
The bacteria and bacteriophage used in this study were: a single
strain of L. monocytogenes 1l2a isolated from Brazilian fresh
sausage; Listeria ivanovii WSLC 3009 (SLCC 4769); and bacteriophage
P10O (LISTEXil P100) provided by EBI Food Safety (Wageningen,
The Netherlands).
L ivanovii was used as helper strain for the P100 bacteriophage
(Carlton et al., 2005; Loessner & Busse,1990). The culture strains
were stored in a Hogness medium (1.3 mM KzHPOa.3HzO; 1.3 mM
KHzPOai 2.0 mM citrate-Na.2HzO; 1.0 mM MgSO q.7HzO; 4.4% (v lv)
glycerol) and frozen at -80 "C. Before use, the L monocytogenes
culture was activated in tryptic soy broth supplemented with 0.5%
(w/v) yeast extract (TSB-YE) at 35 "C overnight in a shaker (Cientec
model CT 712, Brazil) at 150 rev/min. The L ivanovii culture was
grown overnight at 30 "C in a half-concentrated brain-heart infusion
broth (BHI, rt v/v, Difco Code No. 2375OO) with the NaCl
concentration adjusted to 5 g/1.
In all experiments, the top layer agar (semi-soft agar or overlay
agar) was prepared by adding 0.4% (w/v) agar to BHI. To improve the
bacteriophage plaques, O-75% (wlv) glycine (Sigma Aldrich - Poole,
United Kingdom) was added to the top layer agar (Lillehaug, 1997).
Appropriate bacterial dilutions were made in lambda buffer (6 mmol/
lTris buffer, pH7.2:1O mmol/l Mg (SO4)2.7H2O; 50 pg/ml gelatin).
Bacterial survival following treatment with the P100 phage was
determined by measuring colony-forming units (cfuig) on Modified
Oxford Listeria Selective Agar (MOX) supplemented with moxalactam
20 mg/l and colistin sulfate 10 mg/I.
2.2.2. Titration of P1O0 bacteriophage
The titer of the P100 was determined according to a protocol
suggested by EBI Food Safety (personal communication). This
consisted of serial dilutions o[ the bacteriophage suspension in
a lambda buffer, followed by the incorporation of 100 pl into 3.5 ml
of the molten overlay agar cooled to 45 "C, which contained 150 pl
of L ivanovii culture grown overnight at 30 "Cin ah strength BHl.
This was poured onto BHI agar (1.2% w/v agar) plates and incubated
at 30 "C for 20-24 h. Plaques were counted and the titer was
determined as plaque-forming units (pfu/ml).
To recover the bacteriophage from food without L monocytogenes
(phage control), the sample was diluted in lambda buffer
and an aliquot of 100 pl was incorporated into 3.5 ml of the molten
overlay agar cooled to 45 "C, which contained 150 pl of L ivanovii
(helper strain). As mentioned above, the mixture was poured onto
BHI agar (1.2% w/v agar) plates and incubated at 30 "C for 2O-24h.
Plaques were counted and the titer was determined as plaqueforming
units (pfu/g).
2.2.3. Preparation of bacteria inoculum
L monocytogenes 7l2a was subcultured at least twice by loop
inoculation of 10-ml volumes of tryptic soy broth containing 0.5%
(w/v) yeast extract (TSB-YE), which was then incubated at 35 'C for
18-20 h in a shaker at 150 rev/min. The cell suspensions were
transferred to sterile eppendorf tubes and inoculum levels were
confirmed by surface plating duplicate samples on MOX. The plates
were incubated at 37'C for 24h before colony counts"were
obtained. This experiment was repeated three times in duplicate
(Valadares, 2000). Cell suspensions were diluted in an appropriate
amount of O.l% (w/v) peptone water to give a cell number of
