1. Introduction
The control of infectious diseases is essential to maintain the levels of productivity in the aquaculture industry. The economic impact of infectious diseases, particularly those of viral aetiology, is a constant worldwide threat in the salmonid fish industry, stimulating research to find efficient methods to minimize such losses. Vaccination is the most effective approach to combat disease in aquaculture, a strategy that is ideal to prevent and avoid the dispersion of infective viruses in fish, particularly in farms where fish are raised under intensive culture conditions. Although different types of viral vaccines have been described for fish, including inactivated, attenuated, synthetic peptides or subunit vaccines [1], [2] and [3], protection is not always complete. Hence, studies are necessary to produce improved vaccines capable of inducing longer lasting immunity and less stressful methods of administration [4]. Genetic vaccines were first developed for mammals in the 1990s and several designs to protect against rhabdoviruses have been tested in salmonid fish species [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11] and [12]. More recently, other DNA vaccines have been described to combat the infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), another viral pathogen of salmonid fish [13], [14] and [15].
Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) is the type species of the Aquabirnavirus genus, from the Birnaviridae family [16]. Virions are non-enveloped and they contain two segments (A, B) of double-stranded RNA. Segment A is the larger of the two (about 3.1 kbp) and it encodes VP2 and VP3, the two major structural proteins of the virus [17] and [18]. The VP2 protein is the type-specific antigen that can induce the production of neutralizing antibodies that are capable of protecting susceptible fish from viral infection [19], [20] and [21]. IPNV is one of the main causes of mortality worldwide for juvenile salmonid fish, being especially destructive in salmonid eggs and fingerlings [22]. Fish surviving IPN epizootics develop a persistent viral infection or carrier state, capable of continually transmitting the virus to other susceptible populations of fish, including their own offspring [23], [24], [25] and [26] (for reviews see Refs. [22], [27] and [28]).
Genetic vaccination for IPNV has only recently been undertaken experimentally, and the initial steps in its development have focused on traditional injection methods [13]. Intramuscular injection of DNA vaccines has been successfully used against viruses such as infectious haematopoietic necrosis virus (IHNV) or viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV). Intraperitoneal injection has also been routinely used for other vaccines, such as recombinant vaccines and multivalent products, and automated systems for injection have been developed [3]. However, oral vaccines would be easier to administer and they represent an important alternative to immunize fish against viruses. Nevertheless, there are still few reports of successful vaccine delivery methods other than injection, with delivery in feed having been mostly licensed to prevent bacterial but not viral diseases [4].
We previously described a DNA vaccine derived from the VP2 gene of IPNV inserted into an expression plasmid and encapsulated into alginate microspheres. The oral delivery of the plasmid (diluted in PBS) was performed manually in order to ensure the uniform vaccination of the fish under study. Strong protection was achieved in this way, with around 83% relative survival when challenged 15 and 30 days after vaccine delivery. Indeed, strong expression of IFN and the IFN-induced antiviral Mx protein was recorded 7 and 15 days post-vaccination (pv) [14] and [29]. However, novel approaches to improve the efficacy of DNA vaccine oral delivery would not only provide interesting data regarding the future mass delivery of these vaccines but also, keys to understand the cellular and mucosal immunity reactions. Oral delivery of DNA vaccines is a process that has been poorly explored, especially against IPNV. Thus, having generated a vaccine that successfully induces appropriate immune protective responses, the next step should be to check if this vaccine can be delivered in feed without losing its beneficial effects due to the severe conditions experienced during gastrointestinal transit.
The goal of the present work was to determine the effectiveness against IPNV of the pcDNA-VP2-encapsulated in alginate and incorporated into fish feed, and the immune responses it induces in rainbow trout. Given that this method appears to produce similar results to those described previously, its potential should be further assessed for industrial application.
1. บทนำการควบคุมโรคเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อรักษาระดับของผลผลิตในอุตสาหกรรมการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ ผลกระทบทางเศรษฐกิจของโรค โดยเฉพาะอย่างยิ่งบรรดาไวรัส aetiology ถูกคุกคามทั่วโลกคงที่ในอุตสาหกรรมปลา salmonid กระตุ้นการวิจัยเพื่อหาวิธีที่มีประสิทธิภาพเพื่อลดความสูญเสียดังกล่าว วัคซีนเป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพสูงสุดเพื่อต่อสู้โรคในสัตว์น้ำ กลยุทธ์ที่เหมาะสมเพื่อป้องกัน และหลีกเลี่ยงการกระจายตัวของไวรัส infective ในปลา โดยเฉพาะอย่างยิ่งในฟาร์มซึ่งเลี้ยงปลาภายใต้เงื่อนไขวัฒนธรรมเร่งรัด ถึงแม้ว่าค่าวัคซีนไวรัสชนิดต่าง ๆ ได้ถูกอธิบายไว้สำหรับปลา ยกเลิก ไฟฟ้าเคร... สังเคราะห์เปปไทด์ หรือรู้ย่อย [1], [2] และ [3], ป้องกันไม่เสมอสมบูรณ์ ดังนั้น การศึกษาจะผลิตรู้ดีขึ้นสามารถ inducing ภูมิคุ้มกันยาวและวิธีลดเครียดบริหาร [4] รู้ทางพันธุกรรมก่อนได้ถูกพัฒนาสำหรับการเลี้ยงลูกด้วยนมในปี 1990 และได้รับการทดสอบหลายแบบเพื่อป้องกัน rhabdoviruses ใน salmonid พันธุ์ปลา [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11] [12] เมื่อเร็ว ๆ นี้ การอธิบายอื่น ๆ ค่าวัคซีนดีเอ็นเอในการต่อสู้กับการตายเฉพาะส่วนของตับอ่อนโรคติดเชื้อไวรัส (IPNV), การศึกษาไวรัสอื่น salmonid ปลา [13], [14] [15] และการตายเฉพาะส่วนของตับอ่อนโรคติดเชื้อไวรัส (IPNV) เป็นพันธุ์ชนิดพืชสกุล Aquabirnavirus จากครอบครัว Birnaviridae [16] มี virions ไม่ขัด และประกอบด้วย 2 กลุ่ม (A, B) อาร์เอ็นเอคู่ควั่น เซ็กเมนต์เป็นใหญ่ของทั้งสอง (เกี่ยวกับ 3.1 kbp) และจแมป VP2 และ VP3 สองโปรตีนโครงสร้างหลักของไวรัส [17] [18] โปรตีน VP2 จะตรวจหาชนิดเฉพาะที่สามารถก่อให้เกิดการผลิตของ neutralizing แอนตี้ที่มีความสามารถในการป้องกันไวต่อปลาจากการติดเชื้อไวรัส [19], [20] [21] และ IPNV เป็นหนึ่งในสาเหตุหลักของการตายทั่วโลกสำหรับเยาวชนปลา salmonid ถูกทำลายโดยเฉพาะอย่างยิ่งในไข่ salmonid และชนิด [22] ปลารอด IPN epizootics พัฒนาแบบไวรัสติดเชื้อหรือผู้ขนส่งรัฐ ความสามารถอย่างต่อเนื่องส่งไวรัสมายังประชากรอื่นไวต่อปลา รวมทั้งตัวเองลูกหลาน [23], [24], [25] [26] และ (สำหรับรีวิวดู Refs [22], [27] และ [28])พันธุกรรมวัคซีนสำหรับ IPNV มีเฉพาะล่าสุดการดำเนินการ experimentally และรู้ขั้นตอนเริ่มต้นในการพัฒนาวิธีการฉีดแบบดั้งเดิม [13] ใช้ฉีดบาดทะยักจากค่าวัคซีนดีเอ็นเอจากไวรัสเช่นไวรัสติดเชื้อ haematopoietic การตายเฉพาะส่วน (IHNV) หรือ septicaemia haemorrhagic ไวรัสไวรัส (VHSV) เรียบร้อยแล้ว ฉีด intraperitoneal ยังเป็นประจำใช้สำหรับค่าวัคซีนอื่น ๆ เช่นค่าวัคซีน recombinant multivalent ผลิตภัณฑ์ และระบบอัตโนมัติสำหรับฉีดได้พัฒนา [3] อย่างไรก็ตาม ปากรู้จะง่ายต่อการดูแล และจะแสดงทางเลือกสำคัญ immunize ปลารัส อย่างไรก็ตาม ยังมีบางรายงานของวิธีการจัดส่งวัคซีนประสบความสำเร็จไม่ใช่ฉีด พร้อมจัดส่งในอาหารที่ไม่ได้รับอนุญาตเป็นส่วนใหญ่เพื่อป้องกันโรคจากแบคทีเรีย แต่ไวรัสไม่ [4]ก่อนหน้านี้เราอธิบายวัคซีนดีเอ็นเอที่ได้มาจากยีน VP2 ของ IPNV แทรก plasmid เป็นนิพจน์ และนึ้เป็น microspheres แอลจิเนต การจัดส่งที่ปากของ plasmid (ยกเว้นใน PBS) ที่ดำเนินการด้วยตนเองเพื่อให้วัคซีนสม่ำเสมอปลาใต้ศึกษา แข็งแรงป้องกันสำเร็จด้วยวิธีนี้ ประมาณ 83% อยู่รอดสัมพัทธ์เมื่อท้าทาย 15 และ 30 วันหลังจากจัดส่งวัคซีน แน่นอน ค่าแรงของ IFN และ Mx โปรตีนต้านไวรัสที่ทำให้เกิด IFN ถูกบันทึก 7 และ 15 วันหลังฉีดวัคซีน (pv) [14] และ [29] อย่างไรก็ตาม วิธีการใหม่ ๆ เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการจัดส่งปากวัคซีนดีเอ็นเอจะเพียงแต่ให้ข้อมูลน่าสนใจเกี่ยวกับการจัดส่งโดยรวมในอนาคตของเหล่านี้รู้ คีย์จะเข้าใจปฏิกิริยา mucosal และเซลภูมิคุ้มกัน ปากจัดส่งค่าวัคซีนดีเอ็นเอเป็นกระบวนการที่ได้รับงานสำรวจ โดยเฉพาะอย่างยิ่งกับ IPNV ดังนั้น มีสร้างวัคซีนที่ประสบความสำเร็จก่อให้เกิดปัญหาที่เหมาะสมป้องกันภูมิคุ้มกัน ขั้นตอนถัดไปควรได้เพื่อ ตรวจสอบถ้าวัคซีนนี้สามารถจัดส่งได้ในอาหารโดยไม่สูญเสียผลประโยชน์เนื่องจากรุนแรงที่พบในระหว่างการขนส่งระบบเป้าหมายของการทำงานปัจจุบันคือการ ตรวจสอบประสิทธิภาพกับ IPNV ของการ pcDNA-VP2-นึ้ในแอลจิเนต และรวมเข้าไปในอาหารปลา และการตอบสนองภูมิคุ้มกันที่จะก่อให้เกิดในเรนโบว์เทราต์ ระบุว่าวิธีการนี้แสดง ผลลัพธ์ที่คล้ายกับที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ศักยภาพควรจะเพิ่มเติมประเมินประยุกต์ใช้ในเชิงอุตสาหกรรม
การแปล กรุณารอสักครู่..

1 . บทนำ
การควบคุมโรคติดเชื้อเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อรักษาระดับการเพิ่มผลผลิตในอุตสาหกรรมการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ ผลกระทบทางเศรษฐกิจของโรคติดเชื้อ โดยเฉพาะการศึกษาที่เกี่ยวกับสาเหตุของไวรัส , ภัยคุกคามทั่วโลกคงที่ในอุตสาหกรรมปลา salmonid การวิจัยเพื่อหาวิธีที่มีประสิทธิภาพเพื่อลดความสูญเสียดังกล่าวการฉีดวัคซีนเป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดเพื่อต่อสู้กับโรคในการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ กลยุทธ์ที่เหมาะสม เพื่อป้องกันและหลีกเลี่ยงการแพร่กระจายของการติดเชื้อไวรัสในปลา โดยเฉพาะปลาในฟาร์มที่เลี้ยงภายใต้สภาพการเลี้ยง . แม้ว่าชนิดของวัคซีนไวรัสได้ถูกอธิบายไว้สำหรับปลา รวมทั้งเป็น inactivated , ,เปปไทด์สังเคราะห์หรือ subunit วัคซีน [ 1 ] , [ 2 ] และ [ 3 ] การป้องกันมักไม่สมบูรณ์ ดังนั้น การศึกษาเป็นสิ่งจำเป็นที่จะผลิตวัคซีนที่สามารถกระตุ้นได้นานขึ้นและเครียดน้อยลงภูมิต้านทานวิธีการบริหาร [ 4 ]วัคซีนพันธุกรรมถูกพัฒนาสำหรับสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมในทศวรรษที่ 1990 และการออกแบบหลายเพื่อป้องกันหัวได้ทดสอบใน salmonid ปลาสายพันธุ์ [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] , [ 8 ] , [ 9 ] , [ 10 ] [ 11 ] และ [ 12 ] เมื่อเร็วๆ นี้ อื่น ๆวัคซีนดีเอ็นเอได้รับการอธิบายเพื่อต่อสู้กับการติดเชื้อโรคเนื้อตายไวรัสเชื้อโรคไวรัสของ ipnv ) อีก salmonid ปลา [ 13 ] , [ 14 ] และ [ 15 ] .
