The most commonly used tag for coll

The most commonly used tag for collecting large amounts of highly purified protein is a poly-histidine tag (His-tag). It comprises 6 – 14 histidines and is typically fused to the N- or C-terminal end of a target protein. In some cases, the tag can also be inserted into an exposed loop of the target protein. The imidazole side chains of a His-tag can engage inreversible coordinative bonds to certain transition metal ions, such as Ni2+, Co2+, or Zn2+, respectively.

Ni2+ shows the highest affinity and selectivity for His-tags and is therefore preferred. Using certain chelators covalently linked to a matrix, Ni2+ can be immobilized in a way that still allows the Ni2+ ion to interact with h istidine side chains. When His-tagged proteins are applied to this Ni2+ matrix, they specifically bind to the resin, while most untagged proteins do not. Bound proteins can be released from the matrix using mild conditions. Imidazole competes for coordination sites on Ni2+ displacing His-tagged proteins from the matrix. Alternatively, lowering pH will protonate His-tags and hence also elute the His-tagged proteins.

His-tagged protein should form a considerably stronger bond to the Ni-chelate matrix than any endogenous histidine-containing protein of the expression host. Relative binding strength depends on how many histidines bind simultaneously to the matrix (avidity effect).

Longer His-tags produce stronger binding and better separation of the target from potentially contaminating host proteins. The classic His-tag has six consecutive histidines. Tags with 10 to 14 histidines purify better. Compared to commonly used affinity tags, such as Glutathione S-Transferase (GST) or maltosebinding protein (MBP), even the longest His-tags are small. Most importantly, His-tagged proteins can be purified on nickel chelate matrices under native as well as denaturing conditions.

Due to their hydrophilic and flexible nature, His-tags can often increase the solubility of target proteins and only rarely interfere with protein’s function. This unique combination of features allows using His-tags as a versatile tool for a wide range of protein purification purposes.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แท็กที่ใช้บ่อยสำหรับรวบรวมจำนวนมากของโปรตีนบริสุทธิ์สูงคือ แท็ก histidine โพลี (พระแท็ก) มันประกอบด้วย histidines 6 – 14 และมักจะมีการหลอมรวมกับโปรตีนเป้าหมายปลายขั้ว C หรือ N ในบางกรณี แท็กสามารถยังถูกแทรกลงในวงสัมผัสของโปรตีนเป้าหมาย อิมิดาโซลโซ่ข้างของแท็กสามารถมีส่วนร่วม inreversible coordinative พันธบัตรกับไอออนโลหะการเปลี่ยนแปลงบางอย่าง เช่น Ni2 + Co2 + Zn2 + ตามลำดับNi2 + แสดงใวสำหรับแท็กของพระองค์และความสัมพันธ์สูงสุด นั้นจึงต้อง ใช้ chelators บางด้วยการเชื่อมโยงกับเมทริกซ์ Ni2 + สามารถถูกตรึงในยังคง ช่วยให้ไอออน Ni2 + เพื่อโต้ตอบกับโซ่ข้าง h istidine เมื่อมีใช้แท็กของโปรตีนเมทริกซ์ Ni2 + นี้ พวกเขาโดยเฉพาะผูกกับเรซิน ขณะสุด untagged โปรตีนไม่ โปรตีนที่ถูกผูกไว้จะถูกปล่อยจากเมทริกซ์โดยใช้เงื่อนไขที่ไม่รุนแรง อิมิดาโซลแข่งขันสำหรับเว็บไซต์ประสานงานบน Ni2 + แทนโปรตีนแท็กของเขาจากเมทริกซ์ อีกวิธีหนึ่งคือ ลด pH จะพระ protonate แท็ก และจึง ยัง elute โปรตีนของแท็กโปรตีนที่แท็กของพระองค์ควรก่อสร้างแข็งพันธะกับเมทริกซ์ Ni chelate กว่าโปรตีนที่ประกอบด้วย histidine ใด ๆ ภายนอกของโฮสต์นิพจน์ ผูกสัมพันธ์แรงขึ้นอยู่กับจำนวน histidines ผูกพร้อมกันกับเมทริกซ์ (avidity ผล)ยาวแท็กพระผลิตแน่นมากและดีกว่าการแยกเป้าหมายอาจปนเปื้อนโปรตีนโฮสต์ คลาสสิกของเขาแท็กมีหกติดต่อกัน histidines แท็กที่ มี 10-14 histidines บริสุทธิ์ดีกว่า เมื่อเทียบกับความสัมพันธ์ที่ใช้กันทั่วไปแท็ก เช่นกลูตาไธโอน S-Transferase (GST) หรือโปรตีน maltosebinding (MBP), แม้ที่ยาวที่สุดของพระองค์แท็กมีขนาดเล็ก ที่สำคัญที่สุดคือ แท็กของโปรตีนสามารถบริสุทธิ์บนสภาวะพื้นเมือง ตลอดจน denaturing เมทริกซ์แอซิดนิกเกิลเนื่องจากธรรมชาติของน้ำ และมีความยืดหยุ่น แท็กของพระองค์สามารถมักจะเพิ่มการละลายของโปรตีนเป้าหมาย และเท่านั้นไม่ค่อยยุ่งเกี่ยวกับฟังก์ชันของโปรตีน ผสมของคุณลักษณะอนุญาตให้ใช้แท็กของพระองค์เป็นเครื่องมืออเนกประสงค์ที่หลากหลายของวัตถุประสงค์ทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แท็กที่ใช้บ่อยที่สุดสำหรับการเก็บรวบรวมจำนวนมากของโปรตีนบริสุทธิ์สูงเป็นแท็กโพลีฮิสติดีน (His-แท็ก) มันประกอบด้วย 6-14 histidines และมักจะผสมไปที่ปลาย N- หรือ C ขั้วของโปรตีนเป้าหมาย ในบางกรณีแท็กยังสามารถแทรกเข้าไปในห่วงสัมผัสของโปรตีนเป้าหมาย โซ่ด้าน imidazole ของเขาแท็กสามารถมีส่วนร่วมพันธบัตร coordinative inreversible ไอออนโลหะการเปลี่ยนแปลงบางอย่างเช่นนิเกิล 2 + Co2 + หรือ Zn2 + ตามลำดับ.

