Blood samples were collected throug

Blood samples were collected through the caudal vein from
1 fish tank
1 using a 1 ml syringe at days 7, 14, and 28 post-feeding.
They were immediately withdrawn into the Eppendorf tubes
without anticoagulant. Blood samples were then allowed to clot
(1 h at room temperature and 4 h at 4 C) and centrifuged at
1500  g, 5 min, and 4 C. The serum was finally collected and
stored at minus 20 C until assay.
Leukocytes isolates from peripheral blood were taken using a
method modified from Ref. [26]. 1 ml of the collected bloods from
1 fish tank
1 was diluted with 2 ml of RPMI 1640 (Gibthai). It was
then carefully laid onto 3 ml of Histopaque (Sigma) in a 15 ml tube.
The tube was centrifuged at 400 g for 30 min at room temperature.
After centrifugation, a white buffy coat of leukocytes cells floatedon the top of the Histopaque. Opaque interfaces were carefully
aspirated with a Pasteur pipette and transferred into a clean 15 ml
tube. Phosphate buffer solution (PBS) was then added to attain 6ml
and gently mixed by aspiration. It was centrifuged at 250 g for
10 min. This washing step was repeated 3 times to remove any
residual Histopaque. The isolated leukocytes cells were then resuspended
in the PBS and adjusted to the required cell numbers
for phagocytosis and respiratory activities.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างเลือดเก็บรวบรวมผ่านหลอดเลือดดำ caudal จากปลา 1 ถังใช้เข็ม 1 ml ในวันที่ 7, 14 และ 28 หลังอาหาร 1พวกเขาทันทีถอนใน Eppendorf หลอดโดย anticoagulant ตัวอย่างเลือดได้รับอนุญาตแล้วให้ clot(1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้อง และ 4 h ที่ 4 C) และ centrifuged ที่g 1500, 5 min และ 4 ค เซรั่มถูกรวบรวมในที่สุด และเก็บที่ลบ 20 C จนถึงทดสอบLeukocytes ที่แยกได้จากเลือดต่อพ่วงนำมาใช้เป็นวิธีการปรับเปลี่ยนจากอ้างอิง [26] 1 ml ของ bloods รวบรวมจาก1 ปลาถัง 1 ถูกผสมกับ 2 ml ของ RPMI 1640 (Gibthai) มันเป็นแล้ว อย่างรอบคอบวางบน 3 ml ของ Histopaque (ซิกมา) ในหลอด 15 mlหลอดถูก centrifuged ที่ 400 กรัมสำหรับ 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องหลังจาก centrifugation มือใหม่ปราบผีเสื้อสีขาวของ leukocytes เซลล์ด้านบนของ Histopaque floatedon อินเทอร์เฟซที่ทึบได้อย่างรอบคอบaspirated กับเปตต์ระดับ และเป็นมล 15 สะอาดหลอด ฟอสเฟตบัฟเฟอร์โซลูชัน (PBS) ถูกเพิ่มเข้าไปบรรลุ 6mlและค่อย ๆ ผสม ด้วยปณิธาน มันถูก centrifuged ที่ 250 g สำหรับ10 นาที ขั้นตอนการล้างนี้มีซ้ำ 3 ครั้งเพื่อเอาออกHistopaque เหลือ เซลล์ leukocytes แยกได้แล้ว resuspendedใน PBS และจำนวนเซลล์ที่ต้องการปรับปรุงการ phagocytosis และกิจกรรมที่ทางเดินหายใจ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เก็บตัวอย่างเลือดผ่านหลอดเลือดดำหางจากตู้ปลา 