from LAB isolatesLAB cultures were

from LAB isolates
LAB cultures were grown in MRS broth at 37
C and samples
collected every 24 h for a period of 72 h. Twice the volume of 95%
cold ethanol was added to each volume of cell free supernatant, for
exopolysaccharide (EPS) precipitation. Precipitate recovered after
overnight incubation was washed with ethanol, dried and
measured (de Almeida Junior et al., 2015).
Antiadhesive activity of EPS was tested for Escherichia coli, Bacillus
cereus and Staphylococcus aureus (Das, Mukherjee, & Sen,
2009a). The test was repeated thrice and results expressed as
mean ± standard deviation of three independent experiments.
Different concentrations (100e2000 mg/ml) of EPS were separately
incubated with 1 ppm of Cd(II) and Pb(II) solutions for 3 h.
Resulting suspensions were centrifuged and supernatants subjected
to quantification of unbound metals by using appropriate
blanks and standards for calibration. Atomic absorption spectrophotometer
equipped with a flow spoiler (air-acetylene flame,
wave length ¼ 217 nm, slit width of 0.73 nm) and a lamp ignited
with acetylene was employed for this purpose. Software used to
analyze the data was AAWinlab Analyst (Das, Mukherjee, & Sen,
2009b). Results were expressed as mean ± standard deviation of
three independent readings.
2.10. Characterization of bacteriocin
2.10.1. Biomedical application potentials
Cell free culture supernatants (containing bacteriocin) were
collected daily from LAB cultures (SB71, SB73 and SB93) growing in
MRS for 1e5 days. Their pH values were checked. Supernatants
were then neutralized and filter-sterilized (0.2 mm). Antimicrobial
activity was determined against E. coli, B. cereus, S. aureus, Vibrio
cholerae and Micrococcus luteus (Das et al., 2008). After 5 days,
bacteriocins were divided into two sets ― one set was stored at 4
C
and the other at 20
C. Antimicrobial activities of both sets were
determined after 90days of incubation. Tests were performed in
triplicate and inhibition zones expressed as mean ± standard deviation
of three independent experiments.
Antiadhesive activity of SB93 bacteriocinwas tested by the same
procedure as employed for EPS. The test was repeated thrice and
results expressed as the mean ± standard deviation of three
independent readings from separate experiments.
2.10.2. Sensitivity of bacteriocin to pH, temperature and enzymatic
action
The cell free culture supernatants (containing bacteriocin) were
checked for their pH values. The samples were then divided into
two sets. One set was subjected to various pH adjustments in the
range of 2e12. The other set was neutralized and then subjected to
different treatments like heating them separately at 60
C, 100
C &
121
C for 10 & 20 min and also incubating them separately with
pepsin, trypsin and proteinase for 1 h at 37
C. Residual antimicrobial
activity in all the sets was tested using untreated neutralized
bacteriocin as control in all instances.
2.10.3. Molecular mass determination
The cell free supernatant of SB93 culture was treated with
butanol to extract bacteriocin (Ahmad, Iqbal, Haseeb, & Khan,
2014). Thin layer chromatography (TLC) of bacteriocin was performed
in a solvent system of butanol, acetic acid and water in the
proportion of 4:1:1 (Ahmad et al., 2014).
Molecular mass of SB93 bacteriocin was determined by SDSPAGE
with 5% stacking gel and 12% separating gel. After electrophoresis,
one half of the gel was stained with Coomassie blue and
fixed in water containing 20% methanol and 10% glacial acetic acid
(Lu et al., 2014).
