rooting media. The rooted plantlets

rooting media. The rooted plantlets were transplanted into
nursery pots (6 9 6 cm, upper edge diameter 9 height)
containing peat and vermiculite (1:1 volume), incubated in
greenhouse for 1 week and then transplanted in the field.
These plants were available for softwood cuttings collected
the next growing season.
Rooting of softwood cuttings collected from tissue culture
rejuvenated MX (R) and M26 (R) were tested on July, 2013.
Softwood cuttings from apomictic seedlings ofMX(J), adult
tree canopy MX (A) and M26 (A) were used as biological
control. The chemical treatments were 3,000 mg L-1 IBA,
3,000 mg L-1 IBA ? 50 mM H2O2 and distilled water
(control).
The levels of IAA, gibberellins (GA3), abscisic acid (ABA),
Zeatin in young leaves of in vitro shoots were assayed by using
high performance liquid chromatography (HPLC) according to
the protocols described by Zhang et al. (2008). Fresh sample
(0.5 g) was ground using a mortar and pestle. Subsequently,
2.5 ml of 100 % acetonitrile containing 1 mmol of butylated
hydroxytoluene (BHT) was added to the extraction buffer.
Before injection into the HPLC, the samples were passed
through a 0.45 lm microporous membrane. The elution gradient
is shown in Table S1. The HPLC conditions were as
follows: Waters 600HPLCpump(Milford,MA,USA);Waters
2,487 ultraviolet detector with which IAA,ABAandGA3 were
detected at 280 nm, and Zeatin at 267 nm. An inertsil ODS-3
chromatography column (250 9 4.6 mm, 5 lm particle size)
was used with column temperature set at 30 C. Samples
(30 ll) were injected with an autosampler (Waters 2,707). The
standards were IAA (I2886), ABA (A1049), Zeatin (Z0164),
and GA3 (G7645) (Sigma Chemical Co, St, Louis, MO, USA).
Endogenous phytohormones were quantified by the linear
regression between the peak area and the concentration of
external standards.
For gene relative expression assay, the total RNA was
extracted using a modified cetyltrimethylam-monium bromide
(CTAB) method (Zhang et al. 2005), and the DNA was
digested at 37 C for 30 min using DNaseI (Takara, Dalian,
China) according to the manufacturer’s instructions. The
concentration of each RNA sample was determined using a
spectrophotometer (Thermo Scientific, Nanodrop 2000). To
obtain the first-strand cDNA, 1 lg of each DNA-free RNA
sample was used for reverse transcription with the M-MLV
reverse transcriptase (Takara). The quantitative measurement
of the gene expression was performed using the cDNA
samples with an AB7500 Real-time PCR System and the
SYBR Green fluorescence dye (Takara) (Li et al. 2012).
The sequences of all of the genes were obtained from
the apple genome web-site (http://genomics.research.
iasma.it/) via BLAST (basic localalignment search tool)
service. Based on the BLASTP results for those proteins
encoded by the examined genes in NCBI (http://www.ncbi.