10s cfu/ml and were used immediately for sample inoculation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อย่างมาก (การ์เซียและ al., 2008) แอตทริบิวต์ของ bacteriophagesรวมต่อไปนี้: (i) จะฆ่าเชื้อแบคทีเรียเป้าหมายเซลล์ (ii) พวกเขาโดยทั่วไปไม่ข้ามขอบเขตของชนิดหรือสกุล และจะดังนั้นจึงไม่มีผลต่อ (a) แบคทีเรียต้องในอาหาร (e.9 สตาร์ทวัฒนธรรม); (ข) commensals ในระบบทางเดิน หรือ (c)พืชแบคทีเรียมาในสภาพแวดล้อม (iii) bacteriophagesโดยทั่วไปประกอบด้วยทั้งหมดของโปรตีน และ nucleicกรด จึงแบ่งผลิตภัณฑ์ประกอบด้วยโดยเฉพาะกรดอะมิโนและกรดนิวคลีอิก (คาร์ลตัน Noordman บิสวาส ทนต่อ& Loessner, 2005) ดังนั้น พวกเขาจะไม่ xenobiotics และ เท่ายาปฏิชีวนะและยาฆ่าเชื้อตัวแทน ผู้นำเข้า และอาจเห็นการกระจายในสภาพแวดล้อมให้เป็นการขยายกระบวนการทางธรรมชาติ (คาร์ลเอ็ด al., 2005) เมื่อเร็ว ๆ นี้USFDA ได้ประกาศว่า ได้รับการอนุมัติใช้เป็นแบคทีจาก bacteriophages แยกบริสุทธิ์ 6 เพื่อเตรียมสอบใช้พร้อมกินเนื้อและสัตว์ปีกผลิตภัณฑ์เป็นการยับยั้งจุลินทรีย์agentagainstL monoqttogenes (EBI อาหารปลอดภัย 2007) ที่แบคทีอนุมัติเตรียมรายงานให้มีประสิทธิภาพกับสายพันธุ์ที่ 170 ของ monocytogenes L (l-อ่างทอง 2006) ที่ผลิตภัณฑ์เชิงพาณิชย์ชื่อ LISTEXru P100 ได้รับการอนุมัติเป็นอาหารbiopreservative และได้รับดิกราส์ (โดยทั่วไปรู้จักเป็นเซฟ)สถานะ (FDA, 2006) การศึกษานี้ดำเนินการตรวจสอบการoflisteriaspp อยู่ ในบราซิลสดไส้กรอก และ การตรวจสอบประสิทธิภาพของ P100 ในการลดประชากรของ L monocytogenes ofiห้องปฏิบัติ inoculated บราซิลสดไส้กรอก2. วัสดุและวิธีการ2.1. lnvestigation ของออลิโอในบราซิลสดไส้กรอก2.1.1 การสุ่มตัวอย่าง และขั้นตอนการปฏิบัติตัวอย่าง 80, 40 ของสุกรและ 40 ของไก่สดที่บราซิลไส้กรอก ซื้อที่ซุปเปอร์มาร์เก็ตในซัลวาดอร์ BAบราซิล บางส่วนของ 250 g อาหารถูกเก็บรวบรวมระหว่าง asepticallyเดือนมีนาคมและ 2551 ตุลาคม และมีส่งตัวอย่างจากการสถานที่เก็บรวบรวมการปฏิบัติในกล่องเย็นฉนวนเติมน้ำแข็ง ตรวจพบแบคทีเรียในตัวอย่างวิธีการมาตรฐานของสหรัฐอเมริกากรมวิชาการเกษตร (จาก) / ความปลอดภัยของอาหารและตรวจสอบบริการ (FSIS) (จาก/FSIS ปี 2005, chap. 8.04)ใช้ L หนึ่ง monoqrtogenes บวกควบคุม (monoqrtogenes L. สก็อตA, serotype 4b, ATCC 15313) และหนึ่ง uninoculated ลบสื่อตัวควบคุมที่ใช้สำหรับแต่ละชุดตัวอย่างพร้อมวิเคราะห์หลังจาก aseptically เอาปลอกในคลาส II biosafety ตู้มีตัวอย่าง 25 กรัม (l-abconco รุ่น 36210 ระดับ BII บราซิล),ผสมผสานกับ 225 ml ของซุปปรับเปลี่ยน Universiry ของรัฐเวอร์มอนต์([JVM, 022377 ไม่มีรหัส Difco) ในแผงประดับหน้าอก (lTR รุ่น 1204serie126, Braz; i, 24O bpm) สำหรับสองนาที และ incubated ใน 24 ชมที่30 "C. รองขอทำในซุปเฟรเซอร์ (FBDifco รหัสหมายเลข 211767) ที่ 35 "C ใน 24-48 h ถ้าระดับใด ๆ ของ FBdarkening ไม่ชัด (esculin ไฮโตรไลซ์), ปริมาตร 100 pl ของซุปมีลายบนปรับเปลี่ยนออกซ์ฟอร์ดออลิ Selective Agar(MOX, Difco รหัสหมายเลข 222530), เสริม wirh moxalactam20 mg/l และ colistin ซัลเฟต 10 มก./I. แผ่นถูก incubared ที่ 35Cใน 24-48 h หลังจากนั้น 20 น้อยสงสัยว่าอาณานิคม ถ้ามีมีลายอยู่ 5% ม้าเลือด agar (agar เลือดพื้นฐาน II, Difco รหัส0045 หมายเลข 17) แผ่น และ incubated ที่ 35 "C ใน 24 ชม หลังจากคณะทันตแพทยศาสตร์มีการตรวจสอบแผ่นสำหรับอาณานิคมที่ล้อมรอบ ด้วยเขตเล็กของ p-hemolysis อาณานิคมทั่วไปถูกโอนย้ายไปซอย trypticซุป (TSB, Difco รหัสหมายเลข 211825) เสริม ด้วย 0.6% (w/v)สารสกัดจากยีสต์ (Difco รหัสหมายเลข 211929) และการทดสอบเสร็จดำเนินการในคราบกรัม กิจกรรม catalase และ motility ใน semisolidindol motility ปานกลาง (SIM, Difco รหัสหมายเลข 217578) ที่ 25Cใน 7 วัน รูปร่มทั่วไป ในชีวเคมีทดสอบเสร็จ Iisferio API (BioMerieux @ S.A., Marcy L เอตวลใช้ฝรั่งเศส) ทำภาพนิ่งสภาวะ agglutination ทดสอบตาม Seeliger และ Hohne (1979) ในการแยกทั้งหมด presumed เพื่อใช้ในเชิงพาณิชย์ได้ออลิ เตรียม antisera (Difco)2.2 การควบคุม L monocytogenes inoculated ในบราซิลสดไส้กรอกที่ใช้แบคที P10O2.2.7 การแบคทีเรีย condinons srrains แบคที สื่อ และวัฒนธรรมแบคทีเรียและใช้ในการศึกษานี้แบคที: เดียวต้องใช้ของ L. monocytogenes 1l2a แยกต่างหากจากบราซิลสดไส้กรอก ออลิ ivanovii WSLC 3009 (SLCC 4769); และแบคทีP10O (LISTEXil P100) โดย EBI อาหารปลอดภัย (อย่างไร Wageningenเนเธอร์แลนด์)L ivanovii ถูกใช้เป็นผู้ช่วยเหลือต้องใช้แบคที P100(คาร์ลเอ็ด al., 2005 Loessner & Busse, 1990) สายพันธุ์วัฒนธรรมถูกเก็บไว้ในสื่อ Hogness (1.3 mM KzHPOa.3HzO; 1.3 มม.KHzPOai 2.0 มม.ซิเตรต-Na.2HzO มม. 1.0 MgSO q.7HzO 4.4% (v lv)กลีเซอร) และแช่แข็งที่-80 " c ก่อนใช้ L monocytogenesวัฒนธรรมเรียกใช้ในซุปถั่วเหลือง tryptic เสริม ด้วย 0.5%สารสกัดจากยีสต์ (w/v) (TSB-เย) ที่ 35 "C ค้างแรมในเชคเกอร์ (Cientecรุ่น CT 712 บราซิล) ที่เรฟ 150 min L ivanovii วัฒนธรรมได้โตค้างคืนที่ 30 "C ในคอนกรีตเข้มข้นครึ่งสมองหัวใจซุป (BHI, rt v/v, 2375OO หมายเลขรหัส Difco) กับ NaClปรับความเข้มข้น 5 กรัม/1ในการทดลองทั้งหมด agar ชั้นบนสุด (agar กึ่งอ่อนหรือซ้อนทับagar) ถูกเตรียม โดยการเพิ่ม 0.4% (w/v) agar BHI การปรับปรุงการแบคที plaques, O - 75% (wlv) glycine (ซิก Aldrich - Pooleราชอาณาจักรสหรัฐ) ถูกเพิ่ม agar ชั้นบนสุด (Lillehaug, 1997)เหมาะ dilutions แบคทีเรียที่เกิดขึ้นในบัฟเฟอร์แลมบ์ดา (6 mmol /lTris กันชน pH7.2:1O mmol/l มิลลิกรัม (SO4) 2.7H2O 50 pg/ml ตุ๋น)มีแบคทีเรียอยู่รอดต่อการรักษา ด้วย P100 phageตามหน่วยวัดที่เป็นโคโลนี (cfuig) ในการปรับปรุงออกซ์ฟอร์ดออลิ Selective Agar (MOX) เสริม ด้วย moxalactam20 mg/l และ colistin ซัลเฟต 10 มก. / ฉัน2.2.2. การไทเทรตของแบคที P1O0Titer ของ P100 ถูกกำหนดตามโพรโทคอลแนะนำ โดย EBI อาหารปลอดภัย (สื่อสาร) นี้ประกอบด้วยอนุกรม dilutions o [การแบคทีระงับในบัฟเฟอร์แลมบ์ดา ตามประสาน 100 pl เป็น 3.5 mlของ agar ซ้อนทับหลอมเหลวระบายความร้อนด้วยการ 45 " C ซึ่งมีอยู่ 150 plของ L ivanovii วัฒนธรรมแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์ปลูกที่ 30 "นอา แรง BHlนี้ poured บนแผ่น BHI agar (1.2% w/v agar) และ incubatedที่ 30"นับได้ C สำหรับ 20-24 h. Plaques titer ถูกกำหนดเป็นหินปูนขึ้นรูปหน่วย (pfu/มล.)การกู้คืนแบคทีจากอาหารโดย L monocytogenes(phage ควบคุม), ตัวอย่างถูกทำให้เจือจางในบัฟเฟอร์แลมบ์ดาส่วนลงตัวที่ 100 และ pl ถูกรวมเป็น 3.5 ml ของการหลอมเหลวระบายความร้อนด้วย agar ซ้อนทับกับ 45 " C ซึ่งมีอยู่ 150 pl L ivanovii(ต้องใช้ตัวช่วย) ดังกล่าวข้างต้น ส่วนผสมถูก poured ไปแผ่น BHI agar (1.2% w/v agar) และ incubated ที่ 30 "C สำหรับ 2O - 24 ชมPlaques ถูกนับ และ titer ถูกกำหนดเป็น plaqueformingหน่วย (pfu/g)2.2.3 การเตรียม inoculum ของเชื้อแบคทีเรียL monocytogenes 7l2a ถูก subcultured โดยวนรอบที่สองinoculation ซุปถั่วเหลือง tryptic ประกอบด้วย 0.5% ปริมาณ 10 mlสารสกัดจากยีสต์ (w/v) (TSB-เย่), ซึ่งถูก incubated แล้วที่ 35 ' C สำหรับh 18-20 ในเชคเกอร์ที่เรฟ 150 นาที บริการเซลล์ได้eppendorf โอนย้ายไปใส่ท่อและระดับ inoculumยืนยัน โดยพื้นผิวที่ชุบตัวอย่างซ้ำบน MOX แผ่นมี incubated ที่ 37' C ใน 24 ชมก่อนอาณานิคมนับ "ได้ได้รับการ การทดลองนี้มีซ้ำสามครั้งในซ้ำ(Valadares, 2000) เซลล์บริการถูกทำให้เจือจางในที่เหมาะสมจำนวนน้ำ peptone O.l% (w/v) ให้จำนวนเซลล์ของ10s cfu/ml และใช้ทันทีสำหรับ inoculation ตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สงบ (การ์เซี et al., 2008) คุณลักษณะของแบคทีเรีย
รวมถึงต่อไปนี้: (i) พวกเขาฆ่าเซลล์เป้าหมายแบคทีเรีย (ii) พวกเขา
มักจะไม่ข้ามสายพันธุ์ที่หรือขอบเขตประเภทและจะ
ไม่ส่งผลกระทบดังนั้น (ก) แบคทีเรียที่ต้องการในอาหาร (E.9 สตาร์ท.
