Random Amplified Polymorphic DNA (R

Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD)
DNA Extraction and RAPD Analysis: The genomic DNA
was extracted from liver tissue according to the method
described by Sharma et al. [25] with minor modification.
The integrity of extracted genomic DNA was checked by
electrophoresis in 0.8% agarose gels. The RAPD reaction
described by Becerril et al. [26] and Ferrero et al. [27] was
performed using 5 ng DNA templates in a total volume of
25ìl. From the twenty one primers used, only six primers
selected because of their good RAPD profiles were used
in this study. Their sequences are, A06:5--GGTCCTGAC-3-
,A07: 5'-GAAACGGGTG-3', A09: 5'-GTGATCGCAG-3',A12: 5'-TCGGCGATAG-3', A17: 5'-GACCGCTTGT-3', A20:
5-GGG TAA CGC C-3, A19: 5-CAA ACG TCG G-3 and
A20: 5'-GTTGCGATCC-3'. The primers were obtained from
the Operon Technology. DNA amplification reactions
were performed under conditions reported by Williams
et al. [12] and Plotsky et al. [28]. PCR amplification was
conducted in 50µl reaction volume containing 100 ng
genomic DNA, 100 mM dNTPs, 40 nM primer (Bio Basic
Inc. Canada), 2.5 units of Taq DNA polymerase. The PCR
reactions were carried out in a thermocycler (Bioer-Xp
thermal, China) programmed with a first denaturation of 5
min at 94°C, followed by 45 cycles of 1 min denaturation
at 95°C,1 min annealing at 36°C and 2 min extension at
72°C. Final extension at 72°C, for 5 min was allowed before
holding the reaction at 4°C for 10 min. Reaction products
were stored at 4°C prior to electrophoresis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สุ่มเอาต์ Polymorphic ดีเอ็นเอ (อาร์เอพีดี)อาร์เอพีดีวิเคราะห์และสกัดดีเอ็นเอ: ดีเอ็นเอ genomicถูกสกัดจากเนื้อเยื่อตับตามวิธีการอธิบายโดย Sharma et al. [25] มีปรับเปลี่ยนเล็กน้อยมีการตรวจสอบความสมบูรณ์ของ genomic DNA แยกโดยelectrophoresis ใน 0.8% agarose เจ ปฏิกิริยาอาร์เอพีดีอธิบายโดย Becerril et al. [26] และถูก Ferrero al. ร้อยเอ็ด [27]ใช้แม่แบบดีเอ็นเอ ng 5 ในปริมาณรวมของ25ìl จากไพรเมอร์ยี่สิบเอ็ดใช้ 6 ไพรเมอร์เลือก เพราะดีการใช้โพรไฟล์การอาร์เอพีดีในการศึกษานี้ มีลำดับของพวกเขา A06:5 - GGTCCTGAC-3 -, A07: 5'-GAAACGGGTG-3', A09: 5'-GTGATCGCAG-3', A12: 5'-TCGGCGATAG-3', A17: 5'-GACCGCTTGT-3', A20:ซีจีซีแหลมยายณี 5 GGG C-3, A19: TCG จีบซีเอเอโฮ 5 G-3 และA20: 5'-GTTGCGATCC-3' ไพรเมอร์ที่ได้รับจากเทคโนโลยี Operon ปฏิกิริยาขยายดีเอ็นเอได้ดำเนินการภายใต้เงื่อนไขที่รายงาน โดยวิลเลียมส์al. ร้อยเอ็ด [12] และ Plotsky et al. [28] ขยาย PCR ได้ดำเนินการใน 50µl ปฏิกิริยาปริมาตรประกอบด้วย 100 nggenomic DNA, dNTPs 100 มม. 40 nM สีรองพื้น (ทางชีวภาพพื้นฐานประเทศแคนาดา Inc.), 2.5 หน่วย Taq DNA พอลิเมอเรส PCRปฏิกิริยาได้ดำเนิน thermocycler (Bioer Xpความร้อน จีน) โปรแกรมกับ denaturation แรก 5นาทีที่ 94° C ตามวงจร 45 การ denaturation 1 นาทีที่ 95° C การอบเหนียวที่ 36° C ภายใน 2 นาทีที่ 1 นาที72 องศาเซลเซียส ภายในสุดท้ายที่° C 72 สำหรับ 5 นาทีได้รับการอนุญาตก่อนกดปฏิกิริยาที่ 4° C สำหรับ 10 นาทีผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาwere stored at 4°C prior to electrophoresis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สุ่มขยาย Polymorphic DNA (RAPD)
สกัดดีเอ็นเอและอาร์เอพีวิเคราะห์ดีเอ็นเอ
ถูกสกัดจากเนื้อเยื่อตับตามวิธีการ
อธิบายโดยชาร์ตอัล [25] ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย.
ความสมบูรณ์ของดีเอ็นเอที่สกัดได้ตรวจสอบโดย
electrophoresis ใน 0.8% agarose เจล ปฏิกิริยา RAPD
อธิบายโดย Becerril et al, [26] และเฟอร์เรอัลเอต [27] ได้รับการ
ดำเนินการโดยใช้ 5 งะดีเอ็นเอแม่แบบในปริมาณรวมของ
25ìl จากยี่สิบเอ็ดไพรเมอร์ที่ใช้เพียงหกไพรเมอร์
เลือกเพราะของโปรไฟล์ RAPD ดีของพวกเขาถูกนำมาใช้
ในการศึกษานี้ ลำดับของพวกเขา, A06: 5 - GGTCCTGAC-3
, A07: 5'-GAAACGGGTG-3 'A09: 5'-GTGATCGCAG-3' A12: 5'-TCGGCGATAG-3 'A17: 5'-GACCGCTTGT -3 'A20:
5 GGG TAA CGC C-3, A19: 5-CAA ACG TCG G-3 และ
A20: 5'-GTTGCGATCC-3 ' ไพรเมอร์ที่ได้รับจาก
เทคโนโลยี Operon ปฏิกิริยาดีเอ็นเอ
ได้ดำเนินการภายใต้เงื่อนไขที่รายงานโดยวิลเลียมส์
และอัล [12] และ Plotsky et al, [28] ขยาย PCR ได้รับการ
ดำเนินการในปริมาณที่มีปฏิกิริยา50μl 100 นาโนกรัม
ดีเอ็นเอ 100 มิลลิ dNTPs 40 นาโนเมตรไพรเมอร์ (ไบโอพื้นฐาน
แคนาดา) 2.5 หน่วยงานของดีเอ็นเอโพลิเมอร์ Taq PCR
ปฏิกิริยาได้ดำเนินการใน thermocycler (Bioer-Xp
ความร้อน, จีน) โปรแกรมที่มี denaturation แรก 5
นาทีที่ 94 ° C ตามด้วย 45 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ 1 นาที
ที่ 95 องศาเซลเซียส 1 นาทีการอบที่ 36 ° C และขยาย 2 นาทีที่
72 องศาเซลเซียส ขยายรอบชิงชนะเลิศที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีก่อนที่จะได้รับอนุญาตให้
ถือปฏิกิริยาที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยา
ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสก่อนที่จะ electrophoresis