nlm.nih.gov/), primers were designed to avoid the

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขจัดสื่อ Plantlets รากถูกปลูกเป็นเรือนเพาะชำหม้อ (6 9 6 ซม. ความสูงเส้นผ่าศูนย์กลาง 9 ขอบด้านบน)ประกอบด้วยพรุและเวอร์มิคูไลท์ (1:1 ปริมาตร), ได้รับการกกในเรือนกระจกสำหรับ 1 สัปดาห์ และจากนั้น มาในฟิลด์พืชเหล่านี้ถูกใช้สำหรับตัดไม้เนื้ออ่อนที่เก็บรวบรวมฤดูกาลปลูกถัดไปรากของไม้เนื้ออ่อนตัดรวบรวมจากเนื้อเยื่อสดชื่น MX (R) และ M26 (R) ได้รับการทดสอบบนกรกฎาคม 2013ตัดไม้เนื้ออ่อนจากต้นกล้า apomictic ofMX(J) ผู้ใหญ่ต้นไม้หลังคา MX (A) และ M26 (A) ใช้เป็นเชื้อการควบคุม เคมีบำบัดได้ 3,000 มิลลิกรัม L-1 IBA3,000 มิลลิกรัม L-1 IBA 50 มม. H2O2 และน้ำกลั่น(ควบคุม)ระดับของ IAA, gibberellins (GA3), กรดแอบไซซิก (ABA),ซีเอตินในใบอ่อนของหน่อในหลอดทดลองถูก assayed โดยใช้ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ตามโปรโตคอลที่อธิบายโดย Zhang et al. (2008) ตัวอย่างสด(0.5 กรัม) ถูกบดโดยใช้ครกและสาก ต่อมา2.5 มิลลิลิตร acetonitrile 100% ประกอบด้วย 1 mmol ของ butylatedhydroxytoluene (บาท) ถูกเพิ่มไปยังบัฟเฟอร์สกัดก่อนที่จะฉีดเข้า HPLC ตัวอย่างถูกส่งผ่านผ่านเยื่อพรุน lm 0.45 การไล่ระดับสีชะแสดงในตาราง S1 สภาพการ HPLC ก็เป็นต่อไปนี้: น้ำ 600HPLCpump(Milford,MA,USA) น้ำทะเลใสการตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลต 2,487 กับ IAA ซึ่ง ABAandGA3 ได้ตรวจพบที่ 280 nm ซีเอตินที่ 267 nm Inertsil เป็น ODS-3คอลัมน์ chromatography (250 9 4.6 มม. ขนาดอนุภาคของ lm ที่ 5)ใช้ตั้งตัวอย่าง 30 เซลเซียสอุณหภูมิของคอลัมน์(30 ll) ถูกฉีด ด้วยการสามารถ(ได้น้ำ 2,707) การมาตรฐาน IAA (I2886), ABA (A1049) ซีเอติน (Z0164),และ GA3 (G7645) (บริษัทเคมี Sigma, St, Louis, MO สหรัฐอเมริกา)Phytohormones ภายนอกถูกวัด โดยเชิงเส้นถดถอยระหว่างพื้นที่สูงสุดและความเข้มข้นของมาตรฐานภายนอกสำหรับยีนญาตินิพจน์ทดสอบ RNA รวมเป็นสกัดโดยใช้โบรไมด์แก้ไข cetyltrimethylam-moniumวิธี (CTAB) (Zhang et al. 2005), และดีเอ็นเอย่อยที่ 37 C 30 นาทีโดยใช้ DNaseI (Takara ต้าเหลียนจีน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต การความเข้มข้นของ RNA แต่ละอย่างกำหนดโดยใช้การspectrophotometer (วิทยาศาสตร์เทอร์โม Nanodrop 2000) ถึงขอสาระแรก cDNA, lg 1 ของ RNA แต่ละดีเอ็นเอฟรีตัวอย่างใช้สำหรับถอดรหัสย้อนกลับกับ M-MLVปเทส (Takara) การวัดเชิงปริมาณยีน นิพจน์ถูกดำเนินการโดยใช้ cDNAตัวอย่างระบบ PCR เรี AB7500 และสีเรืองแสงสีเขียว SYBR (Takara) (Li et al. 2012)ลำดับของยีนทั้งหมดได้รับมาจากเว็บแอปเปิ้ลพันธุไซต์ (http://genomics.researchiasma.it/) ผ่านระเบิด (เครื่องมือค้นหา localalignment พื้นฐาน)บริการ ตามผลลัพธ์ BLASTP สำหรับโปรตีนเหล่านั้นการเข้ารหัส โดยการตรวจสอบยีนใน NCBI (http://www.ncbinlm.nih.gov/), ไพรเมอร์ออกแบบมาเพื่อหลีกเลี่ยงการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สื่อราก ต้นกล้าที่ฝังรากถูกปลูกลงใน
กระถาง (6 9 6 ซม. ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางขอบบน 9 สูง)
ที่มีพรุและดิน (1: 1 โดยปริมาตร) บ่มใน
. เรือนกระจกเป็นเวลา 1 สัปดาห์และปลูกแล้วในสาขา
พืชเหล่านี้มีอยู่สำหรับไม้เนื้ออ่อน ตัดเก็บรวบรวม
ฤดูการเจริญเติบโตต่อไป.
