SDS-polyacrylamide gel electrophore

SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
Electrophoretic patterns of different species of collagens were analysed according to the method [19]. The samples
were dissolved in 50 g/L SDS solution. The mixtures were then heated at 850C for 1 h, followed by centrifugation at
8500g for 5 min to remove undissolved debris. Solubilized samples were mixed with the sample buffer (0.5 mol/L
Tris–HCl, pH 6.8 containing 40 g/L SDS, 200 mL/L glycerol in the presence or absence of 100 mL/L
βmercaptoethanol) with the ratio of 1:1 (volume ratio). The mixtures were loaded onto a polyacrylamide gel made of
75 g/L separating gel and 40 g/L stacking gel and subjected to electrophoresis at a constant current of 20 mA/gel.
After electrophoresis, gels were fixed with a mixture of 500 mL/L methanol and 100 mL/L acetic acid for 30 min,
followed by staining with 0.5 mL/L Coomassie blue R-250 in 150 mL/L methanol and 50 mL/L acetic acid for 1 h.
Finally, they were destained with a mixture of 300 mL/L methanol and 100 mL/L acetic acid for 1 h and destained
again with the same solution for 30 min. High molecular weight protein markers were used to estimate the molecular
weight of proteins. Type I collagen from calf skin was used as standard collagens.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

SDS-polyacrylamide เจ electrophoresis (SDS-หน้า)
รูปแบบด้วยชนิดต่าง ๆ ของ collagens ได้ analysed ตามวิธี [19] ตัวอย่าง
ถูกละลายใน 50 g/L SDS โซลูชัน น้ำยาผสมแล้วอุ่นได้ที่ 850C สำหรับ h 1 ตาม ด้วย centrifugation ที่
8500g สำหรับ 5 นาทีเอาเศษ undissolved ตัวอย่าง solubilized ถูกผสมกับบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (0.5 โมล/L
Tris–HCl, pH 6.8 ประกอบด้วย 40 g/L SDS กลีเซอร 200 mL/L ในสถานะการขาดงานของ 100 mL/L
βmercaptoethanol) ด้วยอัตราส่วน 1:1 (อัตราส่วนปริมาตร) น้ำยาผสมจะถูกโหลดลงเจ polyacrylamide ทำ
75 g/L แยกเจและ 40 g/L ซ้อนเจ และอยู่ภายใต้การ electrophoresis ในปัจจุบันคงที่ 20 mA / เจ.
หลัง electrophoresis เจก็คง มีส่วนผสมของเมทานอล 500 mL/L และกรดอะซิติก 100 mL/L ใน 30 นาที,
ตาม ด้วยย้อมสีด้วย 0.5 mL/L สี Coomassie R-250 ใน 150 mL/L เมทานอลและ 50 mL/L กรดอะซิติกสำหรับ 1 h.
ในที่สุด พวกเขาถูก destained สง 300 mL/L เมทานอลและ 100 mL/L กรดอะซิติกสำหรับ 1 h และ destained
อีก ด้วยโซลูชั่นเดียวใน 30 นาที ใช้การประเมินในระดับโมเลกุลน้ำหนักโมเลกุลสูงโปรตีนเครื่องหมาย
น้ำหนักของโปรตีน พิมพ์คอลลาเจนจากลูกผมใช้ผิวเป็น collagens มาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เจลอิเล็ก SDS-polyacrylamide (SDS-PAGE)
รูปแบบอิเล็กของสายพันธุ์ที่แตกต่างกันของคอลลาเจนถูกนำมาวิเคราะห์ตามวิธีการ [19] กลุ่มตัวอย่างที่
ถูกกลืนหายไปใน 50 g / L SDS การแก้ปัญหา ผสมถูกความร้อนแล้วที่ 850C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่
8500g เป็นเวลา 5 นาทีเพื่อขจัดเศษที่ไม่ละลาย ตัวอย่างถูกละลายผสมกับบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (0.5 mol / L
Tris-HCl, pH 6.8 ที่มี 40 กรัม / ลิตร SDS 200 mL / L กลีเซอรอลในการมีหรือไม่มีของ 100 มล / ลิตร
βmercaptoethanol) โดยมีอัตรา 1: 1 (อัตราส่วนปริมาตร) ผสมถูกโหลดไปยังเจล polyacrylamide ที่ทำจาก
75 กรัม / ลิตรแยกเจลและ 40 กรัม / ลิตรเจลซ้อนและยัดเยียดให้ electrophoresis ที่คงที่ในปัจจุบันจาก 20 mA / เจล
อิเล็กหลังจากที่เจลได้รับการแก้ไขที่มีส่วนผสมของ 500 มิลลิลิตร / L เมทานอลและ 100 มล / ลิตรกรดอะซิติกเป็นเวลา 30 นาที
ตามด้วยการย้อม 0.5 mL / L Coomassie สีฟ้า R-250 ใน 150 มล / ลิตรเมทานอลและ 50 mL / L กรดอะซิติกเป็นเวลา 1 ชั่วโมง
ในที่สุดพวกเขาก็ถูก destained กับ ส่วนผสมของ 300 mL / L เมทานอลและ 100 มล / ลิตรกรดอะซิติกเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ destained
อีกครั้งกับการแก้ปัญหาเดียวกันสำหรับ 30 นาที สูงโมเลกุลเครื่องหมายน้ำหนักโปรตีนถูกนำมาใช้ในการประมาณโมเลกุล
น้ำหนักของโปรตีน ประเภทคอลลาเจนจากหนังลูกวัวถูกใช้เป็นคอลลาเจนมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