1 1 โดยใช้เข็มฉีดยา 1 มล. วันที่ 7, 14, และ 28 หลังการให้อาหาร. พวกเขาถูกถอนออกทันทีในหลอด Eppendorf โดยไม่มีสารกันเลือดแข็ง ตัวอย่างเลือดที่ได้รับอนุญาตแล้วลิ่ม(1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องและ 4 ชั่วโมงที่ 4 องศาเซลเซียส) และหมุนเหวี่ยงที่1500? กรัม 5 นาทีและ 4 องศาเซลเซียส ซีรั่มที่ถูกเก็บรวบรวมที่สุดและเก็บไว้ที่ลบ 20 องศาเซลเซียสจนทดสอบ. เม็ดเลือดขาวที่แยกได้จากเลือดที่ถูกนำมาใช้วิธีการปรับเปลี่ยนจากการอ้างอิง [26] 1 มิลลิลิตรของเลือดที่เก็บรวบรวมจากตู้ปลา1? 1 เจือจางด้วย 2 มิลลิลิตร RPMI 1640 (Gibthai) มันถูกแล้ววางลงบนระมัดระวัง 3 มิลลิลิตร Histopaque (ซิกม่า) ในหลอด 15 มล. หลอดที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 400 กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง. หลังจากหมุนเหวี่ยงเสื้อสีขาวมือใหม่ของเซลล์เม็ดเลือดขาว floatedon ด้านบนของ Histopaque ที่ อินเตอร์เฟซที่ทึบแสงถูกอย่างรอบคอบสำลักกับปิเปตปาสเตอร์และย้ายไปอยู่ที่สะอาด 15 มลหลอด สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (พีบีเอส) ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วจะบรรลุ 6ml และผสมเบา ๆ โดยความทะเยอทะยาน มันได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 250 กรัมสำหรับ10 นาที ขั้นตอนการซักผ้านี้ซ้ำ 3 ครั้งเพื่อลบHistopaque ที่เหลือ เม็ดเลือดขาวเซลล์ที่แยกถูก resuspended แล้วในพีบีเอสและปรับให้หมายเลขโทรศัพท์ที่จำเป็นสำหรับเซลล์ทำลายระบบทางเดินหายใจและกิจกรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเก็บตัวอย่างเลือดผ่านหลอดเลือดหางจาก
1 ถังปลา
1 โดยใช้เข็ม 1 มิลลิลิตรในวันที่ 7 , 14 และ 28 โพสต์อาหาร .
พวกเขาถูกถอนออกทันทีในเพนดอร์ฟหลอด
ไม่มีเลือด ตัวอย่างเลือดถูกอนุญาตอุดตัน
( 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องและ 4 ชั่วโมง 4  C ) และระดับที่
1500  G , 5 นาที และ 4  C เซรั่มก็รวบรวม
เก็บไว้ที่ลบ 20  C จนแบคทีเรีย ชนิดที่แยกได้จากเลือดที่ต่อพ่วงเป็น

ถ่ายโดยใช้วิธีที่ดัดแปลงจากอังกฤษ [ 26 ] 1 มิลลิลิตรของเลือดจาก
1 ถังเก็บปลา
1 ถูกเจือจางด้วย RPMI 1640 2 มิลลิลิตร ( gibthai ) มันคือ
แล้ววางอย่างระมัดระวังบน 3 มล. ของ histopaque ( Sigma ) ในหลอด 15 ml .
หลอดคือระดับที่ 400 กรัม เป็นเวลา 30 นาที ที่อุณหภูมิห้อง หลังจากปั่น
,เสื้อสีขาวสีขาวของเม็ดเลือดขาว เซลล์ floatedon ด้านบนของ histopaque . อินเทอร์เฟซทึบแสงเป็นรอบคอบ
aspirated กับปาสเตอร์หลอดและโอนเป็นสะอาด 15 ml
หลอด สารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS ) จากนั้นเพิ่มบรรลุ 6ml
และค่อยๆผสมด้วยลมหายใจ มันเป็นระดับที่ 250 g
10 นาทีซักนี้ขั้นตอนซ้ำ 3 ครั้งเพื่อลบใด ๆที่เหลือ histopaque
.การแยกเม็ดเลือดขาวเซลล์แล้ว resuspended
ใน PBS และปรับเปลี่ยนหมายเลขที่ต้องการเซลล์
สำหรับ phagocytosis และกิจกรรม ทางเดินหายใจ