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Amplified Polymorphic DNA ( RAPD )
การสกัดดีเอ็นเอและการวิเคราะห์ RAPD :
ดีเอ็นเอถูกสกัดจากเนื้อเยื่อตับตามวิธีการ
อธิบายโดย Sharma et al . [ 25 ] กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
ความสมบูรณ์ของดีเอ็นเอที่สกัดได้ถูกตรวจสอบโดย
electrophoresis ใน 0.8% เจลโรส . มีเพียงปฏิกิริยา
อธิบายโดย Becerril et al . [ 26 ] และเฟอร์เรโร่ et al . [ 27 ] ถูก
การใช้ดีเอ็นเอแม่แบบใน 5 ของปริมาณรวมของ
25 ì L . จากยี่สิบหนึ่งชนิดใช้เพียงหกวิธีเลือกเพราะด้วย

ใช้โปรไฟล์ที่ดีของพวกเขาในการศึกษานี้ ลำดับของพวกเขาเป็น a06:5 -- ggtcctgac-3 -
, A05 : 5 ' - gaaacgggtg-3 ' A07 : 5 ' - gtgatcgcag-3 ' A12 : 5 ' - tcggcgatag-3 ' A17 : 5 ' - gaccgcttgt-3 ' a20 :
5-ggg TAA CGC c-3 a19 : , 5-caa ACG TCG และ a20 3
5 ' - gttgcgatcc-3 'ไพรเมอร์ที่ได้จาก
โอเปอรอนเทคโนโลยี DNA Amplification ปฏิกิริยา
ได้ภายใต้เงื่อนไขที่รายงานโดยวิลเลียม
et al . [ 12 ] และ plotsky et al . [ 28 ] โดยขยายเป็น 50 µ l
) ในปฏิกิริยาปริมาณที่มี 100 ng
genomic DNA , 100 มม. dntps 40 nm รองพื้น ( ไบโอขั้นพื้นฐาน
Inc . Canada ) , 2.5 หน่วยดีเอ็นเอพอลิเมอเรสได้ดี . pcr
ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นในเทอมอไซเคล ์ ( bioer XP
ความร้อน , จีน ) โปรแกรมด้วย ( ครั้งแรกของ 5
นาทีที่ 94 ° C ตามด้วย 45 รอบ 1 นาทีที่ 95 องศา C (
1 นาที 36 ° C และการอบอ่อนที่ 2 นาทีที่ 72 ° C )
สุดท้ายส่วนขยายที่ 72 เมตร C เป็นเวลา 5 นาทีได้รับอนุญาตก่อน
ถือปฏิกิริยาที่ 4 ° C นาน 10 นาที ปฏิกิริยาผลิตภัณฑ์
เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา C ก่อน

อิเล็ก .