To analyze the complexity of the mi

To analyze the complexity of the microbial community in the
bioaerosol generated from the composting pile, DNA was sampled
from all bacterial colonies grown on plates used in this study in order
to obtain a sufficient amount for this analysis.
DNA extraction: 0.25 g of bacterial colonies in 5 mL of sterile
water was vortexed for 3 min, and the supernatant was centrifuged
at 13,000 rpm for 5 min. A DNA extraction kit (Power Soil DNA Isolation
Kit; MoBio Laboratories, USA) was used for the extraction of
DNA from the sample.
PCR amplification: The PCR primers 10f and 1400r were used to
amplify the 16S rDNA gene from the extracted DNA template. The
primers 341f and 518r were used to amplify the bacterial V3 region
of the 16S rDNA. The sequences of the primers used were as follows:
10f, AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG; 1400r, AGC GGC GGT
GTG TAC AAG; 341f, CCT ACG GGA GGC AGC AG; and 518, ATT
ACC GCG GCT GCT GG. PCRs were performed on an UVIgene™ thermocycler.
The reaction mix contained 10h-Taq buffer (5 lL),
10 mM dNTP mix (1 lL), each primer (2 lL), 5Band doctor
(10 lL), h-Taq (0.5 lL), and DNA template (2 lL); sterile deionized
water was added to a final volume of 50 lL. The following PCRs
conditions were applied: 95 C for 9 min; 35 cycles of denaturation
at 95 C for 1 min, annealing at 35 C for 1 min, and extension at
72 C for 2 min; and a final extension at 72 C for 10 min. PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์ความซับซ้อนของจุลินทรีย์ในการbioaerosol สร้างจากกอง composting ดีเอ็นเอเป็นตัวอย่างจากอาณานิคมทั้งหมดแบคทีเรียเติบโตบนแผ่นที่ใช้ในการศึกษานี้ในใบสั่งได้รับยอดเงินเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์นี้สกัดดีเอ็นเอ: 0.25 g ของอาณานิคมใน 5 mL ของฆ่าเชื้อแบคทีเรียน้ำที่ถูก vortexed ใน 3 นาที และถูก centrifuged supernatantที่ 13000 รอบต่อนาทีสำหรับ 5 นาที ชุดสกัดดีเอ็นเอ (ไฟฟ้าดินดีเอ็นเอแยกชุด ห้องปฏิบัติการ MoBio สหรัฐอเมริกา) ใช้สำหรับสกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่างPCR ขยาย: PCR ไพรเมอร์ 10f และ 1400r เคยใช้ขยายยีน rDNA 16S จากแบบแยกดีเอ็นเอ ที่ไพรเมอร์ใช้ขยายภาค V3 แบคทีเรีย 341f และ 518rของ 16S rDNA ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้มีดังนี้:10f ตู้ GTT TGA TCM TGG CTC AG 1400r, AGC GGC GGTเอเอจีมาตรวัด GTG 341f, CCT จีบ GGA GGC AGC AG 518, ATT และบัญชี GCG GCT GCT GG PCRs ได้กระทำกับการ thermocycler UVIgene ™ผสมปฏิกิริยาอยู่ 10 h-Taq บัฟเฟอร์ (5 lL),ผสม dNTP 10 mM (1 lL), รองพื้นแต่ละ (2 จะ), 5 วงแพทย์(10 จะ), h-Taq (0.5 จะ), และดีเอ็นเอแม่แบบ (2 lL); กอซ deionizedน้ำถูกเพิ่มปริมาตรสุดท้ายของ 50 จะ PCRs ต่อไปนี้ใช้เงื่อนไข: C 95 ในนาทีที่ 9 รอบ 35 ของ denaturationที่ C 95 ใน 1 นาที การอบเหนียวที่ 35 C 1 นาที และC 72 สำหรับ 2 นาที และนามสกุลเป็นขั้นสุดท้ายที่ 72 C สำหรับ 10 นาที PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ความซับซ้อนของชุมชนจุลินทรีย์ใน