SDS polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS-PAGE )
ลวดลายรูปแบบของชนิดที่แตกต่างของคอลลาเจน วิเคราะห์ข้อมูลตามวิธีการ [ 19 ] ตัวอย่าง
ละลาย 50 กรัม / ลิตร SDS โซลูชั่น ส่วนผสมและอุณหภูมิ 850C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ตามด้วยการปั่นเหวี่ยงที่
8500g เป็นเวลา 5 นาที เอา undissolved เศษเล็กเศษน้อย ซึ่งตัวอย่างที่ผสมกับตัวอย่างบัฟเฟอร์ ( 0.5 mol / l
บริษัทพีเอช 6.8 – HCl , บรรจุ 40 กรัม / ลิตร SDS , 200 ml / l กลีเซอรอลในการแสดงตนหรือขาด 100 ml / l
บีตา mercaptoethanol ) ด้วยอัตราส่วน 1 : 1 ( อัตราส่วน ) ส่วนผสมถูกโหลดไปยัง polyacrylamide gel า
75 g / l เจล 40 กรัม / ลิตรและแยกซ้อนเจลและภายใต้วิธีที่ปัจจุบันคงที่ 20 MA /
หลังจาก electrophoresis , เจลเจลถูกกำหนดด้วยส่วนผสมของ 500 มล. / ลิตร 100 มล. / ล. และเมทานอลกรดอะซิติกสำหรับ 30 นาที
ตามด้วยการศึกษา 0.5 ml / l เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า r-250 ใน 150 มิลลิลิตร / ลิตรต่อลิตร 50 ml และกรด 1 h .
ในที่สุด พวกเขา destained ที่มีส่วนผสมของ 300 มล. ชั้นเมทานอลและ 100 ml / l กรด 1 H และ destained
อีกครั้งด้วยวิธีเดียวกันเป็นเวลา 30 นาทีเครื่องหมายโปรตีนน้ำหนักโมเลกุลสูงถูกใช้เพื่อประมาณน้ำหนักโมเลกุล
ของโปรตีน ชนิด คอลลาเจนจากหนังลูกวัวเป็นคอลลาเจนที่ใช้มาตรฐาน