The other half was washed thrice with sterile water, overlaid
with V. cholerae culture and incubated at 37
C for 24 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จากแยกห้องปฏิบัติการห้องปฏิบัติการวัฒนธรรมที่ปลูกในน้ำซุป MRS ที่ 37 C และตัวอย่างรวบรวมทุก 24 ชั่วโมงเป็นระยะเวลา 72 h. สองระดับ 95%เอทานอลเย็นถูกแต่ละไดรฟ์ข้อมูลของ supernatant ฟรีเซลล์ สำหรับปริมาณฝน exopolysaccharide (EPS) กู้คืนหลังจากตะกอนกกไข่คืนถูกล้าง ด้วยเอทานอล แห้ง และวัด (de หน้าจูเนียร์ et al. 2015)ทดสอบกิจกรรม antiadhesive ของ EPS สำหรับ Escherichia coli, Bacilluscereus และหมอเทศข้างลาย Staphylococcus (Das, Mukherjee และ เซน(2009a)) . การทดสอบซ้ำสามครั้ง และแสดงผลลัพธ์เป็นหมายถึง ±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของการทดลองอิสระสาม(100e2000 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) ความเข้มข้นแตกต่างกันของ EPS แยกต่างหากรับการกกกับ 1 ppm ของโซลูชั่น Cd(II) และ Pb(II) สำหรับ 3 ชมได้จากผลสารแขวนลอย และอยู่ภายใต้ supernatantsการนับจำนวนผูกโลหะโดยการใช้ที่เหมาะสมช่องว่างและมาตรฐานสำหรับการสอบเทียบ สเปคดูดกลืนโดยอะตอมมีสปอยเลอร์ที่ไหล (เปลวไฟอากาศอะเซทิลีนคลื่นความยาว ¼ 217 nm กรีดกว้าง 0.73 nm) และติดไฟโคมไฟกับอะเซทิลีนถูกใช้สำหรับวัตถุประสงค์นี้ ซอฟต์แวร์ที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลคือ AAWinlab นักวิเคราะห์ (Das, Mukherjee และ เซน2009b) ถูกแสดงผลเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของการอ่านอิสระสาม2.10. สิงคเท2.10.1 ชีวการแพทย์ประยุกต์ศักยภาพมีเซลล์วัฒนธรรมฟรี supernatants (ประกอบด้วยแบ)รวบรวมทุกวันจากห้องปฏิบัติการวัฒนธรรม (SB71, SB73 และ SB93) เติบโตในนาง 1e5 วัน มีการตรวจสอบค่า pH ของ Supernatantsแล้วสามารถปลดชนวนระเบิด และกรองฆ่าเชื้อ (0.2 มม.) สารต้านจุลชีพกำหนดกิจกรรมกับ E. coli, S. หมอเทศข้าง ลาย เค็ม B. cereuscholerae และ Micrococcus luteus (Das et al. 2008) หลังจาก 5 วันbacteriocins ถูกแบ่งออกเป็น 2 ชุดชุดหนึ่ง―ถูกเก็บไว้ที่ 4 Cและอื่น ๆ ที่ทั้งสองชุดกิจกรรมต้านจุลชีพ 20 เซลเซียสกำหนดหลังจาก 90days การกกไข่ ดำเนินการในการทดสอบโซนลข้อและการยับยั้งที่แสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานการทดลองอิสระ 3กิจกรรม antiadhesive ของ bacteriocinwas SB93 ทดสอบ โดยตรงขั้นตอนที่ใช้สำหรับ EPS การทดสอบซ้ำสามครั้ง และผลลัพธ์ที่แสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของสามการอ่านค่าจากการทดลองแยกอิสระ2.10.2 การไวของคเทเพื่อวัดค่า pH อุณหภูมิ และเอนไซม์การดำเนินการมีการ supernatants ฟรีวัฒนธรรมเซลล์ (ประกอบด้วยแบ)ตรวจสอบค่า pH ของ จากนั้นแบ่งกลุ่มตัวอย่างสองชุด ชุดหนึ่งได้ภายใต้การปรับปรุงค่า pH ต่าง ๆ ในการช่วงของ 2e12 ชุดเป็นกลาง และจากนั้น ภายใต้การรักษาแตกต่างกันเช่นความร้อนพวกเขาต่างหากที่ 60 C, 100 C และ121 C 10 และ 20 นาทีและยัง incubating พวกเขาแยกต่างหากด้วยเพพซิน ทริปซิน และ proteinase สำหรับ h 1 ที่สารต้านจุลชีพตกค้าง 