วัฒนธรรม); (ข) commensals ในระบบทางเดินอาหารหรือ (ค)
แบคทีเรียที่ประกอบในสภาพแวดล้อม; (iii) จะเกิด
มีองค์ประกอบโดยทั่วไปอย่างสิ้นเชิงของโปรตีนและนิวคลีอิก
กรดดังนั้นผลิตภัณฑ์ของพวกเขาประกอบด้วยรายละเอียดเฉพาะของ
กรดอะมิโนและกรดนิวคลีอิก (คาร์ลตัน, Noordman, Biswas, Meester,
& Loessner, 2005) ดังนั้นพวกเขาจะไม่สารแปลกปลอมและแตกต่างจาก
ยาปฏิชีวนะและสารฆ่าเชื้อ, การเปิดตัวของพวกเขาเข้าและ
จัดจำหน่ายภายในสภาพแวดล้อมที่กำหนดอาจถูกมองว่าเป็น
ส่วนหนึ่งของกระบวนการทางธรรมชาติ (คาร์ลตัน et al., 2005) เมื่อเร็ว ๆ นี้
USFDA ประกาศว่าได้รับการอนุมัติการใช้ bacteriophage
เตรียมทำจากหกแบคทีเรียบริสุทธิ์รายบุคคลเพื่อ
นำมาใช้ในความพร้อมต่อการกินผลิตภัณฑ์จากเนื้อสัตว์และสัตว์ปีกเป็นยาต้านจุลชีพ
monoqttogenes agentagainstL (EBI ความปลอดภัยด้านอาหาร 2007)
ได้รับการอนุมัติการจัดทำ bacteriophage มีรายงานว่ามีประสิทธิภาพ
กับ 170 สายพันธุ์ของ monocytogenes L (L-อัง, 2006)
ผลิตภัณฑ์ในเชิงพาณิชย์ชื่อ LISTEXru P100 ได้รับการอนุมัติเป็นอาหาร
biopreservative และได้รับ GRAS (ได้รับการยอมรับโดยทั่วไปว่าปลอดภัย)
สถานะ (องค์การอาหารและยา, 2006) การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบ
oflisteriaspp การแสดงตน ในไส้กรอกสดบราซิลและในการตรวจสอบ
ประสิทธิภาพของ P100 ในการลดประชากรของ monocytogenes L Ofi
ห้องปฏิบัติการเชื้อบราซิลไส้กรอกสด.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 lnvestigation ของ Listeria spp ในไส้กรอกสดบราซิล
2.1.1 การเก็บตัวอย่างและวิธีการตรวจทางห้องปฏิบัติการ
สิบตัวอย่างสุกร 40 และ 40 ของไก่สดบราซิล
ไส้กรอกถูกซื้อได้ที่ซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่นในซัลวาด, BA,
บราซิล บางส่วนของ 250 กรัมของอาหารที่ถูกเก็บรวบรวมปลอดเชื้อระหว่าง
เดือนมีนาคมและเดือนตุลาคมของปี 2008 และถูกส่งตัวอย่างจาก
สถานที่เก็บรวบรวมไปยังห้องปฏิบัติการในกล่องเย็นฉนวนที่เต็มไป
ด้วยน้ำแข็ง เพื่อตรวจหาแบคทีเรียในตัวอย่างวิธีการมาตรฐานของ
สหรัฐอเมริกากรมวิชาการเกษตร (USDA) / ความปลอดภัยด้านอาหาร
และบริการตรวจสอบ (FSIS) (USDA / FSIS 2005 เด็กชาย. 8.04) ถูก
นำมาใช้ หนึ่ง monoqrtogenes L ควบคุมบวก (แอ monoqrtogenes สกอตต์
, 4b serotype, ATCC 15313) และเป็นหนึ่งในสื่อลำต้นเชิงลบ
การควบคุมถูกนำมาใช้สำหรับชุดของตัวอย่างที่วิเคราะห์ไปพร้อม ๆ กันในแต่ละ.
