4.2. Current studies on the develop

4.2. Current studies on the development of MERS-CoV S protein RBD-based subunit vaccines Based on our previous experience in developing SARS-CoV RBD-based subunit vaccines, we rapidly identified the RBD of MERS-CoVas an essential vaccine target for MERS. We have optimized theMERS-CoV RBD region and identified a critical neutralizing domain,among the five RBD fragments tested that induces the highest neu-tralizing antibodies against MERS-CoV infection (Ma et al., 2014b).Our progress in the development of MERS-CoV RBD-based subunit vaccines is summarized below.4.2.1. Identification of a RBD of MERS-CoV S protein as anessential target for MERS vaccine development To identify the RBD of MERS-CoV, we initially aligned thesequences of MERS-CoV S protein with those of SARS-CoV Sprotein and found that residues 377–662 in the MERS-CoV S pro-tein shared similar core structures with SARS-CoV RBD, increasing the likelihood that the RBD of MERS-CoV might be located in thisregion (Jiang et al., 2013). A recombinant protein (S377-662-Fc)containing residues 377–662 of MERS-CoV S protein fused with Fcfragment of human IgG was expressed in the culture supernatant of mammalian cell 293T for the purpose of forming conformational structures and, thus, increasing immunogenicity (Du et al., 2013c).As expected, the expressed recombinant protein was able toform a high molecular-weight molecule, as shown in nonboiled samples in SDS-PAGE (Fig. 3A, left), which was recognized byMERS-CoV S1-specific antibodies (Fig. 3A, right). Detection of thebinding of S377-662-Fc with the receptor of MERS-CoV, DPP4, byco-immunoprecipitation assay revealed that this protein boundsignificantly to soluble DPP4 (sDPP4) and cell-associated DPP4 inDPP4-expressing Huh-7 cells, being recognized by anti-DPP4 andanti-MERS-CoV-S1 antibodies, respectively (Fig. 3B). ELISA and flowcytometry analyses indicated that S377-662-Fc bound to sDPP4 andHuh-7 in a dose-dependent manner (Du et al., 2013c). These datasuggest that the expressed recombinant protein formed conforma-tional structures and that the predicted 286-amino acid fragmentcontained MERS-CoV RBD.Further evaluation of the immunogenicity of the identifiedMERS-CoV RBD demonstrated that the expressed recombinantS377-662-Fc protein induced MERS-CoV RBD-specific antibodiesin mice subcutaneously (s.c.) immunized after two vaccinations,resulting in the effective neutralization of MERS-CoV infection inVero E6 cells in vitro (Du et al., 2013c), indicating that this regionmay serve as an essential target for developing MERS subunit vac-cines.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4.2. ปัจจุบันการศึกษาพัฒนาความรู้ตาม RBD ย่อยโปรตีน MERS CoV S ตามประสบการณ์ของเราก่อนหน้านี้ในการพัฒนารู้ SARS CoV RBD โดยย่อย เราอย่างรวดเร็วระบุการ RBD ของ MERS-CoVas เป้าหมายวัคซีนจำเป็นสำหรับ MERS เราได้ปรับพื้นที่ RBD theMERS CoV และระบุโด neutralizing สำคัญ ระหว่างห้า RBD ชิ้นส่วนผ่านทดสอบที่แท้จริงที่แอนตี้ neu tralizing สูงสุดกับการติดเชื้อ MERS CoV (Ma et al., 2014b) ความคืบหน้าของเราในการพัฒนารู้ย่อยตาม RBD MERS CoV below.4.2.1 สรุปได้ รหัสโปรตีน S RBD MERS CoV anessential เป้าหมายสำหรับการพัฒนาวัคซีน MERS ระบุการ RBD ของ MERS-CoV เราเริ่มชิด thesequences MERS CoV S โปรตีนกับโรคนี้ CoV Sprotein และพบการตกค้าง 377 – 662 ใน S MERS CoV pro-นี้ร่วมโครงสร้างหลักคล้ายกับ SARS CoV RBD เพิ่มโอกาสที่การ RBD ของ MERS-CoV อาจอยู่ในเรื่องนี้ภูมิภาค (Jiang et al , 2013) วททชโปรตีน (S377-662-Fc) ตกค้างมี 377 – 662 S MERS CoV โปรตีนพร้อม Fcfragment ของ IgG มนุษย์ถูกแสดงใน supernatant วัฒนธรรมของ mammalian เซลล์ 293T เพื่อขึ้นรูปโครงสร้าง conformational และ จึง เพิ่ม immunogenicity (ดู et al., 2013 c) ตามที่คาดไว้ แสดง recombinant โปรตีนถูกสามารถ toform โมเลกุลมีน้ำหนักโมเลกุลสูง เป็นแสดงในตัวอย่าง nonboiled ในองค์กรหน้า (Fig. 3A ซ้าย), ซึ่งถูกรับรู้เฉพาะ CoV S1 byMERS แอนตี้ (Fig. 3A ขวา) ตรวจพบ thebinding ของ S377-662-Fc กับตัวรับของ MERS CoV, DPP4, byco-immunoprecipitation วิเคราะห์เปิดเผยที่นี้ boundsignificantly โปรตีนจะละลายน้ำ DPP4 (sDPP4) และเชื่อมโยงเซลล์ DPP4 inDPP4 แสดง Huh-7 ได้รับการรับรอง โดยแอนตี้ต่อต้าน-DPP4 andanti-MERS-CoV-S1 ตามลำดับ (Fig. 3B) วิเคราะห์ ELISA และ flowcytometry ระบุว่า S377-662-Fc กับ sDPP4 andHuh-7 อย่างขึ้นอยู่กับปริมาณรังสี (ดู et al., 2013c) Datasuggest เหล่านี้ว่า recombinant โปรตีนแสดงรูปโครงสร้าง conforma tional และการคาดการณ์ 286 อะมิโนกรด fragmentcontained RBD MERS CoV ประเมินเพิ่มเติมของ immunogenicity ของ RBD identifiedMERS CoV แสดงว่า โปรตีน recombinantS377-662-Fc แสดงเกิดหนู antibodiesin MERS CoV RBD เฉพาะ subcutaneously (เอส) immunized หลังวัคซีนสอง เกิดปฏิกิริยาสะเทินมีประสิทธิภาพ MERS CoV เชื้อ inVero E6 เซลล์เพาะเลี้ยง (ดู et al., 2013c) ระบุที่ regionmay นี้เป็นเป้าหมายจำเป็นสำหรับการพัฒนา MERS ย่อย vac-cines

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4.2 ปัจจุบันการศึกษาในการพัฒนาของเมอร์ส COV-S โปรตีน RBD-based วัคซีน subunit จากประสบการณ์ที่ผ่านมาของเราในการพัฒนาโรคซาร์ส COV RBD-based วัคซีน subunit ที่เราระบุอย่างรวดเร็วของเมอร์ส RBD-Covas เป้าหมายวัคซีนที่จำเป็นสำหรับเมอร์ส เรามีการเพิ่มประสิทธิภาพในภูมิภาค themers-COV RBD และระบุโดเมน neutralizing สำคัญในห้าเศษ RBD ทดสอบที่ก่อให้เกิดสูงสุดแอนติบอดี neu-tralizing ต่อการติดเชื้อ mers-COV (Ma et al., 2014b) ความคืบหน้าของเราในการพัฒนาของเมอร์ส -CoV RBD-based วัคซีน subunit สรุป below.4.2.1 บัตรประจำตัวของเมอร์สของ RBD-COV โปรตีน S เป็นเป้าหมาย anessential สำหรับการพัฒนาวัคซีนเพื่อ mers ระบุ RBD ของเมอร์ส-COV, เราเริ่มชิด thesequences ของเมอร์ส COV-S โปรตีนกับบรรดาโรคซาร์ส COV Sprotein และพบว่าสารตกค้าง 377-662 ใน mers COV-S โปรเทียนที่ใช้ร่วมกันโครงสร้างหลักคล้ายกับโรคซาร์ส COV RBD เพิ่มโอกาสว่า RBD ของเมอร์ส-COV อาจจะอยู่ใน thisregion นี้ (เจียง et al., 2013) โปรตีน recombinant (S377-662-Fc) ที่มีสารตกค้าง 377-662 ของโปรตีน mers COV-S ผสมกับ Fcfragment IgG ของมนุษย์ได้รับการแสดงในสารละลายวัฒนธรรมของเซลล์ 293T เลี้ยงลูกด้วยนมเพื่อวัตถุประสงค์ในการสร้างโครงสร้างโครงสร้างและทำให้ภูมิคุ้มกันเพิ่มขึ้น (Du et al., 2013c) .As คาดว่าโปรตีนแสดงเป็น toform สามารถโมเลกุลน้ำหนักโมเลกุลสูงดังแสดงในตัวอย่าง nonboiled ใน SDS-PAGE (รูป. 3A ซ้าย) ซึ่งได้รับการยอมรับ byMERS COV-S1 แอนติบอดี -specific (รูป. 3A, ขวา) การตรวจหา thebinding ของ S377-662-Fc กับตัวรับของเมอร์ส-COV, DPP4, ทดสอบ byco-immunoprecipitation