An enzyme immunoassay (EIA), which has been used for
other mammals, was used for the steroid measurements
(Munro et al., 1991; Graham et al., 2001; Robeck et al.,
2005). For the progesterone assay, we utilized the antibody
CL425 (1:8000) and the respective hormone conjugated
with horseradish peroxidase (HRP) (1:160,000) supplied by
C. J. Munro (University of California, Davis, CA, USA). For the
estradiol assay, we utilized the antibody R0008 (1:10,000)
and the respective HRP-conjugated hormone (1:40,000)
also supplied by C. J. Munro.
In brief, microtiter plates (MaxiSorp, Nunc, Rochester,
NY, USA) were coated with 50 L of antibody per well,
dissolved in coating buffer (sodium bicarbonate buffer
0.05 M; pH 9.6), and incubated overnight at 4 ◦C. The plates
were washed (0.15 M NaCl, 0.05%, Tween 20), and 25 L
of the assay buffer was added, followed by the addition
of 50 L of each sample, standard (0.01–500 pg/50 L), or
controls all in duplicate. Immediately thereafter, 50 L of
Immunoassay เอนไซม์ (EIA), ซึ่งใช้สำหรับการเลี้ยงลูกด้วยนมอื่น ๆ ใช้สำหรับวัดสเตอรอยด์(จู๋ et al., 1991 เกรแฮมและ al., 2001 Robeck et al.,2005) . สำหรับทดสอบโปรเจสเตอโร เราใช้แอนติบอดีที่CL425 (1:8000) และฮอร์โมนเกี่ยวข้องกลวงมี peroxidase horseradish (HRP) (1:160, 000) โดยC. J. จู๋ (มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนีย Davis, CA, USA) สำหรับการทดสอบ estradiol เราใช้แอนติบอดี R0008 (1:10, 000)และฮอร์โมน HRP กลวงตามลำดับ (1:40, 000)นอกจากนี้ยัง จัดหา โดย C. J. จู๋สังเขป microtiter แผ่น (MaxiSorp, Nunc โรเชสเตอร์NY, USA) ถูกเคลือบ ด้วยแอนติบอดีต่อดี 50 Lละลายในเคลือบบัฟเฟอร์ (บัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนตโซเดียม0.05 M pH 9.6), และ incubated ที่ 4 ◦C ค้างคืน แผ่นถูกล้าง (0.15 M NaCl, 0.05%, Tween 20), และ 25 Lของการวิเคราะห์ บัฟเฟอร์เพิ่ม ตาม ด้วยการเพิ่มของ L 50 ของแต่ละอย่าง มาตรฐาน (0.01 – 500 pg 50 L), หรือควบคุมทั้งหมดในซ้ำ ทันทีหลังจากนั้น 50 L
การแปล กรุณารอสักครู่..
immunoassay เอนไซม์ (EIA) ซึ่งได้ถูกนำมาใช้สำหรับการ
เลี้ยงลูกด้วยนมอื่น ๆ ที่ใช้สำหรับการวัดเตียรอยด์
(มันโรและคณะ, 1991;. เกรแฮม, et al, 2001;.. Robeck, et al,
2005) สำหรับการทดสอบกระเทือนเราใช้แอนติบอดี
CL425 (1: 8000) และฮอร์โมนที่เกี่ยวข้องผัน
กับมะรุม peroxidase (HRP) (1: 160,000) จัดทำโดย
ซี เจโร (มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนียเดวิส, CA, USA) สำหรับ
การทดสอบ estradiol เราใช้แอนติบอดี R0008 (1: 10,000)
และฮอร์โมนที่เกี่ยวข้อง HRP-ผัน (1: 40,000)
. ที่จัดโดย CJ มันโร
ในช่วงสั้น ๆ แผ่นไมโคร (MaxiSorp, ตอนนี้โรเชสเตอร์,
นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) เป็น เคลือบด้วย 50 ลิตรแอนติบอดีต่อดี?
ละลายในบัฟเฟอร์เคลือบ (บัฟเฟอร์โซเดียมไบคาร์บอเนต
0.05 M; ค่า pH 9.6) และบ่มค้างคืนที่ 4 ◦C แผ่น
ถูกล้าง (0.15 M NaCl, 0.05%, Tween 20), และ 25? L
ของบัฟเฟอร์ทดสอบถูกเพิ่มเข้ามาตามด้วยนอกจากนี้
จาก 50? L ของแต่ละตัวอย่างมาตรฐาน (0.01-500 PG / 50? L) หรือ
ควบคุมทั้งหมดในที่ซ้ำกัน หลังจากนั้นทันที 50 ลิตร
การแปล กรุณารอสักครู่..
เป็นเอนไซม์ที่มี ( EIA ) ซึ่งมีการใช้
สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมอื่น ๆ การใช้สเตียรอยด์การวัด
( มันโร et al . , 1991 ; เกรแฮม et al . , 2001 ;
robeck et al . , 2005 ) สำหรับโปรเจสเตอโรน โดยเราใช้แอนติบอดี
cl425 ( 1:8000 ) และฮอร์โมนที่เกี่ยวข้องกับ horseradish peroxidase conjugated
( HRP ) ( 1:160000 ) จัดโดย
C . เจ. มันโร ( มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนีย เดวิส แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) สำหรับ
ก่อนโดยเราใช้แอนติบอดี r0008 ( 1:10000 )
และ HRP เกี่ยวข้องและฮอร์โมน ( 1:40000 )
ยังจัดโดย เจ. มันโร .
สังเขป ไมโครแผ่น ( maxisorp , ขณะนี้ , โรเชสเตอร์ ,
NY , USA ) ถูกเคลือบด้วยชั้นของแอนติบอดีต่อ 50 ดี
ละลายบัฟเฟอร์ ( เคลือบ โซเดียมไบคาร์บอเนตบัฟเฟอร์
0.05 M ; pH 9.6 ) และบ่มค้างคืนที่ 4 ◦ C แผ่น
ถูกล้าง ( 0.15 M NaCl 005 เปอร์เซ็นต์ Tween 20 ) และ 25 L
ของ ( บัฟเฟอร์เพิ่มตามนอกจากนี้
50 L ของแต่ละตัวอย่าง มาตรฐาน ( 0.01 – 500 pg / 50 L ) หรือ
การควบคุมทั้งหมดที่ซ้ำกัน ทันทีหลังจากนั้น 50 ล.
การแปล กรุณารอสักครู่..