bioaerosol สร้างขึ้นจากกองปุ๋ยหมักดีเอ็นเอเป็นตัวอย่าง
จากแบคทีเรียทั้งหมดที่ปลูกในแผ่นที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้เพื่อ
ที่จะได้รับในปริมาณที่เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์นี้
สกัดดีเอ็นเอ: 0.25 กรัมของแบคทีเรีย ใน 5 มิลลิลิตรผ่านการฆ่าเชื้อ
น้ำการ vortex เวลา 3 นาทีและใสถูกหมุนเหวี่ยง
ที่ 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที ชุดสกัดดีเอ็นเอ (อำนาจดินการแยกดีเอ็นเอ
ชุด; Mobio ห้องปฏิบัติการ, USA) ที่ใช้สำหรับการสกัด
ดีเอ็นเอจากตัวอย่าง
การขยาย PCR: PCR ไพรเมอร์ที่ 10 และ 1400r ถูกนำมาใช้ในการ
ขยายยีน 16S rDNA จากแม่แบบดีเอ็นเอที่สกัด
ไพรเมอร์ 341f และ 518r ถูกนำมาใช้ในการขยายภูมิภาค V3 แบคทีเรีย
ของ 16S rDNA ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้มีดังนี้
10, AGA GTT TGA TCM CTC TGG AG; 1400r, อาซาฮี GGC GGT
GTG TAC AAG; 341f, CCT ACG GGA GGC อาซาฮีจี; และ 518, ATT
ACC GCG จีซีทีจีซีที GG PCRs ได้ดำเนินการในเครื่อง thermocycler UVIgene ™
ผสมปฏิกิริยาที่มีอยู่ 10? บัฟเฟอร์ H-Taq (5 lL)
ผสม 10 มิลลิ dNTP (1 lL) แต่ละประถมศึกษา (2 lL) 5? วงแพทย์
(10 lL), H -Taq (0.5 lL) และดีเอ็นเอแม่แบบ (2 lL); ปราศจากไอออนผ่านการฆ่าเชื้อ
น้ำที่ถูกบันทึกอยู่ในเล่มสุดท้ายของ 50 lL PCRs ต่อไปนี้
เงื่อนไขถูกนำไปใช้: 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 9 นาที; 35 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ
ที่ 95 C เป็นเวลา 1 นาที, อบที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและนามสกุลที่?
72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที; และนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิเคราะห์ความซับซ้อนของชุมชนจุลินทรีย์ใน
ละอองลอยชีวภาพที่สร้างขึ้นจากกองหมัก ดีเอ็นเอของตัวอย่าง
จากอาณานิคมแบคทีเรียเติบโตบนจานที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ เพื่อ
ที่จะได้รับเงินเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์นี้ .
: 0.25 กรัม การสกัดดีเอ็นเอจากโคโลนีใน 5 มล. ของน้ำหมัน
คือ vortexed สำหรับ 3 นาที และนำอยู่ที่ 13 , 000 รอบต่อนาทีระดับ
5 นาทีการสกัดดีเอ็นเอชุด ( พลังดินการสกัดดีเอ็นเอ
ชุด ; mobio ห้องปฏิบัติการ , USA ) ถูกใช้ในการสกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่าง
.
PCR PCR ไพรเมอร์และขยาย : 10f 1400r ใช้
ขยาย 16S rDNA ยีนจากการสกัดดีเอ็นเอแม่แบบ
341f 518r ไพรเมอร์และถูกใช้เพื่อขยายเขตของ V3
ของ 16S rDNA . ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้มีดังนี้ 10f
,อย่างไรก็ตาม gtt TGA TCM tgg CTC AG ; 1400r AGC , ggc GGT
GTG แทคเท่านั้น ; 341f , ซีซี ACG ก๊ะ ggc อาซาฮี เอจี และ 518 , ATT
บัญชี gcg จีซีที GCT GG . pcrs จำนวนหนึ่ง uvigene ™เทอร์มอไซเคล ์ .
ปฏิกิริยาผสมจำนวน 10 h-taq  บัฟเฟอร์ ( 5 จะ )
ผสม dntp 10 มม. ( 1 จะ ) แต่ละสีรองพื้น ( จะ ) , 5  วงดนตรีหมอ
( จะ ) h-taq ( 0.5 จะ ) , และแม่แบบดีเอ็นเอ ( 2 ll ) เป็นหมันคล้ายเนื้อเยื่อประสาน
น้ำเพิ่มปริมาณสุดท้ายที่ 50 จะตามสภาพใช้ pcrs
: 95  องศาเซลเซียสเป็นเวลา 9 นาที ; 3 รอบ (
 95 องศาเซลเซียสนาน 1 นาที อบอ่อนที่อุณหภูมิ 35  C เป็นเวลา 1 นาที และนามสกุลที่
72  C เป็นเวลา 2 นาที และงานสุดท้ายที่ 72  C 10 นาที )