หลังจากที่ปลอดเชื้อถอดปลอกปลอดภัยทางชีวภาพในตู้ชั้นที่สอง
(L-abconco รุ่น 36210 ชั้น BII, บราซิล), ตัวอย่าง 25 กรัม
ผสมกับ 225 มิลลิลิตรดัดแปลงมหาวิทยาลัยเวอร์มอนต์น้ำซุป
([JVM, Difco รหัส 022377) ใน Stomacher (LTR รุ่น 1204,
serie126, Braz; i, 24O ครั้งต่อนาที) สำหรับ สองนาทีและบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่
30 "การเพิ่มคุณค่า C. รองได้รับการดำเนินการในน้ำซุปเฟรเซอร์ (FB,
Difco รหัสเลขที่ 211767) ที่ 35 "C เป็นเวลา 24-48 ชั่วโมง หากระดับของ FB ใด ๆ ที่
มืดได้ชัด (ไฮโดรไลซิ esculin) ปริมาณ 100 pl ของ
น้ำซุปที่ถูกดัดแปลงลายลงบนฟอร์ด Listeria Selective วุ้น
(MOX, Difco รหัสเลขที่ 222530) เสริม wirh moxalactam
20 mg / l และโคลิสตินซัลเฟต 10 mg / ฉัน แผ่นถูก incubared ที่ 35 .C
สำหรับ 24-48 ชั่วโมง หลังจากนั้นไม่น้อยกว่า 20 โคโลนีที่ต้องสงสัยหากมี
ถูกลายในวันที่ 5% ม้าวุ้นเลือด (เลือดฐานวุ้น II, Difco รหัส
เลขที่ 0045/17) จานและบ่มที่อุณหภูมิ 35 "C เป็นเวลา 24 ชม. หลังจากการบ่ม
แผ่นถูกตรวจสอบ อาณานิคมล้อมรอบด้วยโซนเล็ก ๆ
ของ P-hemolysis. อาณานิคมโดยทั่วไปถูกย้ายไปถั่วเหลือง tryptic
น้ำซุป (TSB, Difco รหัสเลขที่ 211825) เสริมด้วย 0.6% (w / v)
สารสกัดจากยีสต์ (Difco รหัสเลขที่ 211929) และการทดสอบยืนยัน ได้รับการ
ดำเนินการในการย้อมแกรม, กิจกรรม catalase และการเคลื่อนที่ในกึ่งของแข็ง
กลางเคลื่อนที่ Indol (SIM, Difco รหัสเลขที่ 217578) ที่ 25 .C
เจ็ดวันสำหรับรูปร่างร่มทั่วไป. ชีวเคมีสำหรับ
การทดสอบยืนยัน Iisferio API (bioMerieux @ SA มาร์ซี่ L Etoile,
ฝรั่งเศส) ถูกนำมาใช้. การทดสอบการเกาะติดกันสไลด์ทางภูมิคุ้มกันได้ทำ
ตาม Seeliger และโฮห์ (1979) ในทุกแยกสันนิษฐานว่า
เป็น Listeria โดยใช้ฉีดที่เตรียมในเชิงพาณิชย์ (Difco).
2.2. การควบคุมของ L monocytogenes เชื้อในสดบราซิล
ไส้กรอกใช้ P10O bacteriophage
. 2.2.7 แบคทีเรีย srrains, bacteriophage สื่อและวัฒนธรรม condinons
เชื้อแบคทีเรียและไวรัสทำลายแบคทีเรียที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีเพียงหนึ่งเดียว
ของสายพันธุ์ L. monocytogenes 1l2a แยกออกจากบราซิลสด
ไส้กรอก; Listeria ivanovii WSLC 3009 (SLCC 4769); และ bacteriophage
P10O (LISTEXil P100) ให้บริการโดย EBI ความปลอดภัยด้านอาหาร (Wageningen,
เนเธอร์แลนด์).
L ivanovii ถูกใช้เป็นสายพันธุ์ผู้ช่วยสำหรับ bacteriophage P100
(คาร์ลตันและคณะ, 2005;. Loessner และบุส, 1990) สายพันธุ์วัฒนธรรม
ถูกเก็บไว้ในกลาง Hogness (1.3 มิลลิ KzHPOa.3HzO 1.3 มิลลิ
KHzPOai 2.0 มิลลิ citrate-Na.2HzO; 1.0 มิลลิ MgSO q.7HzO; 4.4% (V lv)
กลีเซอรอล) และแช่แข็งที่ -80 "ซี ก่อนที่จะใช้ L monocytogenes
วัฒนธรรมได้รับการเปิดใช้งานในน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic เสริมด้วย 0.5%
(w / v) สารสกัดจากยีสต์ (TSB-YE) ที่ 35 "C ค้างคืนในเครื่องปั่น (Cientec
รุ่น CT 712, บราซิล) ที่ 150 รอบ / นาที . L ivanovii วัฒนธรรมได้รับการ
ปลูกค้างคืนที่ 30 "ซีในครึ่งเข้มข้นสมองหัวใจแช่
น้ำซุป (BHI, RT v / v, Difco รหัสเลข 2375OO) ที่มีโซเดียมคลอไรด์
ความเข้มข้นปรับให้ 5 กรัม / 1.
ในการทดลองทั้งหมด วุ้นชั้นบนสุด (วุ้นกึ่งอ่อนหรือซ้อนทับ
วุ้น) ถูกจัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม 0.4% (w / v) วุ้นจะ BHI เพื่อปรับปรุง.
โล่ bacteriophage, O-75% (WLV) ไกลซีน (Sigma ดิช - พูล,
สหราชอาณาจักร ) ถูกบันทึกอยู่ในชั้นบนวุ้น (. Lillehaug, 1997)
เจือจางแบคทีเรียที่เหมาะสมได้ทำในบัฟเฟอร์แลมบ์ดา (6 mmol /
บัฟเฟอร์ lTris, pH7.2: 1O มิลลิโมล / ลิตร Mg (SO4) 2.7H2O 50 PG / เจลาติน ml) .
การอยู่รอดของแบคทีเรียรักษาต่อไปนี้กับทำลายจุลินทรีย์ P100 ถูก
กำหนดโดยการวัดหน่วยอาณานิคมขึ้นรูป (cfuig) เมื่อวันที่ดัดแปลง
Oxford Listeria Selective วุ้น (MOX) เสริมด้วย moxalactam
20 mg / l และซัลเฟตโคลิสติน 10 mg / ฉัน.
2.2.2. การไทเทรตของ P1O0 bacteriophage
titer ของ P100 ถูกกำหนดตามโปรโตคอล
แนะนำโดย EBI ความปลอดภัยด้านอาหาร (การสื่อสารส่วนบุคคล). นี้
ประกอบด้วยเจือจางอนุกรม o [ระงับ bacteriophage ใน
บัฟเฟอร์แลมบ์ดาตามด้วยการรวมตัวกันของ 100 pl เป็น 3.5 มล
ของ วุ้นซ้อนทับหลอมเหลวเย็นถึง 45 "ซีซึ่งมีอยู่ 150 pl
ของ L ivanovii วัฒนธรรมเติบโตค้างคืนที่ 30 "อาความแข็งแรง Cin BHL.