รากของกิ่งไม้เนื้ออ่อนที่เก็บได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ
พลังวังชา MX (R) และ M26 (R) ได้รับการทดสอบกรกฏาคม 2013
การตัดไม้เนื้ออ่อนจากต้นกล้า apomictic ofMX (ญ) ผู้ใหญ่
หลังคาต้นไม้ MX (A) และ M26 (A) ถูกนำมาใช้เป็นทางชีวภาพ
ควบคุม การรักษาทางเคมีเป็น 3,000 มก. L-1 IBA,
3,000 มก. L-1 IBA? ขนาด 50 มม H2O2 และน้ำกลั่น
(Control).
ระดับของ IAA, เรลลิ (GA3) กรดแอบไซซิก (ABA)
ซีเอตินในใบอ่อนในหลอดทดลองหน่อและนำไปวิเคราะห์โดยใช้
ที่มีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ตาม
โปรโตคอลที่อธิบาย โดย Zhang et al, (2008) ตัวอย่างสด
(0.5 กรัม) คือพื้นดินโดยใช้ครกและสาก ต่อมา
2.5 มล. ของแท้ 100% มี acetonitrile 1 มิลลิโมลของ butylated
hydroxytoluene (บาท) ถูกบันทึกอยู่ในบัฟเฟอร์สกัด.
ก่อนที่จะฉีดเข้าไปใน HPLC ได้ตัวอย่างที่ถูกส่งผ่านไป
ผ่านเมมเบรน 0.45 LM พรุน ลาดชะ
จะแสดงในตาราง S1 เงื่อนไข HPLC พบว่า
ดังนี้ Waters 600HPLCpump (ฟอร์ด, MA, USA); Waters
ตรวจจับ 2,487 อัลตราไวโอเลตที่ IAA, ABAandGA3 ถูก
ตรวจพบที่ 280 นาโนเมตรและมีซีเอตินที่ 267 นาโนเมตร inertsil ODS-3
คอลัมน์โครมาโต (250 9 4.6 มม 5 LM ขนาดอนุภาค)
ถูกนำมาใช้กับอุณหภูมิคอลัมน์ตั้งไว้ที่ 30 องศาเซลเซียส ตัวอย่าง
(30 LL) ถูกฉีดด้วยการฉีดตัวอย่างอัตโนมัติ (น้ำ 2,707)
มาตรฐานเป็น IAA (I2886) ABA (A1049) ซีเอติน (Z0164)
และ GA3 (G7645) (Sigma Chemical Co, เซนต์หลุยส์, MO, USA).
phytohormones ภายนอกถูกวัดโดยการเชิงเส้น
ถดถอยระหว่างพื้นที่จุดสูงสุดและ ความเข้มข้นของ
มาตรฐานภายนอก.
ยีนญาติทดสอบการแสดงออกที่ RNA ทั้งหมดถูก
สกัดโดยใช้โบรไมด์การแก้ไข cetyltrimethylam-monium
(CTAB) วิธีการ (Zhang et al. 2005) และดีเอ็นเอที่ถูก
ย่อยที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีโดยใช้ DNaseI (Takara ต้าเหลียน
ประเทศจีน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต
ความเข้มข้นของกลุ่มตัวอย่าง RNA แต่ละคนถูกกำหนดโดยใช้
spectrophotometer (Thermo Scientific, Nanodrop 2000) ที่จะ
ได้รับเป็นครั้งแรกที่ Strand cDNA 1 LG ของแต่ละ RNA DNA ฟรี
ตัวอย่างที่ใช้ในการถอดรหัสแบบย้อนกลับที่มี M-MLV
transcriptase ย้อนกลับ (Takara) การวัดปริมาณ
การแสดงออกของยีนที่ถูกดำเนินการโดยใช้ยีน
ตัวอย่างกับ AB7500 Real-time PCR ระบบและ
สีย้อม SYBR สีเขียวเรืองแสง (Takara) (Li et al. 2012).
