Trypsin from the viscera of S. basi

Trypsin from the viscera of S. basilisca was extracted and purified successively by the four-step procedure described in Section 2. In the first step, the crude enzyme extract was fractionated with ammonium sulphate. The precipitate formed at 40–80% (w/v) saturation showed higher specific activity (0.23 U/mg of protein), than the precipitate formed at 0–40% saturation (0.05 U/mg of protein). No activity was detected in the final supernatant. The 40–80% fraction, which gave the highest specific activity, was then subjected to Sephadex G-100 gel filtration. This procedure yielded one peak of protease activity (BAPNA) (Fig. 1a). Fractions showing trypsin activity were pooled and then loaded on a Mono Q-Sepharose
anion-exchange chromatography column that had been equilibrated with buffer C. Binding proteins were eluted with a linear gradient of NaCl (0–0.5 M). BAPNA activity appeared in a single peak (Fig. 1b). Finally the active fractions were concentrated by ultrafiltration. The results of the purification procedure are summarised in Table 1. After the final purification step, the trypsin was purified 4.2-fold, with a recovery of 12% and a specific activity of 0.5 U/mg of protein, using BAPNA as a substrate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทริปซินจากศพของ S. basilisca สกัด และบริสุทธิ์ติด ๆ กัน โดยขั้นตอนสี่ขั้นตอนที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 2 ในขั้นแรก สารสกัดเอนไซม์ดิบถูกแบ่ง ด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต Precipitate เกิดขึ้นที่ความเข้ม 40 – 80% (w/v) แสดงให้เห็นว่ากิจกรรมเฉพาะสูง (0.23 U/มิลลิกรัม โปรตีน), กว่า precipitate เกิดที่ 0-40% ความเข้ม (0.05 U/มิลลิกรัม โปรตีน) กิจกรรมไม่พบใน supernatant ขั้นสุดท้าย 40 – 80% เศษส่วน การให้กิจกรรมสูงสุด แล้วถูกยัดเยียดให้กรองเจ Sephadex G-100 ขั้นตอนนี้หาช่วงหนึ่งของกิจกรรมรติเอส (BAPNA) (Fig. 1a) เศษส่วนที่แสดงกิจกรรมทริปซินทางถูกพูแล้ว โหลดในแบบโมโนคิว-Sepharoseanion exchange chromatography คอลัมน์ที่มีการ equilibrated กับบัฟเฟอร์ C. ผูกโปรตีนถูก eluted กับการไล่ระดับสีแบบเส้นตรงของ NaCl (0 – 0.5 M) BAPNA กิจกรรมปรากฏในยอดเดียว (Fig. 1b) สุดท้าย ส่วนงานเข้มข้น โดย ultrafiltration ผลลัพธ์ของขั้นตอนการฟอกจะ summarised ในตารางที่ 1 หลังจากขั้นตอนสุดท้ายฟอก ทริปซินจะได้บริสุทธิ์ 4.2-fold กู้คืน 12% และกิจกรรมของ 0.5 U/มิลลิกรัม โปรตีน ใช้ BAPNA กับพื้นผิว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

trypsin จากอวัยวะภายในของเอส basilisca ถูกสกัดและทำให้บริสุทธิ์อย่างต่อเนื่องโดยขั้นตอนสี่ขั้นตอนที่อธิบายไว้ในมาตรา 2 ในขั้นตอนแรกสารสกัดเอนไซม์ถูก fractionated กับแอมโมเนียมซัลเฟต ตะกอนที่เกิดขึ้นที่ 40-80% (w / v) ความอิ่มตัวของสีที่แสดงให้เห็นกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงสูงกว่า (0.23 U / มิลลิกรัมโปรตีน) กว่าตะกอนที่เกิดขึ้นที่ความอิ่มตัว 0-40% (0.05 U / มิลลิกรัมโปรตีน) ไม่มีกิจกรรมใด ๆ ที่ตรวจพบในสารละลายสุดท้าย ส่วน 40-80% ซึ่งทำให้กิจกรรมเฉพาะสูงสุดยู่แล้ว Sephadex G-100 กรองเจล ขั้นตอนนี้จะให้ผลอย่างใดอย่างหนึ่งจุดสูงสุดของกิจกรรมโปรติเอส (BAPNA) (รูป. 1a) เศษส่วนแสดงกิจกรรม trypsin ถูกรวบรวมและเต็มไปแล้วในโมโน Q-Sepharose
คอลัมน์โคไอออนแลกเปลี่ยนที่ได้รับการ equilibrated กับบัฟเฟอร์ซีโปรตีนถูกผูกกับชะลาดเชิงเส้นของโซเดียมคลอไรด์ (0-0.5 M) กิจกรรม BAPNA ปรากฏในยอดเดียว (รูป. 1b) สุดท้ายเศษส่วนที่ใช้งานมีความเข้มข้นโดยการกรอง ผลที่ได้จากขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ได้สรุปไว้ในตารางที่ 1 หลังจากที่ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สุดท้าย trypsin บริสุทธิ์เป็น 4.2 เท่าที่มีการกู้คืน 12% และเป็นกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของ 0.5 U / mg ของโปรตีนโดยใช้ BAPNA เป็นสารตั้งต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เอนไซม์จากเครื่องในของ S . basilisca สกัดบริสุทธิ์อย่างต่อเนื่อง โดยสี่ขั้นตอน ขั้นตอนที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 2 ในขั้นตอนแรกของเอนไซม์สกัดเป็นลำดับด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต ที่ก่อตั้งขึ้นที่ 40 – 80 % ( w / v ) ความเข้มสูงกว่ากิจกรรมจำเพาะ ( 0.23 U / mg โปรตีน ) กว่าที่ก่อตั้งขึ้นที่ 0 – 40 % อิ่มตัว ( 0.05 U / mg โปรตีน )ไม่มีกิจกรรมที่ตรวจพบในนำสุดท้าย 40 – 80 % ส่วนที่ให้กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงมากที่สุด ก็ต้องเจล Sephadex G-100 การกรอง ขั้นตอนนี้ให้ผลหนึ่งสูงสุดของกิจกรรมเอนไซม์โปรติเอส ( bapna ) ( รูปที่ 1A ) แสดงกิจกรรมของเอนไซม์ถูกรวมเศษส่วนและโหลดบน
ซึ่งโมโนการแลกเปลี่ยนไอออน chromatography คอลัมน์ที่ถูก equilibrated บัฟเฟอร์ ซี โปรตีนที่จับกับลาดเชิงเส้นคือตัวอย่างของเกลือโซเดียมคลอไรด์ ( 0 – 0.5 M ) กิจกรรม bapna ปรากฏอยู่ในยอดเดียว ( รูปที่ 1A ) ในที่สุดเศษส่วนปราดเปรียวมีความเข้มข้น โดยผสม . ผลของกระบวนการบำบัดจะสรุปในตารางที่ 1 หลังจากขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สุดท้ายการเปลี่ยนแปลงเป็น 4.2-fold บริสุทธิ์ กับการกู้คืน 12% และกิจกรรมเฉพาะของ 0.5 U / mg โปรตีน โดยใช้ bapna เป็นสับสเตรท