RESULTSBiological indexingThree mon

RESULTS
Biological indexing
Three months after inoculation, 20 samples grafted on
citron plants showed mild epinasty and leaf roll
symptoms, and the remaining samples have no typical
of citrus viroid infection. 58 samples induced typical
symptoms of stunting and epinasty on the indicators
one year after inoculation, whereas the rest 7 samples
did not induce symptoms on indicator plants.
One-step RT-PCR assay for detection and
characterization of citrus viroids
Amplified fragments specific to each of the target pathogens
were obtained from tested field samples, whereas
no nonspecific band was detected in healthy citrons.
Fig.1 shows the amplification results of 5 citrus viroids
whole genome by uniplex RT-PCR. The size (bp) of
the amplified products for each viroid was 371 for
CEVd; 318 for CBLVd; 302 for HSVd; 294 for CVdIII,
and 284 for CVd-IV, respectively. Sequencing confirmed
that these amplicons corresponded to full-length
sequences of those viroids.
To differentiate cachexia variants and non-cachexia
variants of HSVd isolates, the same RT-PCR procedures
have been performed using two discriminating
primer pairs designed by Bernad and Duran-Vila (2006).
PCR yielded 220 bp amplicon (primer pair: HSVd-R2/
HSVd-F2´) only with samples infected by non-cachexia
variants of HSVd, whereas yielded 283 bp amplicon
(primer pair: HSVd-R2/HSVd-F2) only with samples
infected by cachexia isolates (Fig.2). To date, only one
cachexia variants of HSVd from Newhall navel orange
collected from Guizhou Province has been identified
by RT-PCR for strain characterization.
One-step multiplex RT-PCR assay for
simultaneous detection of citrus viroids
In the present study we have developed a one-step
multiplex RT-PCR for the simultaneous detection of
CEVd, CBLVd, HSVd, CVd-III, and CVd-IV, plus an
internal control, and meanwhile, amplified fragments
can easily be differentiated by agarose gel electrophoresis
because of redesigning partial primer sets.
Fig.3 shows the amplified fragments by one-step multiplex
RT-PCR from extracts of 7 infected samples and

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์ดัชนีทางชีวภาพสามเดือนหลังจาก inoculation ทาบบน 20 ตัวอย่างแสดงให้เห็นว่าพืช citron epinasty อ่อนและม้วนใบอาการ และตัวอย่างที่เหลือมีไม่ทั่วไปของการติดเชื้อไวรอยด์ส้ม ตัวอย่างที่ 58 เกิดทั่วไปอาการ stunting และ epinasty บนตัวบ่งชี้หนึ่งปีหลังจาก inoculation ในขณะที่ตัวอย่างที่เหลือ 7ไม่ก่อให้เกิดอาการในพืชตัวบ่งชี้ขั้นทดสอบ RT-PCR สำหรับการตรวจสอบ และจำแนกลักษณะของส้ม viroidsส่วนขยายเฉพาะของเชื้อโรคเป้าหมายได้รับมาจากตัวอย่างทดสอบฟิลด์ ขณะที่วงไม่เจาะจงตรวจพบใน citrons เพื่อสุขภาพFig.1 แสดงผลขยายของ viroids ส้ม 5พันธุทั้ง โดย uniplex