ลำดับทั้งหมดของยีนที่ได้รับจาก
แอปเปิ้ล จีโนมของเว็บไซต์ (http:. //genomics.research
iasma.it/) ผ่าน BLAST (ขั้นพื้นฐานเครื่องมือในการค้นหา localalignment)
บริการ บนพื้นฐานของผล BLASTP สำหรับโปรตีนเหล่านั้น
เข้ารหัสโดยยีนตรวจสอบใน NCBI (http:. //www.ncbi
nlm.nih.gov/) ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบเพื่อหลีกเลี่ยงการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

媒体支持：为plantlets是植根于移植。（6 9 nursery壶上6厘米，边缘diameter 9 height）。containing泥炭和蛭石（体积），在1:1 incubated然后，greenhouse移植1周和在该领域。可用扦插和植物都是These collected软木。下一个季节的生长。从扦插生根的组织培养collected软木。MX（R）和恢复（R）是在M26 tested七月，2013。从生殖Softwood扦插苗，成人ofMX（J）（A）和树冠M26 MX是用（A）作为生物控制图是3,000 mg . L-1 IBA的影响，头发护理3,000 mg L-1 IBA distilled 50毫米H2O2和水？（控制）。gibberellins）的IAA，GA3（级）、脱落酸（ABA）。在年轻的Zeatin拍摄地是通过使用在体外分析。高效液相色谱（HPLC）高性能根据该协议由Zhang等人described 2008新鲜的样本）。（g）是一个0.5地面砂浆的使用，和Subsequently pestle。（1）100% 2.5 acetonitrile containing（丁醇）说hydroxytoluene（BHT）是提取到缓冲区。高效液相色谱法，为在注射是通过样本。通过微孔膜0.45 lm a）elution梯度。在表S1）是shown HPLC条件是As。如下：（600HPLCpump水域米尔福德，MA，USA）的水域；这2,487 ultraviolet与IAA，ABAandGA3是探测器。在Zeatin detected 280海里，在一个ODS-3 inertsil 267 nm。色谱柱（250 9 4.6毫米，5 lm转录的大小）。是用在温度与30 column set C .样本（LL）是一个injected 30与2,707）自动进样器（水域）。是I2886 IAA（标准）、ABA（A1049 Zeatin Z0164），（），和GA3（G7645西格玛化工有限公司）、ST、Louis，MO，美国）。植物激素是由一个线性Endogenous量化。之间的回归和浓度的峰值区域。外部标准。为检测基因表达相关，是总RNA使用溴化cetyltrimethylam-monium extracted a modified方法（CTAB）等。2005（张），是和DNA。在37 digested C，使用30 min（大连DNaseI机根据中国的制造商）的。每个样本的RNA的浓度是一个determined使用分光光度计（热），Nanodrop 2000科学。”first-strand获得的cDNA，RNA（每1 DNA-free 15样本是用反转录与M-MLV for逆转录酶（宝）quantitative）测量。使用的是performed的cDNA基因的表达实时系统与一个AB7500样品和PCR绿色荧光染料（Ⅰ）（Li et al .机2012）。sequences）的基因是从所有的obtained苹果基因组的genomics.research web-site（http : / /。通过BLAST（Basic iasma.it /）localalignment搜索工具结果的基础上的服务。为那些BLASTP蛋白该方法允许通过在encoded examined基因（http : / / www.ncbi。nlm.nih.gov /），是designed avoid的引物对