37 เซลเซียสกิจกรรมในทุกชุดได้รับการทดสอบใช้ไม่ถูกรักษา neutralizedแบเป็นตัวควบคุมในอินสแตนซ์ทั้งหมด2.10.3 กำหนดมวลโมเลกุลSupernatant ฟรีเซลล์ SB93 วัฒนธรรมได้รับการรักษาด้วยบิวทานอการแยกคเท (อะหมัด อิก ปวีณาธนะวิบูลย์ และ คาน2014) ทำการ chromatography ชั้นบาง (TLC) ของแบในระบบตัวทำละลายของบิวทานอ กรดอะซิติก และน้ำในการสัดส่วน 4:1:1 (อะหมัด et al. 2014)กำหนดมวลโมเลกุลของคเท SB93 โดย SDSPAGEมีซ้อนเจล 5% และ 12% แยกเจ หลังจากอิครึ่งหนึ่งของเจลถูกย้อม ด้วย Coomassie blue และแก้ไขในน้ำที่ประกอบด้วยเมทานอล 20% และกรดอะซิติกน้ำแข็ง 10%(Lu et al. 2014)อีกครึ่งหนึ่งถูกล้างเลยน้ำหมัน ซ้อนกับ V. cholerae วัฒนธรรม และรับการกกที่ 37 C ใน 24 ชม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จากห้องปฏิบัติการที่แยก
วัฒนธรรม LAB ถูกปลูกในน้ำซุป MRS ที่ 37 องศาเซลเซียสและตัวอย่าง
ที่เก็บรวบรวมทุก 24 ชั่วโมงเป็นระยะเวลา 72 ชั่วโมง ครั้งที่สองปริมาณของ 95% บริษัท เดอะ
เอทานอลเย็นถูกบันทึกอยู่ในปริมาณของเซลล์ใสฟรีแต่ละสำหรับ
exopolysaccharide (EPS) การเร่งรัด ตะกอนกู้คืนหลังจาก
บ่มค้างคืนถูกล้างด้วยเอทานอลแห้งและ
วัด (เดอไมย์จูเนียร์ et al., 2015).
กิจกรรม Antiadhesive ของกำไรต่อหุ้นได้รับการทดสอบสำหรับเชื้อ Escherichia coli, Bacillus
cereus และ Staphylococcus aureus (ดาสเคอและเสน
2009a) การทดสอบซ้ำสามครั้งและผลแสดงเป็น
ค่าเฉลี่ยส่วนเบี่ยงเบน±มาตรฐานของการทดลองสามอิสระ.
ความเข้มข้นแตกต่างกัน (100e2000 mg / ml) ของกำไรต่อหุ้นถูกแยก
บ่มกับ 1 ppm ของ CD (II) และ Pb โซลูชั่น (II) เป็นเวลา 3 ชม.
ส่งผลให้ แขวนลอยถูกปั่นและ supernatants ภายใต้
การหาปริมาณของโลหะไม่ได้ผูกไว้โดยการใช้ที่เหมาะสม
ช่องว่างและมาตรฐานสำหรับการสอบเทียบ เครื่อง Atomic Absorption Spectrophotometer
พร้อมกับสปอยเลอร์ไหล (เปลวไฟเครื่องอะเซทิลีน
ยาวของคลื่น¼ 217 นาโนเมตรความกว้างของร่อง 0.73 นาโนเมตร) และโคมไฟจุดประกาย
กับอะเซทิลีนถูกจ้างมาเพื่อการนี้ ซอฟแวร์ที่ใช้ในการ
วิเคราะห์ข้อมูลเป็น AAWinlab Analyst (ดาสเคอและเสน
2009b) ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของการ
อ่านสามอิสระ.
2.10 ลักษณะของ bacteriocin
2.10.1 ชีวการแพทย์ศักยภาพการประยุกต์ใช้
supernatants วัฒนธรรมมือถือฟรี (ที่มี bacteriocin) ถูก
เก็บเป็นรายวันจากวัฒนธรรม LAB (SB71, SB73 และ SB93) ที่กำลังเติบโตใน
MRS วัน 1e5 ค่าพีเอชของพวกเขาถูกตรวจสอบ supernatants
ถูกเป็นกลางแล้วและกรองฆ่าเชื้อ (0.2 มิลลิเมตร) ยาต้านจุลชีพ
กิจกรรมก็ตัดสินใจต่อต้านเชื้อ E. coli, B. cereus, เชื้อ S. aureus, Vibrio
cholerae และ Micrococcus luteus (Das et al., 2008) หลังจาก 5 วัน,
bacteriocins ถูกแบ่งออกเป็นสองชุด - ชุดหนึ่งเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส
และอื่น ๆ ที่ 20 C? กิจกรรมต้านจุลชีพของทั้งสองชุดถูก
กำหนดหลังจาก 90days ของการบ่ม การทดสอบได้รับการดำเนินการใน
เพิ่มขึ้นสามเท่าและยับยั้งโซนแสดง±ค่าเฉลี่ยส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน
ของการทดลองสามอิสระ.