โรคติดเชื้อไวรัส ( pancreatic necrosis ipnv ) เป็นประเภท ชนิด ของ สกุล aquabirnavirus จากครอบครัวเบอร์น่าไวรัส [ 16 ] ไวรัสจะไม่คลุมและพวกเขาประกอบด้วยสองส่วน ( A , B ) ของ Double stranded RNA ส่วนมีขนาดใหญ่ของทั้งสอง ( ประมาณ 3.1 kbp ) และ Intel และ vp2 vp3 สองหลักโครงสร้างโปรตีนของไวรัส [ 17 ] และ [ 18 ]การ vp2 โปรตีนเป็นชนิดแอนติเจนที่สามารถกระตุ้นการผลิตฟองฟอดที่สามารถปกป้องปลาอ่อนแอจากการติดเชื้อไวรัส [ 19 ] , [ 20 ] และ [ 21 ] ipnv เป็นหนึ่งในสาเหตุหลักของการเสียชีวิตทั่วโลกสำหรับปลา salmonid เยาวชน ถูกทำลายโดยเฉพาะอย่างยิ่งในไข่ salmonid และลูกปลา [ 22 ]ปลาที่รอดตาย IPN epizootics พัฒนาถาวรไวรัส การติดเชื้อหรือภาวะพาหะที่สามารถอย่างต่อเนื่องการส่งไวรัสเพื่อประชากรอื่น ๆความไวของปลา รวมถึงตนเอง ลูกหลาน [ 23 ] , [ 24 ] , [ 25 ] และ [ 26 ] ( สำหรับรีวิวดูอ้างอิง [ 22 ] [ 27 ] และ [ 28 ] )
ทางพันธุกรรมฉีดวัคซีน ipnv มีเพียงเมื่อเร็ว ๆนี้ ) ,และขั้นตอนแรกในการพัฒนาจะเน้นวิธีการแบบฉีด [ 13 ] ฉีดวัคซีนดีเอ็นเอถูกนำมาใช้กับไวรัสเช่นโรคติดเชื้อไวรัส ( ihnv ที่แท้จริงของไวรัส ( ไวรัส ) หรือตกเลือดภาวะเลือดเป็นพิษ vhsv ) การฉีดเข้าช่องท้อง ก็ถูกตรวจใช้วัคซีนอื่น ๆเช่น วัคซีน recombinant มัลติวาเลนต์และผลิตภัณฑ์ โดยอัตโนมัติ และระบบฉีดได้ถูกพัฒนาขึ้น [ 3 ] อย่างไรก็ตาม วัคซีนในช่องปากจะง่ายกว่าที่จะให้พวกเขาเป็นตัวแทนของทางเลือกที่สำคัญในปลาและต่อต้านไวรัส อย่างไรก็ตาม ยังคงมีรายงานไม่กี่สำเร็จวัคซีนส่งวิธีอื่นมากกว่าการฉีดด้วยการส่งมอบอาหารได้รับอนุญาต ส่วนใหญ่เพื่อป้องกันแบคทีเรีย แต่ไม่ใช่โรค [ 4 ] .
เราเคยอธิบายดีเอ็นเอวัคซีนที่มาจากจีน vp2 ของ ipnv แทรกนิพจน์ plasmid เกาะกุมในเนตไมโครสเฟียร์ การจัดส่งในช่องปากของพลาสมิด ( เจือจางใน PBS ) ได้ด้วยตนเอง เพื่อที่จะให้วัคซีนชุดของปลาภายใต้การศึกษาการป้องกันที่แข็งแกร่งได้บรรลุในลักษณะนี้มีประมาณ 83% เทียบการอยู่รอดเมื่อท้าทาย 15 และ 30 วัน หลังจากฉีดวัคซีน ส่ง แน่นอน แข็งแรง สีหน้าของ IFN และ IFN เกิดไวรัส MX โปรตีนอัด 7 และ 15 วัน หลังการฉีดวัคซีน ( PV ) [ 14 ] และ [ 29 ] อย่างไรก็ตามนวนิยายวิธีการปรับปรุงประสิทธิภาพของวัคซีนดีเอ็นเอ การส่งมอบจะไม่เพียง แต่ให้ข้อมูลที่น่าสนใจเกี่ยวกับอนาคตของมวลการส่งมอบวัคซีนเหล่านี้ แต่ยังคีย์เข้าใจภูมิคุ้มกันชนิดเซลล์เยื่อเมือกและปฏิกิริยา การจัดส่งในช่องปากของวัคซีนดีเอ็นเอเป็นกระบวนการที่มีงานสำรวจ โดยเฉพาะกับ ipnv . ดังนั้นการสร้างวัคซีนที่ก่อให้เกิดการตอบสนองภูมิคุ้มกันป้องกันความเหมาะสม ขั้นตอนต่อไปควรจะตรวจสอบว่าวัคซีนนี้สามารถส่งในอาหารโดยไม่สูญเสียของผลประโยชน์ เนื่องจากมีประสบการณ์ในระบบทางเดินอาหารที่รุนแรงเงื่อนไขการขนส่ง .
เป้าหมายของงานวิจัยนี้คือ เพื่อศึกษาประสิทธิภาพกับ ipnv ของ pcdna-vp2-encapsulated ในเนต และรวมเข้าไปในตัวปลา และมันก่อให้เกิดการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันในปลาเทราท์ . ระบุว่าวิธีนี้จะปรากฏขึ้นเพื่อสร้างผลลัพธ์ที่คล้ายกับที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ มีศักยภาพ ส่งเสริมการประเมินเพื่อใช้ในอุตสาหกรรม
การแปล กรุณารอสักครู่..
