Luminescence resonance energy trans

Luminescence resonance energy transfer with a lanthanide like Tb3+ as donor is a useful technique for estimating intra- and intermolecular distances in macromolecules. However, the technique usually requires the use of a bulky chelator with a flexible linker attached to a Cys residue to bind Tb3+ and, for intramolecular studies, an acceptor fluorophor attached to another Cys residue in the same protein. Here, an engineered EF- hand motif is incorporated into the central cytoplasmic loop of the lactose permease of Escherichia coli generating a high-affinity site for Tb3+ (KFormula ≈ 4.5 μM) or Gd3+ (KFormula ≈ 2.3 μM). By exciting a Trp residue in the coordination sequence, Tb3+ bound to the EF-hand motif is sensitized specifically, and the efficiency of energy transfer to strategically placed Cys residues labeled with fluorophors is measured. In this study, we use the technique to measure distance from the EF-hand in the central cytoplasmic loop of lactose permease to positions 179 or 169 at the center or periplasmic end of helix VI, respectively. The average calculated distances of ≈23 Å (position 179) and ≈33 Å (position 169) observed with three different fluorophors as acceptors agree well with the geometry of a slightly tilted α-helix. The approach should be of general use for studying static and dynamic aspects of polytopic membrane protein structure and function.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พลังงานการสั่นพ้อง luminescence โอนกับแลนทาไนด์เช่น Tb3 + บริจาคเป็น เทคนิคที่มีประโยชน์สำหรับการประเมินภายในและระยะ intermolecular ใน macromolecules อย่างไรก็ตาม เทคนิคมักจะต้องใช้ chelator ขนาดใหญ่ มีการยืดหยุ่นตัวเชื่อมโยงข้อมูลแนบ Cys ตกค้างผูก Tb3 + การ intramolecular ศึกษา fluorophor acceptor การแนบ Cys ตกค้างที่อื่นในโปรตีนเดียวกัน ที่นี่ แปลน EF คงการออกแบบจะรวมอยู่ในลูป cytoplasmic กลางของ permease แล็กโทสของ Escherichia coli สร้างไซต์ความสัมพันธ์สูงสำหรับ Tb3 + (KFormula ≈ 4.5 μM) หรือ Gd3 + (KFormula ≈ 2.3 μM) โดย Trp ตกค้างในลำดับการประสานงานที่น่าตื่นเต้น Tb3 + กับแปลน EF คงเป็น sensitized เฉพาะ และวัดประสิทธิภาพการส่งพลังงานตกค้าง Cys วางกลยุทธ์ป้ายกับ fluorophors ในการศึกษานี้ เราใช้เทคนิคในการวัดระยะห่างจากจากมือ EF ในลูป cytoplasmic กลางของแล็กโทส permease ตำแหน่ง 179 หรือ 169 ที่ศูนย์หรือ periplasmic ท้ายเกลียว VI ตามลำดับ ระยะทางคำนวณเฉลี่ยÅ ≈23 (ตำแหน่ง 179) และÅ ≈33 (ตำแหน่ง 169) พบกับ fluorophors แตกต่างกันสาม acceptors ตกลงกับเรขาคณิตของ a เล็กน้อยยืดเกลียวα