กิจกรรม Antiadhesive ของ SB93 bacteriocinwas ทดสอบโดยเดียวกัน
วิธีการที่ใช้ในการเป็นกำไรต่อหุ้น การทดสอบซ้ำสามครั้งและ
ผลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานในสามของ
การอ่านที่เป็นอิสระจากการทดลองแยกต่างหาก.
2.10.2 ความไวของ bacteriocin ค่าพีเอชอุณหภูมิและเอนไซม์
กระทำ
เซลล์ฟรี supernatants วัฒนธรรม (ที่มี bacteriocin) ได้รับการ
ตรวจสอบค่าพีเอชของพวกเขา ตัวอย่างถูกแบ่งออกเป็น
สองชุด หนึ่งชุดได้ภายใต้การปรับค่า pH ต่าง ๆ ใน
ช่วงของ 2e12 ชุดอื่น ๆ ได้รับการเป็นกลางและเป็นไปแล้ว
การรักษาที่แตกต่างกันเช่นความร้อนพวกเขาต่างหากที่ 60? C, 100? C &
121 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 และ 20 นาทีและยังฟักพวกเขาต่างหากที่มี
น้ำย่อย trypsin และโปรเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส . ยาต้านจุลชีพตกค้าง
กิจกรรมในทุกชุดได้รับการทดสอบโดยใช้เป็นกลางได้รับการรักษา
bacteriocin การควบคุมในทุกกรณี.
2.10.3 ความมุ่งมั่นของมวลโมเลกุล
ใสมือถือฟรีของวัฒนธรรม SB93 รับการรักษาด้วย
บิวทานอจะดึงแบค (อาหมัดอิคบาล Haseeb และ Khan,
2014) ทินเลเยอร์โคร (TLC) ของแบคที่ได้ดำเนินการ
ในระบบตัวทำละลายของบิวทานอ, กรดอะซิติกและน้ำใน
สัดส่วน 4: 1: 1 (อาหมัด et al, 2014)..
มวลโมเลกุลของ SB93 bacteriocin ถูกกำหนดโดย SDSPAGE
5 % ซ้อนเจลและ 12% แยกเจล หลังจากอิเล็ก
เพียงครึ่งหนึ่งของเจลที่ถูกย้อมด้วยสี Coomassie สีฟ้าและ
คงอยู่ในน้ำที่มีส่วนผสมของเมทานอล 20% และ 10% น้ำแข็งกรดอะซิติก
(Lu et al., 2014).
อีกครึ่งหนึ่งถูกล้างสามครั้งด้วยน้ำหมันซ้อนทับ
กับโวลต์ วัฒนธรรม cholerae และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จากแล็บไอโซเลทห้องทดลองวัฒนธรรมที่ถูกปลูกใน MRS broth ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส และตัวอย่างรวบรวมทุก 24 ชั่วโมง เป็นเวลา 72 ชั่วโมง สองเท่าของปริมาณ 95%เย็นเติมเอทานอลปริมาณสูงในแต่ละเซลล์ฟรีเปอร์ ( EPS ) ตกตะกอน กู้คืนหลังจากที่ตกตะกอนคืนบ่มถูกล้างด้วยแอลกอฮอล์ แห้งและวัด ( เดอ อัลเมด้า จูเนียร์ et al . , 2015 )กิจกรรม antiadhesive ของ EPS พบ Escherichia coli แบคทีเรียบาซิลลัสเชื้อ Staphylococcus aureus ( และ คุณชี และเซ็น2009a ) การทดสอบซ้ำ 3 ครั้ง และผลที่แสดงเป็นค่าเฉลี่ยส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน±สามการทดลองที่เป็นอิสระความเข้มข้นต่าง ๆ ( 100e2000 mg / ml ) ถูกแยก EPSแยกของซีดี 1 ส่วนในล้านส่วน ( II ) และตะกั่ว ( II ) โซลูชั่นสำหรับ 3 ชั่วโมงซึ่งเป็นระดับ supernatants ภายใต้และเส้นกับปริมาณของโลหะโดยการใช้ที่เหมาะสมไม่ลุ่ยช่องว่างและมาตรฐานสำหรับการสอบเทียบ วัสดุดูดซับอะตอมพร้อมกับการไหลของสปอยเลอร์ ( เปลวไฟอากาศอะเซทิลีน ,คลื่นความยาว¼ 217 นาโนเมตร ปาดกว้าง 0.73 nm ) และตะเกียงจุดไฟกับอะเซทิลีนถูกนำมาใช้เพื่อวัตถุประสงค์นี้ ซอฟต์แวร์ที่ใช้วิเคราะห์ข้อมูล คือ aawinlab ( นักวิเคราะห์ คุณชี และเซ็น2009b ) ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ3 การอ่านอิสระ2.10 . การศึกษาคุณสมบัติของแบคเทอริโอซิน2.10.1 . ศักยภาพการประยุกต์ใช้ชีวการแพทย์ฟรีเซลล์วัฒนธรรม supernatants ( มีต่อ ) คือเก็บทุกวัน จากแล็บ ( sb71 วัฒนธรรม , และ sb73 sb93 ) เพิ่มขึ้นนาง 1e5 สำหรับวัน ค่า pH ของพวกเขาถูกตรวจสอบ supernatantsแล้วที่เป็นกลางและกรองฆ่าเชื้อ ( 0.2 มม. ) ยาต้านจุลชีพกิจกรรมที่ถูกกำหนดกับ E . coli , B . cereus , S . aureus , Vibrioอหิวาตกโรค และ Micrococcus luteus ( ดาส et al . , 2008 ) หลังจาก 5 วันวัตถุดิบแบ่งออกเป็นสองชุด ชุดหนึ่งคือผมอยากเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสและอีกที่ 20 C . ฤทธิ์ต้านจุลินทรีย์ของทั้งสองชุดคือพิจารณาหลังจาก 90days ของการบ่ม ทดสอบในทำสำเนาสามฉบับ และการยับยั้งโซนแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน±สามการทดลองที่เป็นอิสระกิจกรรม antiadhesive ของ sb93 bacteriocinwas ทดสอบโดยเดียวกันขั้นตอนใน EPS การทดสอบซ้ำสามครั้งและผลที่แสดงเป็นค่าเฉลี่ยส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน±สามผลจากการทดลองที่เป็นอิสระแยกจากกัน2.10.2 . ความไวต่อ pH และอุณหภูมิที่เอนไซม์การกระทำเซลล์วัฒนธรรม supernatants ฟรี ( มีต่อ ) คือการตรวจสอบค่า pH ของ จำนวน แล้วแบ่งออกเป็นสองชุด ชุดหนึ่งภายใต้การปรับ pH ต่างๆ ในช่วง 2e12 . ชุดอื่น ๆที่เป็นกลางและจากนั้นภายใต้การรักษาที่แตกต่างกัน เช่น ความร้อน พวกเขาต่างหากที่ 60 100 C & C121 C 10 & 20 นาทีและยังเพาะแยกต่างหากกับเพพซิน ทริปโปรเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส สารต้านจุลชีพตกค้างกิจกรรมทั้งหมดที่ใช้ในชุดทดสอบและเป็นกลางต่อการควบคุมในทุกกรณี2.10.3 . การหามวลของโมเลกุลเซลล์ฟรีนำวัฒนธรรม sb93 สงขลาบิวทานอลเพื่อสกัดแบคทีริโอซิน ( Ahmad บัล haseeb , และ , ประจวบคีรีขันธ์2014 ) Thin layer chromatography ( TLC ) คือใช้แบคทีริโอซินในระบบตัวทำละลายของบิวทานอล กรดอะซิติก และน้ำในสัดส่วนของ 4:1:1 ( Ahmad et al . , 2010 )มวลโมเลกุลของ sb93 แบคทีริโอซินถูกกำหนดโดย sdspage5% ซ้อนและ 12% แบ่งเจลเจล หลังจากอิเล็กครึ่งหนึ่งของเจลเปื้อนเหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าถาวรในน้ำที่มีเมทานอล 20% และ 10% กรดอะซิติกน้ำแข็ง( Lu et al . , 2010 )อีกซักสามครั้งด้วยน้ำหมัน , หุ้มกับวัฒนธรรม V . cholerae และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง