DNA from rapeseed samples (n 12) we

DNA from rapeseed samples (n 12) were extracted using the Wizard DNA extraction method. One millilitre extraction buffer (1 M Tris-HCI, 1.5 M NaCl, 0,5 M EDTA, 10 SDS, pH 8.0) was added to 100 mg of the rapeseed sample and incubated at 60 oC for 30 min. Subsequently, a centrifugation step at 14,000x g for 15 min was performed and 500 HL of the supernatant were transferred to a new tube. 20 HL proteinase K (20 mg mL 1) and 50 HL guanidine-HCl solution (5-M guanidine hydrochloride) were added. The mixture was vortexed and incubated for 3 h at 60 oC while shaking. After centrifugation at 14,000x g for 10 min., 250 HL of the clear supernatant were transferred to a new tube and 6.25 L RNase A (4 g HL 1) were added, followed by an incubation step at 60 oC for 5 min., and 1 mL Wizard resin (Promega, Mannheim, Germany) was added. The mixture was pipetted into the mini columns (Promega, Mannheim, Germany) and vacuum was applied. Afterwards, the column was washed two times using 1 mL 2-propanol (80 followed by a centrifugation step at 10,000 xg for 2 min. in order to remove residual 2-propanol. After drying the column for 5 min. at room temperature, the DNA was eluted using 100 HL prewarmed (70 oC) elution buffer (10 mM Tris-HCl, pH 9.0). Finally, the column was incubated for 1 min. at room temperature and centrifuged for 1 min. at 10,000 xg The eluted DNA was stored at 20 oC until used.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอจากตัวอย่างเมล็ดต้นเรพ (n 12) ถูกสกัดโดยใช้วิธีการสกัดดีเอ็นเอของตัวช่วยสร้าง Millilitre หนึ่งแยกบัฟเฟอร์ (1 ทริสเรทติ้ง hci M, 1.5 M NaCl, 0,5 M EDTA, 10 SDS, pH 8.0) เพิ่ม 100 มก.อย่างเรพซีด และ incubated ที่ 60 องศาเซลเซียสใน 30 นาที ต่อมา มีดำเนินการขั้นตอน centrifugation ที่ 14000 x g สำหรับ 15 นาที และ HL 500 ของ supernatant จะถูกโอนย้ายไปเป็นหลอดใหม่ 20 HL proteinase K (20 มิลลิกรัมมล. 1) และมีเพิ่มโซลูชัน guanidine HCl 50 HL (guanidine 5 M ไฮโดรคลอไรด์) ส่วนผสม vortexed และ incubated สำหรับ h 3 ที่ 60 องศาเซลเซียสในขณะที่สั่น หลังจากที่มีการถ่ายโอน centrifugation ที่ 14000 x g สำหรับ 10 นาที HL 250 ของ supernatant ล้างหลอดใหม่และ RNase L 6.25 เพิ่มเป็น (4 g HL 1) ตามขั้นตอนการบ่มที่ 60 องศาเซลเซียสสำหรับ 5 นาที และเพิ่ม 1 mL ช่วยเรซิน (Promega มา เยอรมนี) ส่วนผสมคือ pipetted เป็นคอลัมน์ขนาดเล็ก (Promega มันน์ไฮม์ ประเทศเยอรมนี) และใช้เครื่องดูดฝุ่น ภายหลัง การที่คอลัมน์ถูกล้างครั้งที่สองโดยใช้ 1 mL 2-อย่างไร propanol (80 ตามขั้นตอน centrifugation ที่ xg 10000 สำหรับ 2 นาทีเพื่อเอา 2 อย่างไร propanol ที่เหลือ หลังจากแห้งคอลัมน์สำหรับ 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ดีเอ็นเอถูก eluted ใช้ 100 HL prewarmed (70 องศาเซลเซียส) elution บัฟเฟอร์ (ทริสเรทติ้ง HCl 10 มม. pH 9.0) สุดท้าย คอลัมน์ incubated ใน 1 นาทีที่อุณหภูมิห้อง และ centrifuged สำหรับนาที 1 ใน 10000 xg eluted DNA ถูกเก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียสจนกว่าจะใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอจากตัวอย่างเรพซีด (n 12) ถูกสกัดโดยใช้ตัวช่วยสร้างวิธีการสกัดดีเอ็นเอ หนึ่งมิลลิลิตรบัฟเฟอร์สกัด (1 M Tris-HCI 1.5 M NaCl, 0.5 M EDTA, 10 SDS ค่า pH 8.0) ถูกบันทึกอยู่ใน 100 มิลลิกรัมของกลุ่มตัวอย่างเรพซีดและบ่มที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ต่อจากนั้นเป็นขั้นตอนการหมุนเหวี่ยงที่ 14,000xg นาน 15 นาทีได้ดำเนินการและ 500 HL ของสารละลายถูกโอนไปยังหลอดใหม่ 20 HL โปร K (20 mg มิลลิลิตร 1) และ 50 HL แก้ปัญหา guanidine-HCl (5-M ไฮโดรคลอไร guanidine) ถูกเพิ่ม ส่วนผสมที่ถูกการ vortex และบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่ 60 องศาเซลเซียสขณะที่สั่น หลังจากที่ปั่น 14,000xg เป็นเวลา 10 นาที. 250 HL ของสารละลายที่ชัดเจนถูกโอนไปยังหลอดใหม่และ 6.25 L RNase (4 กรัม HL 1) มีการเพิ่มตามด้วยขั้นตอนการบ่มที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที. และ 1 มิลลิลิตรตัวช่วยสร้างเรซิน (Promega, ไฮม์, เยอรมนี) ถูกเพิ่มเข้ามา ส่วนผสมที่ถูกปิเปตลงในคอลัมน์เล็ก (Promega, ไฮม์, เยอรมนี) และสูญญากาศถูกนำมาใช้ หลังจากนั้นคอลัมน์ถูกล้างครั้งที่สองโดยใช้ 1 มิลลิลิตร 2 โพรพาน (80 ตามด้วยขั้นตอนการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 XG 2 นาที. เพื่อที่จะลบเหลือ 2 โพรพานอ. หลังจากการอบแห้งคอลัมน์ 5 นาที. ที่อุณหภูมิห้อง ดีเอ็นเอชะใช้ 100 HL prewarmed (70 องศาเซลเซียส) บัฟเฟอร์ชะ (10 มิลลิ Tris-HCl ค่า pH 9.0). สุดท้ายคอลัมน์ถูกบ่มเป็นเวลา 1 นาที. ที่อุณหภูมิห้องและปั่นเป็นเวลา 1 นาที. 10,000 XG ดีเอ็นเอชะเป็น เก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียสจนใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอจากตัวอย่างเรปซีด ( 12 ) ถูกสกัดโดยใช้ตัวช่วยสร้างการสกัดดีเอ็นเอวิธี หนึ่งมิลลิลิตรการสกัดบัฟเฟอร์ ( 1 เมตร ทั้งนี้ โดย 1.5 M โซเดียมคลอไรด์ 0 , 5 , 10 M EDTA , SDS , pH 8.0 ) คือเพิ่ม 100 mg ของเมล็ดต้นตัวอย่างและอุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ต่อมา เป็นขั้นตอนที่ 3 14000x G 15 นาทีได้ 500 HL และน่านมีการโอนเป็น หลอดใหม่20 , K ( 20 มิลลิลิตร ต่อ 1 มิลลิกรัมโปรตีน ) และ 50 HL กัวนิดีนกรดไฮโดรคลอริก ( 5-m กัวนิดีน ไฮโดรคลอไรด์ ) มีการเพิ่ม ส่วนผสม vortexed บ่มเป็นเวลา 3 ชม. ที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียสในขณะที่สั่น หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 14000x กรัมต่อ 10 นาที ของนำใส 250 HL มีการโอนท่อเลสใหม่และ 6.25 ลิตร ( 4 กรัม , 1 ) เพิ่มขึ้น ตามขั้นตอนที่ 1 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและเรซินพ่อมด 1 ml ( promega Mannheim , เยอรมนี ) คือเพิ่ม ส่วนผสม pipetted ลงมินิ คอลัมน์ ( promega Mannheim , เยอรมัน ) และ สูญญากาศ คือใช้ หลังจากนั้น คอลัมน์ล้าง 2 ครั้ง โดยใช้โพรพานอล 1 ml ( 80 ตามด้วย 3 ขั้นตอนที่ 10 , 000 XG 2 นาทีเพื่อลบโพรพานอลที่เหลือ หลังการอบแห้งคอลัมน์สำหรับ 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องโดยใช้ดีเอ็นเอตัวอย่าง 100 , prewarmed ( 70 องศาเซลเซียส ) ใช้บัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ กรดไฮโดรคลอริก pH 9.0 ) สุดท้าย คอลัมน์ที่ถูกบ่มเป็นเวลา 1 นาที ที่อุณหภูมิห้อง และที่ระดับ 1 นาทีที่ 10 , 000 ตัวอย่างดีเอ็นเอที่สามารถเก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียส จนใช้