2.2.1. Primer design and gfp fragme

2.2.1. Primer design and gfp fragments amplified

Primers were designed according to the gfp gene search from
NCBI and the multiple cloning site of PBC-hygro using Software Primer 5.0. Restriction enzyme sites were added to primer
GFPup1 and Down1. The gfp gene was amplified from pEG-FP by PCR using the primer GFPup1: GGGAAGCTTAG
TGCTGAAACCTCCGTAT (contain HindIII enzyme site)
and GFPdown1: GGCGAATTCCACCTTGATGCCG (con-taining ECOlI enzyme site).
PCR was performed in 50ll volume of 10·buffer 2ll,
dNTP 0.6ll (10 mM), Taq 0.5ll(5U/ll), primers 1.5ll
(10lmol), DNA 0.5ll, and ddH2O 45.4ll. The cycling
parameters were as follows: DNA denaturation at 94C
3 min; at 94C for 30 s, at 52C for 60 s, at 72C for 60 s,
run for 35 cycles; and the final extension step was performed
at 72C for 10 min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2.1 การขยายบางส่วนของการออกแบบและ gfp รองพื้นไพรเมอร์ออกแบบตามการค้นหายีน gfp จากNCBI และหลายไซต์ cloning ของ PBC hygro 5.0 ซอฟต์แวร์รองพื้น ไซต์เอนไซม์จำกัดได้เพิ่มการรองพื้นGFPup1 และ Down1 ยีน gfp ถูกขยายจากตรึง FP โดย PCR โดยใช้รองพื้น GFPup1: GGGAAGCTTAGTGCTGAAACCTCCGTAT (ประกอบด้วยไซต์เอนไซม์ HindIII)และ GFPdown1: GGCGAATTCCACCTTGATGCCG (เว็บไซต์เอนไซม์คอน taining ECOlI)ทำ PCR ในปริมาตร 10·buffer 2ll, 50lldNTP 0.6ll (10 mM), Taq 0.5ll(5U/ll) ไพรเมอร์ 1.5ll(10lmol), ดีเอ็นเอ 0.5ll และ ddH2O 45.4ll การขี่จักรยานพารามิเตอร์ได้ดังนี้: denaturation ดีเอ็นเอที่ 94 C3 นาที ที่ C 94 สำหรับ 30 s ที่ 52 C 60 s ที่ 72 C 60 sรันสำหรับรอบ 35 และขั้นตอนสุดท้ายต่อการทำที่ C 72 สำหรับ 10 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2.1 การออกแบบประถมศึกษาและเศษ GFP ขยายไพรได้รับการออกแบบให้เป็นไปตามการค้นหายีน GFP จากพับและเว็บไซต์โคลนหลาย PBC ความชื้นโดยใช้ซอฟท์แวประถมศึกษา 5.0 เว็บไซต์เอนไซม์ จำกัด ถูกเพิ่มเข้าไปในไพรGFPup1 และ Down1 ยีน GFP ถูกขยายจาก PEG-FP โดยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ GFPup1: GGGAAGCTTAG TGCTGAAACCTCCGTAT (มีเว็บไซต์เอนไซม์ HindIII) และ GFPdown1. GGCGAATTCCACCTTGATGCCG (Con-ในประเด็นเว็บไซต์เอนไซม์ eColi) PCR ได้รับการดำเนินการในปริมาณ 50ll 10 · 2LL บัฟเฟอร์dNTP 0.6ll (10 มิลลิเมตร) Taq 0.5ll (5U / LL), ไพร 1.5ll (10lmol) 0.5ll ดีเอ็นเอและ ddH2O 45.4ll การขี่จักรยานพารามิเตอร์มีดังนี้ denaturation ดีเอ็นเอที่ 94 C? 3 นาที; ? ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีที่ 52 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 วินาที, ที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 วินาที, วิ่งหนีรอบ 35; และขั้นตอนสุดท้ายคือการขยายการดำเนินการที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2.1 . แนวทางการออกแบบและชิ้นส่วนของ GFP

โดยออกแบบตามการค้นหายีน GFP จาก
ncbi และหลายการโคลนเว็บไซต์ PBC hygro ใช้ซอฟต์แวร์เช่น 5.0 . เว็บไซต์มีการเพิ่มเอนไซม์จำกัด gfpup1 และรองพื้น
down1 . การขยายยีน GFP จากตรึงด้วยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ gfpup1 FP : gggaagcttag
tgctgaaacctccgtat ( ประกอบด้วยเอนไซม์และเว็บไซต์ - )
gfpdown1 :ggcgaattccaccttgatgccg ( con TAINING ecoli เอนไซม์เว็บไซต์ ) .
PCR ในการปฏิบัติ 50ll ปริมาณ 10 2ll บัฟเฟอร์ด้วย
dntp , 0.6ll ( 10 มม. ) , แทค 0.5ll ( 5U / ll ) , ไพรเมอร์ 1.5ll
( 10lmol ) 0.5ll ดีเอ็นเอ และ ddh2o 45.4ll . จักรยาน
พารามิเตอร์ดังนี้ ดีเอ็นเอ ( ที่ 94  C
3 นาที ; ที่ 94  เป็นเวลา 30 วินาทีที่ 52  C 60 , 72  C 60 S ,
วิ่ง 3 รอบ และขั้นตอนสุดท้ายคือการส่งเสริม
72  C นาน 10 นาที