Ni2 + แสดงให้เห็นถึงความสัมพันธ์ที่สูงที่สุดและการเลือกสำหรับเขาแท็กและเป็นที่ต้องการดังนั้น ใช้ chelators บางอย่างที่เชื่อมโยง covalently เมทริกซ์, นิเกิล 2 + สามารถตรึงในทางที่ยังคงช่วยให้ Ni2 + ไอออนในการโต้ตอบกับ H istidine โซ่ด้านข้าง เมื่อเขาติดแท็กโปรตีนจะนำไปใช้นี้ Ni2 + เมทริกซ์พวกเขาโดยเฉพาะผูกกับเรซินขณะที่ส่วนใหญ่ไม่ติดแท็กโปรตีนไม่ โปรตีนที่ถูกผูกไว้จะถูกปล่อยออกจากเมทริกซ์โดยใช้ภาวะที่ไม่รุนแรง imidazole แข่งขันสำหรับเว็บไซต์การประสานงานใน Ni2 + แทนที่โปรตีนของเขาที่ติดแท็กจากเมทริกซ์ อีกวิธีหนึ่งคือการลดค่า pH จะ protonate เขาแท็กและด้วยเหตุนี้ยังชะโปรตีนของเขาที่ติดแท็ก.

ของเขาที่ติดแท็กโปรตีนควรสร้างพันธะมากที่แข็งแกร่งเพื่อเมทริกซ์ Ni-คีเลตกว่าโปรตีนจากฮิสติดีนที่มีส่วนผสมใด ๆ ภายนอกของโฮสต์แสดงออก ความแรงที่มีผลผูกพันญาติขึ้นอยู่กับจำนวน histidines ผูกพร้อมกันเพื่อเมทริกซ์ (ผลความโลภ) ได้.

อีกต่อไปแท็กของเขาผลิตแยกที่มีผลผูกพันและดีกว่าที่แข็งแกร่งของเป้าหมายจากการปนเปื้อนที่อาจเกิดขึ้นโปรตีนโฮสต์ คลาสสิกของเขาแท็กมีหก histidines ติดต่อกัน Tags กับ 10-14 histidines บริสุทธิ์ดีกว่า เมื่อเทียบกับแท็กที่ใช้กันทั่วไปเป็นพี่น้องกันเช่นกลูตาไธโอน S-Transferase (GST) หรือโปรตีน maltosebinding (MBP) แม้ที่ยาวที่สุดของเขาแท็กที่มีขนาดเล็ก สิ่งสำคัญที่สุดของเขาที่ติดแท็กโปรตีนบริสุทธิ์สามารถในการฝึกอบรมนิกเกิลคีเลตภายใต้พื้นเมืองเช่นเดียวกับเงื่อนไข denaturing.

เนื่องจากลักษณะ hydrophilic และมีความยืดหยุ่นของพวกเขาแท็กของเขามักจะสามารถเพิ่มความสามารถในการละลายของโปรตีนเป้าหมายและแทบจะไม่เคยยุ่งเกี่ยวกับการทำงานของโปรตีน นี้รวมกันเป็นเอกลักษณ์ของคุณสมบัติที่ช่วยให้เขาใช้แท็กเป็นเครื่องมืออเนกประสงค์สำหรับหลากหลายของวัตถุประสงค์โปรตีนให้บริสุทธิ์