RT-PCR ขนาด (bp)ผลิตภัณฑ์ขยายสำหรับแต่ละไวรอยด์เป็น 371 สำหรับCEVd 318 สำหรับ CBLVd 302 สำหรับ HSVd 294 สำหรับ CVdIIIและ 284 สำหรับ CVd-IV ตามลำดับ ลำดับที่ได้รับการยืนยันที่ amplicons เหล่านี้ผูกพันเต็มตัวไปลำดับที่ viroidsเพื่อแบ่งแยกย่อย cachexia และ -cachexiaแยกย่อยของ HSVd, RT-PCR ขั้นตอนเดียวกันมีการใช้สองเหยียดพวกผิวคู่ไพรเมอร์ที่ออกแบบ โดย Bernad และ Duran พอร์ตวิลา (2006)PCR ผล 220 bp amplicon (คู่รองพื้น: HSVd R2 /HSVd-F2´) กับตัวอย่างที่ติดเชื้อไม่ใช่ cachexia เท่านั้นตัวแปร HSVd ในขณะที่ผล 283 bp amplicon(คู่รองพื้น: HSVd-R2/HSVd-F2) กับตัวอย่างเท่านั้นติดเชื้อ โดย cachexia แยก (Fig.2) วันที่ เพียงหนึ่งcachexia มาย HSVd จากสีส้มสะดือเดนแฮมสปริงส์รวบรวมจากจังหวัดกุ้ยโจวได้รับการระบุโดย RT-PCR สำหรับจำแนกลักษณะสายพันธุ์ขั้นมัลติเพล็กซ์ RT-PCR ทดสอบสำหรับการตรวจจับ viroids ส้มพร้อมกันในการศึกษาปัจจุบัน เราได้พัฒนาเป็นขั้นตอนเดียวมัลติเพล็กซ์ RT-PCR สำหรับตรวจหาพร้อมกันCEVd, CBLVd, HSVd, CVd III และ CVd IV บวกการควบคุมภายใน และในขณะเดียวกัน ขยายส่วนสามารถแยกแยะได้อย่างง่ายดาย โดย agarose เจอิเนื่องจากการออกแบบชุดรองพื้นบางส่วนFig.3 แสดงส่วนขยายตามขั้นมัลติเพล็กซ์RT-PCR จากสารสกัดตัวอย่างไวรัสที่ 7 และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผล
การจัดทำดัชนีชีวภาพ
สามเดือนหลังจากฉีดวัคซีน 20 ตัวอย่างทาบบน
พืชมะนาวแสดงให้เห็น epinasty และใบอ่อนม้วน
อาการและตัวอย่างที่เหลือไม่มีทั่วไป
ของการติดเชื้อไวรอยด์ส้ม 58 ตัวอย่างเหนี่ยวนำให้เกิดโดยทั่วไป
อาการแคระแกรนและ epinasty ในตัวชี้วัด
หนึ่งปีหลังจากการฉีดวัคซีนในขณะที่ส่วนที่เหลือ 7 ตัวอย่าง
ไม่ก่อให้เกิดอาการในพืชดัชนี.
ขั้นตอนหนึ่ง-RT-PCR ทดสอบสำหรับการตรวจสอบและ
ลักษณะของไวรอยด์ส้ม
ชิ้นดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงให้กับแต่ละ เชื้อโรคเป้าหมาย
ที่ได้รับจากตัวอย่างการทดสอบภาคสนามในขณะที่
ไม่มีวงดนตรีเชิญชมถูกตรวจพบใน Citrons มีสุขภาพดี.
รูปที่ 1 แสดงผลการขยาย 5 ส้มไวรอยด์
ทั้งจีโนมโดย Uniplex RT-PCR ขนาด (BP) ของ
ผลิตภัณฑ์ขยายสำหรับแต่ละไวรอยด์เป็น 371 สำหรับ
CEVd; 318 สำหรับ CBLVd; 302 สำหรับ HSVd; 294 สำหรับ CVdIII,
และ 284 สำหรับ CVD-IV ตามลำดับ การเรียงลำดับได้รับการยืนยัน
ว่า amplicons เหล่านี้ตรงกับความยาวเต็ม
ลำดับของไวรอยด์เหล่านั้น.
เพื่อแยกความแตกต่างสายพันธุ์ cachexia และไม่ cachexia
สายพันธุ์ของ HSVd แยกเดียวกันขั้นตอน RT-PCR
ได้รับการดำเนินการโดยใช้สองเหยียด
คู่ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบโดย Bernad และ Duran-วิลา ( . 2006)
PCR ให้ผล 220 BP amplicon (คู่ไพรเมอร์: HSVd-R2 /
HSVd-F2') เท่านั้นที่มีตัวอย่างการติดเชื้อโดยที่ไม่ cachexia
สายพันธุ์ของ HSVd ในขณะที่ให้ผล 283 BP amplicon
(คู่ไพรเมอร์: HSVd-R2 / HSVd-F2) เพียง แต่มีตัวอย่าง
การติดเชื้อโดยไอโซเลท cachexia (รูปที่ 2) ในวันที่มีเพียงหนึ่ง
cachexia สายพันธุ์ของ HSVd จาก Newhall สะดือสีส้ม
ที่เก็บรวบรวมจากจังหวัดกุ้ยโจวได้รับการระบุ
โดย RT-PCR สำหรับสายพันธุ์ลักษณะ.