นี้ถูกเทลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อ BHI (1.2% w / v วุ้น) แผ่นและบ่ม
ที่ 30 "C เป็นเวลา 20 -24 ชั่วโมง โล่นับ titer และถูก
กำหนดเป็นหน่วยแผ่นโลหะขึ้นรูป (PFU / ml).
การกู้คืน bacteriophage จากอาหารโดยไม่ต้อง L monocytogenes
(การควบคุมการทำลายจุลินทรีย์) ตัวอย่างถูกเจือจางในบัฟเฟอร์แลมบ์ดา
และ aliquot 100 pl เป็น บริษัท ใน 3.5 มิลลิลิตรหลอมเหลว
วุ้นซ้อนทับระบายความร้อนถึง 45 "ซีซึ่งมีอยู่ 150 pl ของ L ivanovii
(สายพันธุ์ผู้ช่วย). ดังกล่าวข้างต้นผสมถูกเทลงบน
อาหารเลี้ยงเชื้อ BHI (1.2% w / v วุ้น) จานและบ่มที่อุณหภูมิ 30 "C สำหรับ 2O-24h.
โล่นับ titer และถูกกำหนดเป็น plaqueforming
หน่วย (PFU / กรัม).
2.2.3 การเตรียมหัวเชื้อแบคทีเรีย
L monocytogenes 7l2a ได้รับเชื้ออย่างน้อยสองครั้งโดยห่วง
การฉีดวัคซีนของปริมาณ 10 มิลลิลิตรของน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic ที่มี 0.5%
(w / v) สารสกัดจากยีสต์ (TSB-YE) ซึ่งถูกบ่มแล้วที่ 35 'C เป็นเวลา
18 -20 ชั่วโมงในเครื่องปั่นที่ 150 รอบ / นาที สารแขวนลอยเซลล์ถูก
โอนไปผ่านการฆ่าเชื้อหลอด Eppendorf และระดับหัวเชื้อที่ได้รับ
การยืนยันจากตัวอย่างชุบผิวที่ซ้ำกันใน MOX แผ่น
บ่มที่อุณหภูมิ 37'C สำหรับ 24 ชั่วโมงก่อนที่จะนับอาณานิคม "ได้รับการ
ได้รับ. การทดลองนี้ซ้ำสามครั้งในที่ซ้ำกัน
(Valadares, 2000). สนองของเซลล์ที่ถูกเจือจางในที่เหมาะสม
ปริมาณของเฒ่า% (w / v) น้ำเปปโตนที่จะ ให้จำนวนเซลล์ของ
10s cfu / ml และได้รับการใช้งานได้ทันทีสำหรับการฉีดวัคซีนตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไม่ถูกรบกวน ( การ์เซีย et al . , 2008 ) คุณลักษณะของแบคทีริโอฟาดจ์
รวมถึงต่อไปนี้ : ( i ) จะฆ่าแบคทีเรียเซลล์เป้าหมาย ( 2 ) พวกเขา
โดยทั่วไปจะไม่ข้ามชนิดหรือสกุล ขอบเขต และจะไม่ส่งผลกระทบต่อ
ดังนั้น ( 1 ) ต้องการแบคทีเรียในอาหาร ( e.9 . starter
วัฒนธรรม ) ; ( b ) commensals ในระบบทางเดินอาหาร หรือ ( C )
ประกอบ bacterial flora ในสิ่งแวดล้อม( 3 ) แบคทีริโอฟาดจ์
โดยทั่วไปจะประกอบด้วยทั้งหมดของโปรตีนและกรดนิวคลีอิก
ดังนั้นผลิตภัณฑ์สลายของพวกเขาประกอบด้วยเฉพาะของ
กรดอะมิโนกรดนิวคลีอิก ( คาร์ลตัน noordman บิสวาส Meester , , ,
& loessner , 2005 ) ดังนั้นพวกเขาจะไม่ xenobiotics , และ , ซึ่งแตกต่างจากยาปฏิชีวนะและยาฆ่าเชื้อ
ตัวแทนของพวกเขาในการแนะนำและให้สภาพแวดล้อมภายใน

อาจจะเห็นเป็นส่วนขยายของกระบวนการธรรมชาติ ( คาร์ลตัน et al . , 2005 ) เมื่อเร็ว ๆ นี้
USFDA ประกาศว่าได้อนุมัติการใช้ของแบคเทอริโอเฟจ
เตรียมทำจากหกแยกบริสุทธิ์แบคทีริโอฟาดจ์

ใช้พร้อมที่จะกินเนื้อและผลิตภัณฑ์จากสัตว์ปีกเป็นจุลชีพ
agentagainstl monoqttogenes ( ตู้ อาหารกุ้ง 2007 )
อนุมัติการเตรียมรายงานจะมีประสิทธิภาพ
Bacteriophageกับ 170 สายพันธุ์ ผม monocytogenes ( l-ang , 2006 )
ผลิตภัณฑ์เชิงพาณิชย์ที่ชื่อ listexru p100 ได้รับอนุมัติเป็นอาหาร
biopreservative และได้รับราส์ ( ยอมรับโดยทั่วไปเป็นที่ปลอดภัย )
สถานะ ( FDA , 2006 ) การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษา
ตน oflisteriaspp . ไส้กรอกสดของบราซิล และศึกษาประสิทธิภาพของ p100
ในการลดประชากรของ monocytogenes Ofi
lห้องปฏิบัติการเชื้อไส้กรอกสดบราซิล .
