Ligation, transformation and select

Ligation, transformation and selection of recombinant clones were carried out according to the manufacturer’s recommended protocol (T-Vector Cloning) Brochure, Promega,Medison, WI, USA). Recombinant colonies and then digested with the restriction enzyme Eco RI . Full-length inserts were identified by comparing the size of inserts with that of the PCR-amplified fragment. The DNA sequence of both strands of the cloned PCR products was then determined using dye terminator chemistry and a DNA automatic sequencer (Applied Biosystem model 377, Foster City, CA, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไข่ การแปลง และเลือกวททชโคลนได้ดำเนินตามโพรโทคอลแนะนำของผู้ผลิต (เวกเตอร์ T โคลน) โบรชัวร์ Promega, Medison, WI สหรัฐอเมริกา) อาณานิคม recombinant และเจ่าแล้ว ด้วยข้อจำกัดของเอนไซม์ Eco RI ระบุปราศจากแทรก โดยการเปรียบเทียบขนาดของแทรกที่ส่วนขยาย PCR ลำดับดีเอ็นเอของทั้งสอง strands ของผลิตภัณฑ์ PCR โคลนได้แล้วกำหนดใช้สีย้อมเคมีเทอร์มิเนเตอร์และมีดีเอ็นเออัตโนมัติ sequencer (Biosystem ใช้รุ่น 377 ฟอสเตอร์ City, CA, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ligation การเปลี่ยนแปลงและการเลือกโคลน recombinant ได้ดำเนินการตามโปรโตคอลแนะนำของผู้ผลิต (T-เวกเตอร์โคลน) โบรชัวร์, Promega, Medison, WI, USA) อาณานิคม recombinant และย่อยด้วยข้อ จำกัด ของเอนไซม์ Eco RI แล้ว แทรกเต็มตัวถูกระบุโดยการเปรียบเทียบขนาดของแทรกกับที่ของชิ้น PCR-ขยาย ลำดับดีเอ็นเอของเส้นทั้งสองของผลิตภัณฑ์พีซีอาร์โคลนจากนั้นก็คำนวณโดยใช้สีย้อมเคมีเทอร์มิและซีเควนดีเอ็นเออัตโนมัติ (ประยุกต์ Biosystem รุ่น 377, ฟอสเตอร์ซิตี้, CA, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโคลนและ Ligation การแปลงยีน ได้ดำเนินการไปตามขั้นตอนของผู้ผลิตแนะนำ ( t-vector โคลน ) โบรชัวร์ promega เมดิสัน , วี , USA ) อาณานิคมแนนท์แล้วย่อยด้วยเอนไซม์ โค รี แทรกเต็มความยาวถูกระบุโดยการเปรียบเทียบขนาดของแทรกกับของ PCR ส่วนขยาย .ดีเอ็นเอลำดับทั้งเส้นของตัวผลิตภัณฑ์แล้ว โดยการพิจารณาเคมีย้อม DNA sequencer และ Terminator ( ใช้แบบอัตโนมัติ biosystem 377 , Foster City , CA , USA )