PCR reactions contain 10 μl two-fol

PCR reactions contain 10 μl two-fold concentrated TaqMan® Gene Expression Master Mix (Applied Biosystems, USA), reverse and forward primers (final concentration 1 μM each) (Sigma-Aldrich, USA), a hydrolysis probe (final concentration 200 nM) (MWG Eurofins Operon, Germany), 5 μl of DNA sample and nuclease-free water to complete the 20 μl total volume of reaction mixture. Plates were centrifuged (one min at 1000 ×g) and PCR reactions were run and monitored using Applied Biosystems 7500 FAST Real-Time PCR System and 7500 Software v2.0.5. Sterile DNA-free water was extracted with samples and used as negative controls in each series of amplification. Thermal cycles consisted of 2 min at 50 °C, 10 min at 95 °C, followed by 45 cycles of 15 s at 95 °C and 1 min at 60 °C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วย 10 μl พับสองเข้มข้น TaqMan ®ยีนหลักนิพจน์ (Biosystems ใช้ สหรัฐอเมริกา), ย้อนกลับ และส่งไพรเมอร์ (ความเข้มข้นสุดท้าย 1 μM ละ) (Aldrich ซิก สหรัฐอเมริกา), ไฮโตรไลซ์เป็นโพรบ (ความเข้มข้นสุดท้าย 200 nM) (MWG Eurofins Operon เยอรมนี), μl 5 ตัวอย่างดีเอ็นเอและ nuclease ฟรีน้ำ 20 μl ปริมาตรรวมของปฏิกิริยาผสมเสร็จสมบูรณ์ แผ่นถูก centrifuged (หนึ่งนาทีที่ 1000 × g) และปฏิกิริยา PCR ถูกเรียกใช้ และตรวจสอบการใช้ใช้ 7500 Biosystems รวดเร็ว Real-Time PCR ระบบและซอฟต์แวร์ v2.0.5 7500 ใส่ดีเอ็นเอฟรีน้ำถูกสกัด ด้วยตัวอย่าง และใช้เป็นควบคุมลบในแต่ละชุดของขยาย วงจรความร้อนประกอบด้วย 2 นาทีที่ 50 ° C, 10 นาทีที่ 95 ° C ตามวงจร 45 15 s 95 ° C และ 1 นาทีที่ 60 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปฏิกิริยา PCR มี 10 ไมโครลิตร TaqMan สองเท่าความเข้มข้น®การแสดงออกของยีนโทผสม (Applied Biosystems, สหรัฐอเมริกา) ย้อนกลับและไพรเมอร์มา (ความเข้มข้นสุดท้าย 1 ไมโครโมลาร์แต่ละคน) (Sigma-Aldrich, สหรัฐอเมริกา), ไฮโดรไลซิสอบสวน (ความเข้มข้นสุดท้าย 200 นาโนเมตร) (MWG Eurofins operon, เยอรมนี), 5 ไมโครลิตรของตัวอย่างดีเอ็นเอและน้ำ nuclease ฟรีเพื่อให้ 20 ไมโครลิตรปริมาณรวมของการผสมปฏิกิริยา จานถูกหมุนเหวี่ยง (หนึ่งนาทีที่ 1000 × g) และปฏิกิริยา PCR ถูกใช้และตรวจสอบการใช้ Applied Biosystems 7500 FAST Real-Time PCR ระบบและซอฟท์แว 7500 v2.0.5 น้ำดีเอ็นเอฟรีหมันถูกสกัดด้วยตัวอย่างและนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบในชุดของการขยายแต่ละ วงจรความร้อนแบ่งเป็น 2 นาทีที่ 50 ° C, 10 นาทีที่ 95 ° C ตามด้วย 45 รอบจาก 15 s ที่ 95 ° C และ 1 นาทีที่ 60 ° C

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วย 10 μ L ก taqman เข้มข้น®ยีน Master Mix ( Applied Biosystems , USA ) , ย้อนกลับและไปข้างหน้า ไพรเมอร์ ( สุดท้ายμความเข้มข้น 1 M ละ ) ( ซิกม่า Aldrich สหรัฐอเมริกา ) , การตรวจสอบ ( สุดท้ายความเข้มข้น 200 nm ) ( mwg eurofins โอเปอรอน , เยอรมัน ) , 5 μ l ตัวอย่างดีเอ็นเอ นิวเคลียสน้ำฟรีให้เสร็จ 20 μ L ปริมาณส่วนผสมของปฏิกิริยาจานอยู่ระดับหนึ่ง ( นาทีที่× 1000 กรัม ) และปฏิกิริยา PCR ถูกเรียกใช้และการติดตามโดยใช้ Applied Biosystems 7500 อย่างรวดเร็วเวลา PCR จริงระบบและ 7500 v2.0.5 ซอฟต์แวร์ ดีเอ็นเอฟรีน้ำปราศจากสารตัวอย่าง และใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบในแต่ละชุดของการสื่อสาร . วงจรความร้อนแบ่งเป็น 2 นาทีที่ 50 ° C 10 นาทีที่ 95 องศา Cตามด้วย 45 รอบ 15 s 95 องศา C และ 1 นาทีที่ 60 ° C .