1 M arginine,10 mM phosphate, pH 7.

1 M arginine,10 mM phosphate, pH 7.0. E1 showed elution of many
contaminants. A majority of the murine mAb was eluted in E2 and
E3 with some co-eluting contaminants. E4 and E5 and final 1 M
arginine wash showed only contaminants.
A similar experiment was carried out with a different elution
conditions. HEK CM (25 ml) was similarly loaded onto the 1 ml
Capto MMC column in PBS. After extensive wash with PBS, the
bound proteins were eluted with a gradient from PBS to 1 M NaCl,
20 mM phosphate, pH 7.0. Fig. 2 shows SDS-PAGE profile of the
eluted fractions. E1 and E2 showed elution of contaminants. A
majority of the murine mAb was eluted in E3, E4 and E5, which
appeared to be purer than the arginine eluted fractions. Final 1 M
arginine wash showed both mAb and contaminants. It is not clear
whether the mAb band in 1 M arginine wash is native antibody or
non-native antibody.
Next, step elution with NaCl was attempted in 20 mM phos-
phate, pH 7.0: from nowon, 20 mM phosphate was used for column
equilibration. HEK CM (50 ml) was loaded onto a 1 ml Capto MMC
column. A 2-fold higher load showed no mAb in the FT. The column
was then washed with 20 mM phosphate. As shown in Fig. 3, while
the FT was similar to Fig. 1, there was not much protein in 0.1 M
NaCl wash (lane-3). Washes with 0.2 M (lane-4) and 0.3 M (lane-5)
NaCl showed elution of small amounts of contaminants, but not the
mAb. Then, 0.3 M NaCl/0.2 M arginine combination at pH 7.0 (in
20 mM phosphate) was used to facilitate elution. As shown in lane-
6, a large amount of mAb was eluted with some contaminants,
indicating that this combination may be too strong tobe effective in
separating the murine mAb from contaminants. Final 1 M arginine
wash (lane-7) resulted in elution of many contaminants.
Further improvement was attempted by combining step and
gradientelution. Fig. 4 shows awash with 0.3 M NaCl (~10 ml) and a

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์จินีน 1 M ฟอสเฟต 10 มม. pH 7.0 แสดงให้เห็นว่าชะของหลาย E1สิ่งปนเปื้อน ส่วนใหญ่มาบ murine ถูก eluted ใน E2 และE3 กับสารปนเปื้อนบาง eluting ร่วม E4 และ E5 และสุดท้าย 1 Mล้างอาร์จินีพบสารปนเปื้อนเท่านั้นการทดลองคล้ายกับชะที่แตกต่างกันดำเนินเงื่อนไข HEK ซม. (25 ml) ถูกโหลดลงใน 1 มิลลิลิตรในทำนองเดียวกันคอลัมน์ Capto MMC ใน PBS หลังจากการล้างหน้าด้วย PBS การโปรตีนที่ถูกผูกไว้ที่ eluted ด้วยการไล่ระดับสีจาก PBS 1 M NaClฟอสเฟต 20 มม. pH 7.0 รูปที่ 2 แสดง SDS-หน้าโพรไฟล์ของการeluted เศษส่วน E1 และ E2 พบชะปน Aส่วนใหญ่ของมาบ murine ถูก eluted ใน E3, E4 และ E5 ซึ่งดูเหมือนจะใสกว่ากว่าเศษอาร์จินี eluted สุดท้าย 1 Mอาร์จินีล้างพบมาบและสารปนเปื้อน มันไม่ชัดเจนว่าวงมาบใน 1 M ล้างอาร์จินีเป็นแอนติบอดีพื้นเมือง หรือไม่ใช่ native แอนติบอดีถัดไป พยายามขั้นตอนชะกับ NaCl ใน phos 20 มม.