วิธีการควรเป็นของใช้ทั่วไปสำหรับการศึกษาด้านแบบสแตติก และไดนามิกของ polytopic เมมเบรนโปรตีนโครงสร้างและหน้าที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เรืองแสงเสียงสะท้อนที่มีการถ่ายโอนพลังงาน lanthanide เช่น Tb3 + เป็นผู้บริจาคที่เป็นเทคนิคที่มีประโยชน์สำหรับการประเมินระยะทางทั้งในและระหว่างโมเลกุลในโมเลกุล อย่างไรก็ตามเทคนิคมักจะต้องใช้ chelator ขนาดใหญ่ที่มีตัวเชื่อมโยงที่มีความยืดหยุ่นที่แนบมากับสารตกค้าง Cys การผูก Tb3 + และสำหรับการศึกษาภายในโมเลกุล, fluorophor ใบเสร็จที่แนบมากับอีกตกค้าง Cys ในโปรตีนเดียวกัน นี่บรรทัดฐานมือทำาการออกแบบรวมอยู่ในวงกลางของนิวเคลียส permease แลคโตสของเชื้อ Escherichia coli สร้างเว็บไซต์สูงใกล้ชิดกับ Tb3 + (KFormula ≈ 4.5 ไมครอน) หรือ Gd3 + (KFormula ≈ 2.3 ไมครอน) โดยที่น่าตื่นเต้นที่เหลือ Trp ในลำดับการประสานงาน, Tb3 ผูกพัน + แม่ลาย EF-มือเป็นไวโดยเฉพาะและมีประสิทธิภาพของการถ่ายโอนพลังงานที่จะวางกลยุทธ์ตกค้าง Cys กำกับด้วย fluorophors เป็นวัด ในการศึกษาครั้งนี้เราจะใช้เทคนิคในการวัดระยะทางจาก EF-มือในวงนิวเคลียสกลางของแลคโตส permease กับตำแหน่ง 179 หรือ 169 ที่ศูนย์หรือจุดสิ้นสุดของ periplasmic เกลียว VI ตามลำดับ ระยะทางคำนวณค่าเฉลี่ยของ≈23Å (ตำแหน่ง 179) และ≈33Å (ตำแหน่ง 169) ตั้งข้อสังเกตกับสาม fluorophors แตกต่างกันเป็นผู้รับตกลงกันได้ดีกับรูปทรงเรขาคณิตของเอียงเล็กน้อยα-เกลียว วิธีการที่ควรจะมีการใช้งานทั่วไปสำหรับการศึกษาด้านแบบคงที่และแบบไดนามิกของโครงสร้างโปรตีนเมมเบรน polytopic และฟังก์ชั่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การถ่ายโอนพลังงานเรโซแนนซ์กับแลนทาไนด์เหมือน tb3 เป็นผู้บริจาคเป็นเทคนิคที่มีประโยชน์สำหรับการประเมินภายในและระยะทางในโมเลกุลสารประกอบเชิงซ้อน . แต่เทคนิคที่มักจะใช้เป็นคีเลเตอร์ขนาดใหญ่ที่มีความยืดหยุ่นสนามกอล์ฟติดคราบภาวะการผูก tb3 และ intramolecular ศึกษาเป็นพระนาสิก fluorophor แนบอีกภาวะตกค้างในโปรตีนเดียวกัน ที่นี่ , วิศวกรรม EF - โมทีฟ มือรวมอยู่ในลูปนี้กลางของแลคโตส permease ของ Escherichia coli สร้างเว็บไซต์ affinity สูง tb3 ( KFormula ≈ 4.5 μ M ) หรือ gd3 ( KFormula ≈ 2.3 μ M ) โดยน่าตื่นเต้น TRP สารตกค้างในการลำดับtb3 ผูกพันกับ EF มือแม่ลายเป็นชนิดเฉพาะ และประสิทธิภาพของการถ่ายเทพลังงาน เพื่อวางกลยุทธ์ภาวะตกค้าง fluorophors ป้ายชื่อวัด . ในการศึกษาครั้งนี้ได้ใช้เทคนิคในการวัดระยะทางจาก EF มือในลูปนี้กลางของแลคโตส permease ตำแหน่ง 179 หรือ 169 ที่ศูนย์ หรือ จบ periplasmic ของเกลียว 6 ตามลำดับเฉลี่ยคำนวณระยะทางของ≈ 23 •ตำแหน่ง ( 179 ) และ≈กริพเพน ( 33 ตำแหน่ง 169 ) และสาม fluorophors แตกต่างกันเปรียบเทียบสอดคล้องกับรูปทรงของเอียงเล็กน้อยแอลฟาเฮลิกซ์ . แนวทางที่น่าจะเป็นประโยชน์ทั่วไป เพื่อศึกษาลักษณะสถิตและพลวัตของ polytopic เมมเบรนโปรตีนโครงสร้างและหน้าที่