and a polylinker was introduced. HI

and a polylinker was introduced. HIV-1 protease-recombinant vectors were generated by amplification and cloning of the HIV-1 protease from plasma samples. Briefly, RT–PCR (SuperScript One-Step RT–PCR Kit, Invitrogen) was performed with the primers 5′prot2 (5′-TCA GAG CAG ACC AGA GCC AAC AGC CCC A-3′) and 3′prot2 (5′-AAT GCT TTT ATT TTT TCT TCT GTC AAT GGC-3′). A nested PCR (Platinumw Taq DNA Polymerase High Fidelity, Invitrogen) was subsequently run with the primers 2584L34 (5′-TGG ATA TCT TTT GGG CCA TCC ATT CCT GGC TTT A-3′) and 2173U34 (5′-AGC TGT ACA TTT GGG GAA GAG ACA ACA ACT CCC T-3′). The nucleotides corresponding to the restriction sites used for cloning are underlined in the above sequences. PCR-amplified fragments of HIV-1 protease from infected subjects were digested with the restriction enzymes BsrGI and EcoRV, and the resulting 421 bp fragment was then ligated into a BsrGI/EcoRV pre-digested pcDNA3_GFPDPR vector. After transformation of competent Escherichia
coli cells, population protease-recombinant plasmids were obtained and their protease genotypes verified by DNA sequencing.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

และได้รับการแนะนำ polylinker -1 เอชไอวีเวกเตอร์น้ำย่อย-recombinant ถูกสร้างขึ้นโดยการขยายและการโคลนของ HIV-1 protease จากตัวอย่างพลาสมา สั้น ๆ , RT-PCR (ยกขั้นตอนเดียว RT-PCR Kit, Invitrogen) ได้ดำเนินการกับไพรเมอร์ 5'prot2 (5'-TCA GAG CAG แม็ก AGA GCC AAC AGC CCC A-3) และ 3'prot2 (5 ' -AAT GCT TTT TTT ATT TCT TCT GTC AAT GGC-3 ') ซ้อนกัน PCR (Platinumw Taq DNA Polymerase ไฮไฟ, Invitrogen) ต่อมาทำงานกับไพรเมอร์ 2584L34 (5'-TGG ATA TCT TTT GGG CCA TCC ATT CCT GGC TTT A-3) และ 2173U34 (5'-AGC TGT ACA TTT GGG GAA GAG ACA ACA ACT CCC T-3) นิวคลีโอที่สอดคล้องกับข้อ จำกัด เว็บไซต์ที่ใช้สำหรับการโคลนขีดเส้นใต้ในลำดับข้างต้น เศษ PCR-ขยายของเชื้อ HIV-1 protease จากอาสาสมัครที่ติดเชื้อถูกย่อยด้วยเอนไซม์ข้อ จำกัด BsrGI และ EcoRV, และส่งผลให้ชิ้นส่วน 421 bp ถูกผูกแล้วเป็น BsrGI A / EcoRV ก่อนย่อยเวกเตอร์ pcDNA3_GFPDPR
หลังจากการเปลี่ยนแปลงของอำนาจ Escherichia เซลล์ coli ประชากรพลาสมิดน้ำย่อย-recombinant ที่ได้รับและยีนน้ำย่อยของพวกเขาตรวจสอบโดยลำดับดีเอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และ polylinker คือแนะนำ - โปรตีน recombinant เวกเตอร์ถูกสร้างขึ้นโดยการเพิ่มปริมาณของโปรตีน HIV-1 จากตัวอย่างพลาสมา สั้น RT PCR ( ลวดหนาม ) หนึ่งขั้นตอน RT PCR และชุด Invitrogen ) กำหนดด้วยไพรเมอร์ 5 นั้น prot2 ( 5 ’ - TCA มุขของบัญชีอย่างไรก็ตาม GCC AAC อาซาฮี CCC A-3 School ) และ 3 ( 5 ’ - ’ prot2 AAT GCT TTT TTT TCT ATT TCT GTC จำกัด ggc-3 School ) เป็นวิธีที่ซ้อนกัน ( platinumw แทคดีเอ็นเอพอลิเมอเรสสูงความจงรักภักดี Invitrogen ) ต่อมาได้ใช้ไพรเมอร์ 2584l34 ( 5 ’ - tgg TTT ATA TCT GGG CCA TCC ATT CCT ggc TTT A-3 School ) และ 2173u34 ( 5 ’ - AGC TGT ACA TTT GGG GAA มุข ACA WAY ทำ CCC t-3 School ) ที่สำคัญที่สอดคล้องกับข้อ จำกัด เว็บไซต์ที่ใช้สำหรับการขีดเส้นใต้ในลำดับข้างต้น ชิ้นส่วนของดีเอ็นเอของเชื้อจากผู้ติดเชื้อสามารถถูกย่อยด้วยเอนไซม์ และ ecorv bsrgi และผล 421 BP fragment ก็ผูกเป็น bsrgi / ecorv ก่อนย่อยเวกเตอร์ pcdna3_gfpdpr . หลังจากการเปลี่ยนแปลงของพนักงานเจ้าหน้าที่ Escherichiaเซลล์โปรตีนรีคอมบิแนนท์พลาสมิดประชากรได้ และเมื่อตรวจสอบลำดับโปรตีนดีเอ็นเอ