เปิดเผยว่าโปรตีนนี้จะ boundsignificantly DPP4 ที่ละลายน้ำได้ (sDPP4) และเซลล์ที่เกี่ยวข้อง DPP4 inDPP4-แสดง Huh-7 เซลล์ได้รับการยอมรับจาก แอนติบอดีต่อต้าน DPP4 andanti-mers-COV-S1 ตามลำดับ (รูป. 3B) วิธี ELISA และ flowcytometry วิเคราะห์ชี้ให้เห็นว่า S377-662-Fc ผูกไว้กับ sDPP4 andHuh-7 ในลักษณะปริมาณขึ้นอยู่กับ (ที่ Du et al., 2013c) เหล่านี้ datasuggest แสดงว่าโปรตีนที่เกิดขึ้นโครงสร้าง Conforma-tional และคาดการณ์ว่ากรดอะมิโน 286 fragmentcontained mers-COV RBD.Further การประเมินผลของการกระตุ้นภูมิคุ้มกันของ identifiedMERS-COV RBD แสดงให้เห็นว่าที่แสดงออกโปรตีน recombinantS377-662-Fc เหนี่ยวนำให้เกิด MERS- COV หนู antibodiesin RBD เฉพาะใต้ผิวหนัง (SC) วัคซีนหลังจากที่สองการฉีดวัคซีนที่มีผลในการวางตัวเป็นกลางที่มีประสิทธิภาพของการติดเชื้อ mers-COV inVero เซลล์ E6 ในหลอดทดลอง (Du et al., 2013c) แสดงให้เห็นว่านี้ regionmay ทำหน้าที่เป็นเป้าหมายที่สำคัญสำหรับการพัฒนา เมอร์ส subunit VAC-ยาขนานใหม่ ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4.2 . ปัจจุบันศึกษาในการพัฒนามีโปรตีนชนิด RBD จาก mers เป็นวัคซีนตามประสบการณ์ของเราในการพัฒนาวัคซีน ซึ่งมี 8 RBD จากเราอย่างรวดเร็วระบุเงินเป็นเป้าหมายของวัคซีนที่จำเป็นสำหรับ mers โกวาส ง่ายๆ เราได้ปรับ themers RBD มีเขตและระบุการ neutralizing โดเมนในห้าเงินเศษทดสอบที่ก่อให้เกิดหรือสูงสุด tralizing แอนติบอดีต่อเชื้อ mers COV ( ma et al . , 2014b ) ความก้าวหน้าในการพัฒนาวัคซีนชนิดที่ใช้ง่ายๆมี RBD คือสรุปด้านล่าง 4.2.1 . รหัสของเงินของ mers ปก S โปรตีนเป็นเป้าหมาย anessential เพื่อ mers วัคซีน การพัฒนาเพื่อระบุเงินของ COV mers ,เราเริ่มชิด thesequences ของ mers ปก S นั้นมีโปรตีน sprotein โรคซาร์ส และพบว่ามีสารตกค้าง 377 –ใน mers ปกของ Pro เทียนใช้โครงสร้างหลักคล้ายกับโรคซาร์ส มีไข , เพิ่มโอกาสที่เงินของ mers ปกอาจจะอยู่ใน thisregion ( เจียง et al . , 2013 )โปรตีนรีคอมบิแนนท์ ( s377-662-fc ) ที่มีสารตกค้าง 377 – 662 ของ mers ปก S โปรตีนผสมกับ fcfragment ของ IgG มนุษย์แสดงออกในวัฒนธรรมที่นำเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม 293t เพื่อสร้างโครงสร้าง โครงสร้าง และ จึง สามารถเพิ่ม ( du et al . , 2013c ) เป็นไปตามคาด แสดงแนนท์โปรตีนสามารถแท้จริงโมเลกุลน้ำหนักโมเลกุลสูงดังแสดงในตัวอย่างในการศึกษา nonboiled ( รูปที่ 3A , ซ้าย ) ซึ่งเป็นที่ยอมรับว่ามี bymers S1 แอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง ( รูปที่ 3A , ขวา ) การตรวจหา thebinding ของ s377-662-fc กับตัวรับของ mers มี dpp4 byco , immunoprecipitation assay พบว่าโปรตีนที่ละลายน้ำได้ boundsignificantly dpp4 ( sdpp4 ) และเซลล์ที่เกี่ยวข้อง dpp4 indpp4 แสดง huh-7 เซลล์ได้รับการยอมรับโดย anti-dpp4 andanti-mers-cov-s1 แอนติบอดี ตามลำดับ ( รูปที่ 3B ) วิธีโฟลไซโตเมทรีและวิเคราะห์พบว่า s377-662-fc ผูก sdpp4 andhuh-7 ในลักษณะปิดกั้น ( du et al . , 2013c ) เหล่านี้ datasuggest ที่แสดงแนนท์โปรตีนที่เกิดขึ้น conforma tional โครงสร้างและที่คาดการณ์ไว้ 286 กรดอะมิโน fragmentcontained mers ช่วยไข .การประเมินเพิ่มเติมของสามารถของ identifiedmers มีไขแสดงให้เห็นว่าโปรตีนมีการแสดง recombinants377-662-fc mers RBD เฉพาะ antibodiesin หนู subcutaneously ( ซี ) หลังจากการฉีดวัคซีนวัคซีนสอง ส่งผลให้ประสิทธิภาพของการ mers ปิดการติดเชื้อ invero E6 เซลล์ในหลอดทดลอง ( du et al . , 2013c )ระบุว่า regionmay นี้เป็นเป้าหมายที่สำคัญสำหรับการพัฒนา mers ซึ่ง cines Vac .