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . ฝ่ายตรวจสอบของ Listeria spp . ในบราซิลไส้กรอกสด
2.1.1 . การสุ่มตัวอย่างและปฏิบัติการขั้นตอน
ตัวอย่าง 80 , 40 และ 40 ของสุกรไก่บราซิลสด
ไส้กรอก , ซื้อที่ซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่นใน Salvador , BA ,
บราซิล ส่วนของ 250 กรัมของอาหาร ได้แก่ aseptically
เก็บระหว่างมีนาคม และตุลาคมของปี 2008 และตัวอย่างถูกขนส่งจาก
สถานที่ของคอลเลกชันห้องปฏิบัติการในกล่องหุ้มฉนวนความร้อนเย็นเต็ม
น้ำแข็งด้วย การตรวจหาแบคทีเรียในตัวอย่างวิธีการมาตรฐานของ
สหรัฐอเมริกากรมวิชาการเกษตร ( USDA ) / ความปลอดภัยของอาหารและการตรวจสอบ Service ( FSIS )
( USDA FSIS / 2548 CHAP 8.04 ) คือ
ใช้ . หนึ่งที่ผม monoqrtogenes บวกการควบคุม ( L . monoqrtogenes สก๊อต
Aเป็น type 4B , ATCC 15313 ) และการใช้สื่อด้านลบ
ควบคุมสำหรับแต่ละชุดของพร้อมวิเคราะห์ตัวอย่าง
หลังจาก aseptically ถอดปลอกใน คลาส สอง ความปลอดภัยทางชีวภาพตู้
( l-abconco แบบ 36210 คลาส bii , บราซิล ) , ตัวอย่าง 25 กรัมจำนวน 225 มิลลิลิตร ผสมด้วย

แก้ไขมหาวิทยาลัยเวอร์มอนต์ซุป ( JVM difco , รหัส 022377 แผงประดับหน้าอก ( LTR ) ในรูปแบบอย่าง serie126 braz ;
, ,ผม 24o BPM ) 2 นาทีและบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ที่
30 " เสริมรอง C แสดงใน Fraser broth ( FB
difco รหัสไม่ 211767 ) ที่ 35 " เป็นเวลา 24-48 ชั่วโมงถ้าระดับของ FB
ความชัดเจน ( esculin hydrolysis ) ปริมาณ 100 PL ของ
broth คือ ลายบนแก้ไข Oxford Listeria เลือกวุ้น
( ทันที , difco รหัสไม่ 222530 เสริม wirh ม็ ซาแลคแตม
)20 มิลลิกรัมต่อลิตร และน้ำมันดีเซลหมุนเร็วซัลเฟต 10 mg / I . จานเป็น incubared 35 C
24-48 ชั่วโมง หลังจากนั้น อย่างน้อย 20 สงสัยอาณานิคม ถ้าใช้ได้
ลาย 5 % ม้าเลือด ( เลือดวุ้นฐาน II รหัส
difco ไม่ 0045 / 17 ) แผ่นและบ่มที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียส สำหรับ 24 ชั่วโมง หลังจากระยะเวลา
แผ่นมีวัตถุประสงค์เพื่ออาณานิคมล้อมรอบ
โซนเล็กๆ ของ p-hemolysis .โดยทั่วไป คือ ซุปถั่วเหลืองอาณานิคม
อาหาร ( TSB , รหัส difco ไม่ 211825 ) เสริมด้วย 0.6 % ( w / v )
ยีสต์สกัด ( difco รหัสไม่ 211929 ) และการทดสอบเชิงถูก
ดำเนินการสำหรับกรัมคราบสามารถกิจกรรมและการเคลื่อนที่ใน semisolid
อินดอลการเคลื่อนที่ขนาดกลาง ( ซิม difco รหัสไม่ 217578 ) ที่ 25 c
7 วัน สำหรับรูปร่างร่มทั่วไป สำหรับการทดสอบเชิงชีวเคมี
,iisferio API ( biomerieux @ SA , Marcy L เ
, ฝรั่งเศส ) คือใช้ มูลนิธิเพื่อเด็กพิการทางสไลด์เสร็จ
ตามซีลิเกอร์ hohne ( 1979 ) และทุกสายพันธุ์สันนิษฐานว่า
เป็น Listeria ที่ใช้ในเชิงพาณิชย์เตรียมแอนติ ( difco ) .