-phate, pH 7.0: จากในเกาะเช ฟอสเฟต 20 มม.ใช้สำหรับคอลัมน์equilibration HEK ซม. (50 มล) ถูกโหลดลงใน 1 ml Capto MMCคอลัมน์ 2-fold สูงโหลดแสดงไม่มาบฟุต คอลัมน์ถูกแล้วล้างฟอสเฟต 20 มม. ในขณะที่ดังแสดงในรูปที่ 3ฟุตคล้ายกับรูปที่ 1 ไม่มีโปรตีนมากใน 0.1 MNaCl ล้าง (เลน-3) ล้าง ด้วย 0.2 เมตร (4 เลน) และ 0.3 M (เลน-5)NaCl พบว่าชะของสารปนเปื้อน จำนวนเล็กน้อยแต่ไม่ให้มาบ แล้ว 0.3 M NaCl/0.2 M arginine ผสมที่ pH 7.0 (ใน20 มม.ฟอสเฟต) ถูกใช้เพื่อให้ง่ายต่อการชะ ดังที่ปรากฏในเลน-6, eluted จำนวนมากมาบกับสารปนเปื้อนบางระบุว่า ชุดนี้อาจแรงเกินไปเติบโตที่มีประสิทธิภาพในการแยกมาบ murine จากสารปนเปื้อน อาร์จินีน 1 เมตรสุดท้ายล้าง (เลน-7) ในชะปนมากมายความพยายามในการปรับปรุง โดยการรวมขั้นตอน และgradientelution รูป 4 แสดงเต็มกับ 0.3 M NaCl (~ 10 ml) และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 M อาร์ 10 มม. ฟอสเฟต pH 7.0 . E1 ให้ใช้มากมายสารปนเปื้อน ส่วนใหญ่ของ ~ ) คือตัวอย่างใน ทู และE3 กับ Co hexane สารปนเปื้อน และ e4 E5 และสุดท้าย 1 เมตรอาร์ล้างพบสารปนเปื้อนเท่านั้นการทดลองที่คล้ายกันถูกนำออกมาด้วย ( ต่างเงื่อนไข hek ซม. ( 25 มล. ) คือเหมือนกับโหลดลง 1 มิลลิลิตรcapto MMC คอลัมน์ใน PBS หลังจากล้างด้วย pbs อย่างละเอียดที่ผูกพันโปรตีน มีตัวอย่าง ด้วยการไล่ระดับสีจาก PBS 1 M NaCl20 mM ฟอสเฟต pH 7.0 . รูปที่ 2 แสดงรายละเอียดของเอนไซม์ตัวอย่างเศษส่วน E1 E2 และพบชนิดของสิ่งปนเปื้อน เป็นส่วนใหญ่ของ ~ ) คือตัวอย่างใน E3 , E5 และ e4 ซึ่งปรากฏให้เป็นที่บริสุทธิ์กว่าอาร์ตัวอย่างเศษส่วน สุดท้าย 1 เมตรอาร์ล้างให้ทั้งแอนติบอดีและสารปนเปื้อน มันไม่ชัดเจนไม่ว่ามาบวงซัก 1 เมตร คือ อาร์จินีน ( พื้นเมืองหรือไม่ใช่ของพื้นเมืองแอนติบอดีถัดไป ขั้นตอน ( NaCl เป็นพยายามใน 20 phos มม. -เฟต , pH 7.0 : จาก nowon 20 มม. และใช้คอลัมน์equilibration . hek ซม. ( 50 ml ) ถูกโหลดลง capto MMC 1 มิลลิลิตรคอลัมน์ เป็นถึงโหลดที่สูง ไม่พบในคอลัมน์ ) .จากนั้นล้างด้วยฟอสเฟต 20 มิล ดังแสดงในรูปที่ 3 , ในขณะที่ฟุตมีลักษณะคล้ายรูปที่ 1 ไม่มีโปรตีนใน 0.1 โมลาร์เกลือล้าง ( lane-3 ) ล้างด้วย 0.2 M ( lane-4 ) และ 0.3 m ( lane-5 )ใช้เกลือเล็กน้อย พบสารปนเปื้อน แต่ไม่ใช่เทพเจ้าแห่งไฟ งั้น , 0.3 M NaCl / 0.2 M อาร์รวมกันที่ pH 7.0 ( ใน20 mM ฟอสเฟต ) คือใช้เพื่ออำนวยความสะดวกใช้ . ตามที่แสดงในเลน -6 , จํานวนมาก มีตัวอย่าง มีการปนเปื้อน ) ,ระบุว่า การรวมกันนี้อาจจะแรงเกินไป โทเบะ ที่มีประสิทธิภาพในแยก ~ ) จากสิ่งปนเปื้อน สุดท้าย 1 เอ็มอาร์จินีนล้าง ( lane-7 ) ส่งผลให้เกิดการชะของสิ่งปนเปื้อนมากการปรับปรุงเพิ่มเติมคือความพยายามโดยรวมขั้นตอนและgradientelution . รูปที่ 4 แสดงจมอยู่ใต้น้ำกับ 0.3 M NaCl ( ~ 10 มิลลิลิตร ) และ