ขั้นตอนเดียว multiplex RT-PCR ทดสอบสำหรับ
การตรวจสอบพร้อมกันของไวรอยด์ส้ม
ในการศึกษาปัจจุบันเราได้มีการพัฒนา หนึ่งในขั้นตอน
multiplex RT-PCR สำหรับการตรวจสอบพร้อมกันของ
CEVd, CBLVd, HSVd, CVD-III และ CVD-IV บวก
การควบคุมภายในและในขณะเดียวกันเศษขยาย
สามารถจะแตกต่างจากข่าวคราว agarose
เนื่องจากการปรับเปลี่ยนการออกแบบไพรเมอร์บางส่วน ชุด.
รูปที่ 3 แสดงให้เห็นชิ้นส่วนขยายโดยขั้นตอนเดียว multiplex
RT-PCR จากสารสกัดจาก 7 ตัวอย่างและการติดเชื้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลลัพธ์ดัชนีชีวภาพสามเดือนหลังจากที่ได้รับ 20 ตัวอย่างกราฟต์บนตะไคร้พืช พบบริเวณใบอ่อนและม้วนอาการและจำนวนที่เหลือไม่มีทั่วไปส้มเชื้อไวรอยด์ . 58 ตัวอย่าง โดยทั่วไปและอาการของ stunting บริเวณในตัวหนึ่งปีหลังจากที่ได้รับส่วนเหลือ 7 คนไม่ทำให้เกิดอาการที่บ่งชี้ พืชหนึ่งขั้นตอนนี้สำหรับการตรวจสอบและการทดสอบคุณสมบัติของ viroids ส้มชิ้นส่วนของเฉพาะแต่ละเป้าหมายเชื้อโรคที่ได้จากการทดสอบตัวอย่างสนาม ในขณะที่ไม่เจาะจงกลุ่มที่ตรวจพบในมะงั่วมีสุขภาพดีแสดงผลลัพธ์ของ” ( 5 viroids ส้มโดย uniplex ทั้งจีโนมนี้ ขนาด ( BP ) ของการขยายผลิตภัณฑ์แต่ละ viroid คือ 371 สำหรับCEVd ; 318 สำหรับ cblvd ; 302 สำหรับ hsvd ; สำหรับ cvdiii 294 ,เพราะ CVD และ 4 ตามลำดับ การยืนยันที่ amplicons เหล่านี้สอดคล้องกับแบบเต็มตัวลำดับของ viroids เหล่านั้นแยกแยะอาการผอมแห้ง และไม่มีอาการผอมแห้ง ตัวแปรสายพันธุ์ของเชื้อ hsvd ขั้นตอนนี้เหมือนกันมีการใช้ 2 จำแนกไพรเมอร์คู่และออกแบบโดย เบอร์นาร์ด ดูแรน วิลา ( 2006 )PCR ให้ผล 220 BP และ ( ไพรเมอร์คู่ hsvd-r2 /hsvd-f2 ใหม่ ) เท่านั้น มีตัวอย่างติดเชื้อไม่มีอาการผอมแห้งสายพันธุ์ของ hsvd ในขณะที่จำนวน 283 BP และ( ไพรเมอร์คู่ hsvd-r2 / hsvd-f2 ) เฉพาะกับตัวอย่างติดเชื้ออาการผอมแห้งไอโซเลต ( fig.2 ) วัน หนึ่งเท่านั้นอาการผอมแห้ง ตัวแปร hsvd นีวอลส้มจากรวบรวมจากจังหวัดกุ้ยโจวได้รับการระบุโดย RT-PCR เพื่อการจำแนกสายพันธุ์หนึ่งขั้นตอนการทดสอบสำหรับ multiplex RT-PCRการตรวจหา viroids ส้ม พร้อมกันในการศึกษาเราได้พัฒนาขั้นตอนเดียววิธี multiplex พร้อมกันตรวจสอบcblvd CEVd , , hsvd CVD III และ IV พลัส , ซีวีดี ,การควบคุมภายใน และในขณะเดียวกัน ชิ้นส่วนของสามารถจะแตกต่างจากเจลอิเลคโตรโฟเรซีสเพราะออกแบบชุดสีบางส่วนfig.3 แสดงชิ้นส่วนของ one-step multiplex โดย4 . จากสารสกัด 7 ตัวอย่างติดเชื้อ และ