The assay described in this paper i

The assay described in this paper is based on the expression of the PR/Gal4 fusion in an inducible manner via a Tet-On system (adapted from Clontech), thus drastically reducing the possible toxic side-effects of PR. The reverse tetracycline transactivator (rtTA) used in this system allows for the induction of PR/Gal4 expression by the addition of tetracycline (Tet) or doxycycline (Dox), only when needed. eGFP, the sensor for PR activity, will be expressed only when PR/Gal4 expression is induced in the presence of a PI. Most importantly, all the assay elements have been stably expressed in mammalian cells using retroviral technology. Finally, we established T-cell lines from clones with the highest sensitivity showing robust, reliable and reproducible behavior. This is the first time a cell-based assay for monitoring PR activity has been developed in T-cells, the natural milieu of HIV infection, thus providing an efficient way to search for novel inhibitors/competitors of PR, which could lead to the development of new therapeutics against HIV.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์อธิบายในเอกสารนี้เป็นไปตามนิพจน์ของฟิวชั่น PR/Gal4 ลักษณะเป็น inducible ผ่าน Tet บนระบบ (ดัดแปลงจาก Clontech), ลดการเป็นพิษผลข้างเคียงของ PR. อย่างรวดเร็ว Transactivator ย้อนเตตราไซคลีน (rtTA) ที่ใช้ในระบบนี้ได้การเหนี่ยวนำของนิพจน์ PR/Gal4 ด้านนอก (Tet) เตตราไซคลีนหรือดอกซีไซคลีน (Dox), เฉพาะเมื่อจำเป็น eGFP เซนเซอร์สำหรับประชาสัมพันธ์กิจกรรม จะแสดงเมื่อนิพจน์ PR/Gal4 คือเกิดในต่อหน้าของพี่เป็น สำคัญ องค์ประกอบการวิเคราะห์ทั้งหมดมีการ stably แสดงในเซลล์ที่ใช้เทคโนโลยี retroviral mammalian สุดท้าย เราสร้างบรรทัด T เซลล์จากโคลน มีความไวสูงที่แสดงลักษณะการทำงานมีประสิทธิภาพ เชื่อถือได้ และจำลอง นี่คือครั้งแรกได้รับการพัฒนาทดสอบเซลล์ใช้สำหรับตรวจสอบ PR กิจกรรมในเซลล์ T ฤทธิ์ธรรมชาติของเชื้อเอชไอวี จึง ให้วิธีที่มีประสิทธิภาพค้นหา inhibitors นวนิยายแข่งของ PR ซึ่งอาจนำไปสู่การพัฒนาของ therapeutics ใหม่กับเอชไอวี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลการวิเคราะห์ที่อธิบายไว้ในบทความนี้จะขึ้นอยู่กับการแสดงออกของการประชาสัมพันธ์ / ฟิวชั่น GAL4 ในลักษณะที่กระตุ้นผ่านระบบเทต-On (ดัดแปลงมาจาก Clontech) จึงลดลงอย่างมากที่เป็นไปได้ผลข้างเคียงที่เป็นพิษของ PR tetracycline กลับ transactivator (rtTA) ที่ใช้ในระบบนี้ช่วยให้การเหนี่ยวนำของการแสดงออกประชาสัมพันธ์ / GAL4 โดยนอกเหนือจาก tetracycline (Tet) หรือ doxycycline (Dox) เมื่อจำเป็นเท่านั้น EGFP เซ็นเซอร์สำหรับกิจกรรมประชาสัมพันธ์จะแสดงก็ต่อเมื่อการแสดงออกประชาสัมพันธ์ / GAL4 ถูกเหนี่ยวนำให้เกิดในที่ที่มี PI ที่ สิ่งสำคัญที่สุดคือการวิเคราะห์องค์ประกอบทั้งหมดที่ได้รับการแสดงความเสถียรในเซลล์โดยใช้เทคโนโลยีการเลี้ยงลูกด้วยนมไวรัส สุดท้ายเราจัดตั้งสาย T-cell จากโคลนที่มีความไวแสงสูงสุดที่แข็งแกร่งแสดงพฤติกรรมที่เชื่อถือได้และทำซ้ำได้ นี่คือครั้งแรกที่ทดสอบมือถือที่ใช้สำหรับการตรวจสอบกิจกรรมประชาสัมพันธ์ที่ได้รับการพัฒนาใน T-เซลล์, สภาพแวดล้อมที่เป็นธรรมชาติของการติดเชื้อเอชไอวีจึงให้วิธีที่มีประสิทธิภาพในการค้นหาสารยับยั้งนวนิยาย / คู่แข่งของ PR ซึ่งอาจนำไปสู่​​การพัฒนา การรักษาใหม่ของเอชไอวี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

( ที่อธิบายไว้ในบทความนี้จะขึ้นอยู่กับการแสดงออกของ PR / gal4 ฟิวชั่นในลักษณะ inducible ผ่านเทตในระบบ ( ดัดแปลงจาก clontech ) ดังนั้นในการลดพิษผลข้างเคียงที่เป็นไปได้ของพีอาร์ย้อนกลับ tetracycline transactivator ( rtta ) ที่ใช้ในระบบนี้ช่วยให้สำหรับการ PR / gal4 การแสดงออกโดยนอกเหนือจาก ของเตตราไซคลีน ( Tet ) หรือดอกซีไซคลีน ( DOX )เมื่อต้องการ egfp เซนเซอร์สำหรับกิจกรรมประชาสัมพันธ์ จะแสดงออกก็ต่อเมื่อ PR / gal4 การแสดงออกที่เกิดในตนของ Pi ที่สำคัญที่สุด องค์ประกอบทั้งหมด ( มีเสถียรแสดงในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมโดยใช้เทคโนโลยี retroviral . ในที่สุด เราก่อตั้งขึ้นจากเส้นจากโคลนที่มีความไวสูงสุดแสดงประสิทธิภาพ ความน่าเชื่อถือ และจำลองพฤติกรรมนี้เป็นครั้งแรกสำหรับการตรวจสอบกิจกรรมประชาสัมพันธ์ ( ปัจจุบันได้ถูกพัฒนาขึ้นในเซลล์ ในธรรมชาติที่สวยงามของการติดเชื้อเอชไอวี จึงให้วิธีที่มีประสิทธิภาพเพื่อค้นหาโปรตีน / นวนิยายคู่แข่งของ PR ซึ่งอาจนำไปสู่การพัฒนาใหม่ ) กับเอชไอวี