inoculate 5 mL of LB medium supplemented with 100 g mL−1of ampicillin, incubated at 37◦C for 18 h. For expression, 2 mL ofseed culture were subsequently used to inoculate 198 mL of LB, Ter-rific Broth (TB) (tryptone 12 g L−1, yeast extract 24 g L−1, KH2PO42,31 g L−1, K2HPO412,54 g L−1, pH 7 and ampicillin 100 ug.mL−1)or TB supplemented (TB media with glycerol 4 mL L−1). This cul-ture was incubated in 1 L Erlenmeyer flasks at 37◦C in an orbitalshaker, until the OD600nmreached between 0.5 and 0.7. Then, theexpression was initiated by addition of 1 mM IPTG. Samples werecollected at times 0 h (shortly before induction) and 0.25 h, 0.5 h,1 h, 2 h, 3 h and 4 h, then harvested by centrifugation at 5000 × g for10 min at 4◦C. The cell pellet was recovered and stored at −80◦C.
ฉีด 5 มล.ของปอนด์กลางเสริม ด้วยโกคอ mL−1of 100 กรัม รับการกกที่ 37◦C สำหรับ 18 h สำหรับนิพจน์ 2 mL ofseed วัฒนธรรมต่อมาใช้ในการฉีด mL 198 ปอนด์ ซุป Ter rific (TB) (tryptone 12 g L−1 สารสกัดจากยีสต์ 24 กรัม L−1, KH2PO42, 31 g L−1, K2HPO412, 54 g L−1, pH 7 และ ug.mL−1)or 100 โกคอ TB เสริม (TB สื่อกับกลีเซอรอล 4 mL L−1) Cul-ture นี้ incubated ในขวด Erlenmeyer 1 ลิตรเวลาในการ orbitalshaker, 37◦C จนถึง OD600nmreached 0.5 และ 0.7 แล้ว theexpression ที่เริ่ม โดยเพิ่ม 1 มม. IPTG ตัวอย่าง werecollected (ก่อนที่จะเหนี่ยวนำ) เวลา 0 h และ 0.25 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 3 ชั่วโมง และ 4 h แล้วเก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 5000 × g for10 นาทีที่ 4◦C เม็ดเซลล์ถูกกู้คืน และเก็บไว้ที่ −80◦C
การแปล กรุณารอสักครู่..

ฉีดวัคซีนขนาด 5 ml ของกลาง LB เสริมด้วย 100 กรัม ML-1of ampicillin, บ่มที่37◦Cสำหรับ 18 ชั่วโมง สำหรับการแสดงออก 2 มลวัฒนธรรม ofseed ถูกนำมาใช้ในการฉีดวัคซีน 198 มล LB, Ter-rific น้ำซุป (TB) (Tryptone 12 กรัม L-1, สารสกัดจากยีสต์ 24 กรัม L-1, L-1 KH2PO42,31 กรัม K2HPO412, 54 กรัม L-1, ค่า pH 7 และ ampicillin 100 ug.mL-1) หรือวัณโรคเสริม (Media วัณโรคกับกลีเซอรอล 4 มิลลิลิตร L-1) Cul-ture นี้ถูกบ่มในขวด 1 ลิตร Erlenmeyer ที่37◦Cใน orbitalshaker จน OD600nmreached ระหว่าง 0.5 และ 0.7 จากนั้น theexpression ได้ริเริ่มขึ้นโดยการเติม 1 มิลลิ IPTG ตัวอย่าง werecollected ในเวลา 0 h (ไม่นานก่อนที่การเหนี่ยวนำ) และ 0.25 ชั่วโมง, 0.5 H, 1 ชั่วโมง 2 ชั่วโมง 3 ชั่วโมงและ 4 ชั่วโมงที่แล้วเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 5000 ×กรัม for10 นาทีที่4◦C เม็ดเซลล์ถูกกู้คืนและเก็บไว้ที่-80◦C
การแปล กรุณารอสักครู่..

ฉีดวัคซีน 5 ml ของปอนด์เติม 100 กรัมมิลลิลิตร− 1of แอมพิบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง◦สำหรับการแสดง , วัฒนธรรม ofseed 2 มลต่อมาใช้ปลูกฝี 198 กรัมปอนด์ เธอ rific broth ( TB ) ( 12 g L − 1 ทริพโทน , สารสกัดจากยีสต์ 24 g L − 1 , kh2po42,31 กรัม L − 1 , − 1 k2hpo412,54 กรัมต่อลิตร pH 7 และ ampicillin 100 มคก . มล. − 1 TB ( วัณโรค ) หรือเสริมสื่อกับกลีเซอรอล 4 มล. L − 1 ) นี้มักจะถูกเลี้ยงใน cul 1 ขวดเออร์เลนเมเยอร์ที่ 37 ◦ C ใน orbitalshaker จน od600nmreached ระหว่าง 0.5 และ 0.7 แล้ว theexpression ริเริ่มขึ้นโดยเพิ่มโปรตีน 1 มิลลิเมตร ตัวอย่างข้อมูลที่เวลา 0 H ( ก่อนที่จะเหนี่ยวนำ ) 0.25 0.5 และ 1 H , H , H 2 H , 3 ชั่วโมงและ 4 ชั่วโมง แล้วเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 5000 ×กรัม for10 นาทีที่ 4 ◦ C เซลล์เม็ดถูกกู้คืนและเก็บไว้ที่− 80 ◦ C
การแปล กรุณารอสักครู่..
