Material and Methods4.1. Plant Material, In Vitro Establishment and GrowthSeeds from a mature capsule, eight months old, were obtained from the crossing between two hybrid cultivars: Brassolaeliocattleya ‘Haw Yuan Beauty’ and Blc. Goldenzelle “LC” (Orchidaceae) germplasm collection at UFSCar, Araras, Brazil. Seeds were dried atroom temperature for 24 h before storage in 1.5 mL eppendorf type vials at 8 ◦C. Disinfection and in vitro seeding were carried out using a solution containing one volume of bleach (2.0–2.5% active chlorine) and nine volumes of autoclaved deionized water. Seeds were immersed in this solution for 12 min under agitation, followed by three washes in autoclaved deionized water. Seeding was performed in 30 mL Murashige and Skoog culture medium [47] with the macronutrient concentration reduced by half, with 2% sucrose (Synth®, Diadema-SP, Brazil), 1.2 g L−1 activated charcoal (Synth®), 0.1 g L−1inositol (Synth®) and pH adjusted to 5.7 before the addition of 6.4 g L−1 agar (Agargel®, João Pessoa-PB, Brazil) inside glass flasks (240 mL capacity) covered with polypropylene caps. The culture media contained in the flasks was sterilized by autoclaving for 25 min at 121 ◦C and 1 atm.
วัสดุและวิธีการ4.1. วัสดุพืช เมล็ดพันธุ์การเพาะเลี้ยงและการเจริญเติบโตในหลอดทดลองจากแคปซูลโตเต็มที่อายุ 8 เดือน ได้มาจากการผสมข้ามสายพันธุ์ระหว่างพันธุ์ลูกผสม 2 สายพันธุ์ ได้แก่ Brassolaeliocattleya 'Haw Yuan Beauty' และ Blc การรวบรวมเชื้อพันธุ์ Goldenzelle “LC” (Orchidaceae) ที่ UFSCar, Araras, บราซิล เมล็ดถูกทำให้แห้งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนการเก็บรักษาในขวดชนิดเอพเพนดอร์ฟขนาด 1.5 มล. ที่ 8 —C การฆ่าเชื้อและการเพาะในหลอดทดลองดำเนินการโดยใช้สารละลายที่ประกอบด้วยสารฟอกขาวหนึ่งปริมาตร (คลอรีนออกฤทธิ์ 2.0–2.5%) และน้ำปราศจากไอออนแบบนึ่งฆ่าเชื้อ 9 ปริมาตร แช่เมล็ดในสารละลายนี้เป็นเวลา 12 นาทีภายใต้การกวน ตามด้วยการล้างสามครั้งในน้ำปราศจากไอออนที่นึ่งฆ่าเชื้อ ทำการเพาะในอาหารเลี้ยงเชื้อ Murashige และ Skoog ขนาด 30 มล. [47] โดยมีความเข้มข้นของสารอาหารหลักลดลงครึ่งหนึ่ง โดยมีซูโครส 2% (Synth®, Diadema-SP, บราซิล), ถ่านกัมมันต์ L−1 1.2 กรัม (Synth®), 0.1 g L−1 อิโนซิทอล (Synth®) และ pH ปรับเป็น 5.7 ก่อนเติมวุ้น L−1 6.4 กรัม (Agargel®, João Pessoa-PB, บราซิล) ภายในขวดแก้ว (ความจุ 240 มล.) ปิดด้วยฝาโพลีโพรพีลีน อาหารเลี้ยงเชื้อที่อยู่ในขวดถูกฆ่าเชื้อโดยการนึ่งฆ่าเชื้อเป็นเวลา 25 นาทีที่ 121 ◦C และ 1 atm
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัสดุและวิธีการ<br>4.1. วัสดุพืช, การสร้างและการเจริญเติบโตในหลอดทดลอง<br>เมล็ดผลไม้สุกอายุแปดเดือนได้จากการผสมพันธุ์สองสายพันธุ์brasolaeliocattleya 'ความงามของHaw Yuan 'และBlc การเก็บรวบรวมพันธุกรรมของgolden zelle " LC " ( lanco )ในอลาสราสประเทศบราซิล เมล็ดแห้งที่100°C<br>วางที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา24ชั่วโมงและเก็บไว้ในขวดขนาด1.5มิลลิลิตรที่อุณหภูมิ8องศาเซลเซียส การฆ่าเชื้อและการฉีดวัคซีนในหลอดทดลองใช้สารละลายที่มีสารฟอกขาว1ปริมาณ(คลอรีนที่มีประสิทธิภาพ2.0-2.5 % )และน้ําdeionizedด้วยความดันสูง9ปริมาณ เมล็ดถูกแช่ในสารละลายเป็นเวลา12นาทีภายใต้การกวนและล้างสามครั้งในน้ําdeionizedที่ฆ่าเชื้อด้วยความดันสูง การฉีดวัคซีนดําเนินการใน30มิลลิลิตรของMurashigeและSkoog [ 47 ]ซึ่งความเข้มข้นของสารอาหารจํานวนมากลดลงครึ่งหนึ่งโดยมีซูโครส2 % ( Synth,Diadema-SP,Brasil ),1.2กรัมของถ่านกัมมันต์l 1 ( synth ),0.1กรัมl 1<br>ก่อนที่จะเพิ่ม6.4กรัมของagar ( Agargel,joo Pessoa-PB,Brasil )ลงในขวดแก้วที่ปกคลุมด้วยโพลีโพรพิลีน(ความจุ240มิลลิลิตร)ให้ปรับsynthและphเป็น5.7 วัสดุที่มีอยู่ในขวดถูกฆ่าเชื้อโดยการฆ่าเชื้อด้วยความดันสูงที่121°Cและ1บรรยากาศเป็นเวลา25นาที
การแปล กรุณารอสักครู่..