2.2 . การควบคุมของเชื้อ L monocytogenes ไส้กรอกสด

2.2.7 บราซิลใช้แบคทีริโอเฟจ p10o . srrains แบคเทอริโอเฟจแบคทีเรีย , ,สื่อและวัฒนธรรม condinons
แบคทีเรียและโรงพยาบาลที่ใช้ในการวิจัย ได้แก่ สายพันธุ์เดียว
L monocytogenes 1l2a แยกจากไส้กรอกสด
บราซิล ; Listeria ivanovii wslc 3009 ( slcc 4769 ) ; และแบคเทอริโอเฟจ
p10o ( listexil p100 ) ให้ความปลอดภัยอาหาร ( Wageningen , เนเธอร์แลนด์

ผม ivanovii คือ ) ใช้เป็นผู้ช่วยความเครียดสำหรับ p100 ถึงอย่างไรก็ตาม
( คาร์ลตัน et al . , 2005loessner & busse , 2533 ) สายพันธุ์วัฒนธรรม
ถูกเก็บไว้ใน hogness ขนาดกลาง ( 1.3 มม. kzhpoa.3hzo ; 1.3 mm
khzpoai 2.0 มม. citrate-na.2hzo ; 1.0 mM MgSO q.7hzo ; 4.4 % ( v
LV ) กลีเซอรอล ) และแช่แข็งที่อุณหภูมิ - 80 " ซีก่อนใช้ ผม monocytogenes
วัฒนธรรมทำงานในซุปถั่วเหลืองอาหารเสริม 0.5 %
( น้ำหนัก / ปริมาตร ) สารสกัดจากยีสต์ ( tsb-ye ) ที่ 35 " C ค้างคืนในเครื่องปั่น ( 712 cientec
รุ่น CT ,บราซิล ) 150 รอบ / นาที ผม ivanovii วัฒน
โตค้างคืนที่ 30 องศาเซลเซียส ในครึ่ง น้ำซุปเข้มข้นสมองแช่
หัวใจ ( BHI , RT V / V , difco รหัส 2375oo เปล่า ) กับเกลือ
ความเข้มข้นปรับ 5 กรัม / 1 .
ในการทดลองทั้งหมดใช้เลเยอร์บนสุด ( กึ่ง วุ้นนุ่ม หรือ โอเวอร์
วุ้น ) เตรียมโดยการเพิ่ม 1% ( w / v ) วุ้นให้ bhi . เพื่อปรับปรุง
ถึงอย่างไรก็ตามโล่ ,o-75 % ( wlv ) Glycine ( ซิกม่า Aldrich - Poole
สหราชอาณาจักร ) ถูกเพิ่มลงในวุ้น ชั้นบนสุด ( lillehaug , 1997 ) .
ที่เหมาะสมแบคทีเรียเจือจางอยู่ในเรือเหาะบัฟเฟอร์ ( 6 mmol /
ltris บัฟเฟอร์ ph7.2:1o มิลลิโมล / ลิตรมก. ( ปา ) 2.7h2o ; 50 pg / ml
เจลาติน ) การอยู่รอดของแบคทีเรียต่อไปนี้การรักษาด้วย p100 ฟาถูกกำหนดโดยวัดเป็นหน่วยอาณานิคม

( cfuig ) แก้ไขOxford Listeria ( MOX ) การเสริมด้วยม็ ซาแลคแตม
20 มิลลิกรัมต่อลิตร และน้ำมันดีเซลหมุนเร็วซัลเฟต 10 mg / I .
2.2.2 . ที่มี p1o0 ถึงอย่างไรก็ตาม
ไตเตอร์ของ p100 ตั้งใจตามโปรโตคอล
แนะนำความปลอดภัยอาหาร ( การสื่อสารส่วนบุคคล ) นี้คือวิธีการอนุกรม
o
[ โรงพยาบาลชั่วคราวในบัฟเฟอร์แบบ แลมด้า ตามด้วยการลง 3.5 ml
100 .ของหล่อหุ้มวุ้นเย็น 45 C ซึ่งมี 150 PL
วัฒนธรรม ivanovii ผมเติบโตค้างคืนที่ 30 " ซินอาแรง bhl .
นี้ถูกเทลงบน BHI ( 1.2 % W / V วุ้น ) แผ่นและบ่ม
ที่ 30 " C . โล่ถูกนับและ 20-24 คือ
: กำหนดหน่วยเป็นรูปโล่ ( พีเอฟยู / ml ) .
เอาแบคเทอริโอเฟจจากอาหารโดยไม่ต้องฉัน monocytogenes
( ควบคุมฟา )ตัวอย่างที่เจือจางใน
บัฟเฟอร์แลมบ์ดาและส่วนลงตัว 100 PL ถูกรวมเข้าไปใน 3.5 ml ของหล่อ
ซ้อนทับวุ้นเย็น 45 C ซึ่งมี 150 คุณ L ivanovii
( ผู้ช่วยเมื่อย ) ดังกล่าวข้างต้น ส่วนผสมจะถูกเทลงบน
BHI ( 1.2 % W / V วุ้น ) แผ่นและบ่มที่อุณหภูมิ 30 C 2o-24h .
โล่ถูกนับและค่าถูกกำหนดเป็น plaqueforming
หน่วย ( พีเอฟยู / g )
2.2.3 .การเตรียมเชื้อแบคทีเรีย
L monocytogenes 7l2a คือ subcultured อย่างน้อยสองครั้ง โดยห่วง
10 ml ใส่ปริมาณของอาหารอาหารที่มีถั่วเหลือง 0.5 %
( w / v ) สารสกัดจากยีสต์ ( tsb-ye ) ซึ่งถูกบ่มที่อุณหภูมิ 35 ' C
1 H ในเครื่องปั่นที่ 150 รอบ / นาที เซลล์แขวนลอยอยู่
ย้ายไปฆ่าเชื้อหลอดและระดับ
เชื้อเพนดอร์ฟยืนยันโดยการชุบผิวตัวอย่างซ้ำบนทันที . จาน
อุณหภูมิ 37'c สำหรับ 24 ชั่วโมงก่อนอาณานิคมนับ "
) ทดลองซ้ำ 3 ครั้ง ซ้ำ
( valadares , 2000 ) เซลล์แขวนลอยถูกเจือจางในปริมาณที่เหมาะสมของ o.l
% ( w / v ) เปปโตนน้ำที่จะให้เบอร์มือถือของ
CFU / 100 ml และใช้ทันทีสำหรับตัวอย่างการฉีดวัคซีน