Optimized promoter–operator element

Optimized promoter–operator element consisting of phage T5 promoter (recognized
by the E. coli RNA polymerase) and two lac operator sequences which increase lac
repressor binding and ensure efficient repression of the powerful T5 promoter
• Synthetic ribosomal binding site, RBSII, for high translation rates
• 6xHis-tag coding sequence either 5' or 3' to the cloning region
• Multiple cloning site and translational stop codons in all reading frames for convenient
preparation of expression constructs
• Two strong transcriptional terminators: t0 from phage lambda (Schwarz et al. 1987),
and T1 from the rrnB operon of E. coli, to prevent read-through transcription and
ensure stability of the expression construct
• β-lactamase gene (bla) conferring resistance to ampicillin (Sutcliffe 1979) at 100 μg/ml.
The chloramphenicol acetyl transferase gene (CAT) present between t0 and T1 has no
promoter and is not normally expressed.* Depending on the bacterial strain and insert,
low CAT activities may be detectable.
• ColE1 origin of replication (Sutcliffe 1979)*
Restriction maps and sequences for the cloning regions of QIAexpress vectors are
presented in the appendix on page 117. The entire sequence information is available at

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

องค์ประกอบ promoter–operator เพิ่มประสิทธิภาพประกอบด้วยโปรโมเตอร์ phage T5 (รู้จัก
โดย E. coli อาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส) และสองลัคดำเนินลำดับที่ลัคเพิ่ม
repressor ผูกและปราบปรามที่มีประสิทธิภาพของโปรโมเตอร์ T5 มีประสิทธิภาพ
•สังเคราะห์ ribosomal รวมไซต์ RBSII ราคาสูง
•แท็ก 6xHis รหัสลำดับ 5' หรือ 3' ไปยังภูมิภาค cloning
•โคลนหลายไซต์ และหยุด translational codons อ่านทั้งหมดในเฟรมในสะดวก
เตรียมโครงสร้างนิพจน์
•สองแรง transcriptional ต่อ: t0 จาก phage แลมบ์ดา (โรลด์ et al. 1987),
และ T1 จาก operon rrnB ของ E. coli ป้องกัน read-through transcription และ
ให้ความมั่นคงของโครงสร้างนิพจน์
•Β-lactamase ยีน (bla) conferring เพื่อแอมพิซิลลิน (Sutcliffe 1979) ที่ 100 μg / มล
ไม่มี chloramphenicol acetyl transferase ยีน (CAT) อยู่ระหว่าง t0 และ T1
โปรโมเตอร์ และยังไม่ปกติต้องใช้แบคทีเรียและแทรก expressed.*
กิจกรรม CAT ต่ำอาจตรวจได้
• ColE1 จุดเริ่มต้นของการจำลองแบบ (Sutcliffe 1979) *
จำกัดแผนที่ และลำดับแคว้น QIAexpress เวกเตอร์ cloning จะ
แสดงในภาคผนวกหน้า 117 ข้อมูลลำดับทั้งหมดได้ที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

องค์ประกอบโปรโมเตอร์ผู้ประกอบการที่ดีที่สุดประกอบด้วย phage T5 ก่อการ (ได้รับการยอมรับ
โดย E. coli โพลิเมอร์) และสองลำดับประกอบครั่งซึ่งเพิ่มครั่ง
อดกลั้นผูกพันและให้แน่ใจว่าการปราบปรามที่มีประสิทธิภาพของผู้ก่อการ T5 ที่มีประสิทธิภาพ
•โซมสังเคราะห์เว็บไซต์ผูกพัน RBSII สำหรับการแปลสูง อัตรา
• 6xHis แท็กการเข้ารหัสลำดับทั้ง 5 หรือ 3 'ในพื้นที่โคลน
•เว็บไซต์โคลนและหยุดการแปลหลาย codons ในกรอบอ่านทั้งหมดเพื่อความสะดวก
ในการจัดทำโครงสร้างการแสดงออก
•สองจุดสิ้นสุดการถอดรหัสที่แข็งแกร่ง: t0 จาก phage แลมบ์ดา (Schwarz ตอัล 1987),
และ T1 จาก operon rrnB ของ E. coli เพื่อป้องกันไม่ให้การถอดความอ่านผ่านและ
ความมั่นใจในเสถียรภาพของการแสดงออกที่สร้าง
•ยีนβ-lactamase (สีน้ำเงิน) การหารือความต้านทานต่อ ampicillin (ซัทคลีฟ 1979) ที่ 100 mg / ml
chloramphenicol acetyl transferase ยีน (CAT) ในปัจจุบันระหว่าง t0 และ T1 ไม่มี
ผู้ก่อการและไม่ได้แสดงตามปกติ. * ขึ้นอยู่กับสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียและแทรก
กิจกรรม CAT ต่ำอาจจะตรวจพบ
ที่มา• ColE1 ของการจำลองแบบ (ซัทคลีฟ 1979) *
แผนที่ข้อ จำกัด และ ลำดับสำหรับพื้นที่โคลนของเวกเตอร์ QIAexpress จะถูก
นำเสนอในภาคผนวกที่หน้า 117 ลำดับข้อมูลทั้งหมดได้ที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การปรับองค์ประกอบและผู้ประกอบการ ประกอบด้วย โปรโมเตอร์ ( ยอมรับว่า T5
โดย E . coli อาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส ) และสองครั่ง ซึ่งผู้ประกอบการลำดับเพิ่มครั่ง
ผู้ควบคุม และให้การปราบปรามที่มีประสิทธิภาพของประสิทธิภาพการสังเคราะห์ไรโบโซม T5
- รวมเว็บไซต์ rbsii สำหรับอัตราการแปล 6xhis
- แท็กรหัสลำดับ 5 หรือ 3 ' โคลนนิ่งเขต
โคลนนิ่ง - หลายเว็บไซต์และภาพในเฟรมหยุดซิสอ่านเตรียมสะดวก

- การแสดงออกของโครงสร้างแข็งแรง ลองสองคนเหล็ก : t0 จากเฟจแลมบ์ดา ( ชวาร์ซ et al . 1987 , T1
) และจาก rrnb โอเปอรอนของ E . coli , เพื่อป้องกันไม่ให้อ่านถอดความให้มั่นใจเสถียรภาพของการแสดงออกและ

สร้าง- ยีนบีตา - แลคตาเมส ( BLA ) พร้อมต่อต้านยาแอมพิซิลิน ซัตคลิฟฟ์ 1979 ) 100 กรัม / มิลลิลิตรμ
chloramphenicol ทิลทรานสเฟอเรสยีน ( แมว ) และปัจจุบันระหว่าง t0 T1 ไม่มี
โปรโมเตอร์และปกติไม่แสดง * ขึ้นอยู่กับสายพันธุ์แบคทีเรียแทรก กิจกรรมอาจจะได้แมวน้อย
.
บริการ cole1 กำเนิดซ้ำ ( ซัตคลิฟ 1979 ) *
แผนที่จำกัดและลำดับในการโคลนภูมิภาคของเวกเตอร์ qiaexpress เป็น
นำเสนอในภาคผนวก หน้า 117 ข้อมูลทั้งหมดอยู่ในลำดับ