DNA damage experimentsCuSO4 (6 lM),

DNA damage experiments
CuSO4 (6 lM), the indicated concentrations of sulfur compound, ethanol (10 mM), ddH2O, MOPS (10 mM), NaCl (130 mM), and ascorbic acid (7.5 lM) at pH 7 were allowed to stand for 5 min at room temperature. Plasmid (pBSSK, 0.1 pmol in 130 mM NaCl) was added to the reaction mixture and allowed to stand for an additional 5 min. The reaction was then initiated by the addition of H2O2 (50 lM). After 30 min, EDTA (50 lM) quenched the reaction. For CuðbipyÞII2 gel electrophoresis studies, CuðbipyÞII2 (50 lM) was used in place of CuSO4, and the concentration of ascorbic acid was increased to 62.5 lM. For experiments with iron, FeSO4 (2 lM) and MES (10 mM, pH 6) was substituted for the CuSO4, ascorbic acid, and MOPS; the pH was decreased due to the insolubility of iron at pH 7. All FeII solutions were freshly prepared and used immediately as previously reported [58]. All concentrations indicated are final concentrations in a 10 lL volume. For FeII experiments with GSSG and GSH, the final MES buffer concentration was increased to 100 mM (pH 6) for 10,000 lM GSSG/GSH.
Damaged and undamaged forms of plasmid DNA were separated using 1% agarose gel electrophoresis in TAE buffer (140 V for 30 min). The gels were then stained with ethidium bromide and imaged under UV light, and the amount of damaged (nicked) DNA versus undamaged (circular) DNA was determined using UViProMW (Jencons Scientific Inc., Bridgeville, PA, 2003). Ethidium bromide stains circular DNA less efficiently than nicked DNA; therefore, circular DNA band intensities were multiplied by 1.24 prior to comparison [59,60]. The intensities of the DNA bands were normalized for each lane so that addition of circular and nicked DNA equals 100%.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดลองความเสียหายของดีเอ็นเอCuSO4 (6 lM), การระบุความเข้มข้นของสารประกอบกำมะถัน เอทานอล (10 mM), ddH2O, MOPS (10 mM), NaCl (130 มิลลิเมตร), และกรดแอสคอร์บิค (7.5 lM) ที่ pH 7 ที่อนุญาตให้ยืนใน 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง Plasmid (pBSSK, pmol 0.1 ใน 130 มม. NaCl) ถูกเพิ่มลงในส่วนผสมของปฏิกิริยา และอนุญาตให้ยืนใน 5 นาทีเพิ่มเติม แล้วเริ่มปฏิกิริยา โดยเพิ่ม H2O2 (50 lM) หลังจาก 30 นาที EDTA (50 lM) quenched ปฏิกิริยา สำหรับ CuðbipyÞII2 เจ electrophoresis ศึกษา CuðbipyÞII2 (50 lM) ถูกใช้ CuSO4 และความเข้มข้นของกรดแอสคอร์บิคขึ้นไป 62.5 lM สำหรับการทดลองกับเหล็ก FeSO4 (2 lM) และ MES (10 mM, pH 6) ถูกแทน CuSO4 กรดแอสคอร์บิค และ MOPS pH ลดลงเนื่องจาก insolubility ของเหล็กที่ pH 7 โซลูชั่น FeII ทั้งหมดถูกลิ้ม และใช้ทันทีก่อนหน้านี้รายงาน [58] ระบุความเข้มข้นทั้งหมดมีความเข้มข้นสุดท้ายในไดรฟ์ข้อมูลจะ 10 สำหรับการทดลอง FeII GSSG กับ GSH สุดท้าย MES บัฟเฟอร์ความเข้มข้นขึ้นไป 100 มม. (pH 6) สำหรับ 10000 lM GSSG/GSHเสียหาย และไม่เสียหายในรูปแบบดีเอ็นเอที่แยกโดยใช้ 1% agarose plasmid เจ electrophoresis ในบัฟเฟอร์เต้ (140 V ใน 30 นาที) เจได้แล้วสีกับโบรไมด์ ethidium และ imaged ภายใต้แสง UV และกำหนดจำนวนของดีเอ็นเอ (nicked) เสียหายเมื่อเทียบกับดีเอ็นเอ (กลม) ไม่เสียหายโดยใช้ UViProMW (Jencons วิทยาศาสตร์ Inc., Bridgeville, PA, 2003) โบรไมด์ Ethidium คราบสกปรก DNA วงกลมอย่างมีประสิทธิภาพน้อยกว่า nicked DNA ดังนั้น ปลดปล่อยก๊าซ DNA วงกลมถูกคูณ ด้วย 1.24 ก่อนเปรียบเทียบ [59,60] ปลดปล่อยก๊าซของแถบดีเอ็นเอได้ตามปกติในแต่ละเลนเพื่อให้เพิ่มวงกลม และ nicked DNA เท่ากับ 100%

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เสียหายของดีเอ็นเอทดลอง
CuSO 4 (6 LM) ความเข้มข้นระบุสารประกอบกำมะถันเอทานอล (10 มิลลิเมตร) ddH2O, MOPS (10 มิลลิเมตร) โซเดียมคลอไรด์ (130 มิลลิเมตร) และวิตามินซี (7.5 LM) ที่ pH 7 ได้รับอนุญาตให้ยืน 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง พลาสมิด (pBSSK 0.1 pmol ใน 130 มิลลิโซเดียมคลอไรด์) ได้ถูกเพิ่มเข้าไปผสมปฏิกิริยาและอนุญาตให้ยืนสำหรับอีก 5 นาที ปฏิกิริยาจากนั้นได้เริ่มขึ้นโดยการเติม H2O2 นี้ (50 LM) หลังจาก 30 นาที, EDTA (50 LM) ดับปฏิกิริยา สำหรับCuðbipyÞII2ศึกษาข่าวคราว, CuðbipyÞII2 (50 LM) ถูกนำมาใช้ในสถานที่ของ CuSO 4, และความเข้มข้นของวิตามินซีเพิ่มขึ้นเป็น 62.5 การ lm สำหรับการทดลองกับเหล็ก FeSO4 (2 LM) และ mes (10 มิลลิพีเอช 6) ถูกสับเปลี่ยนสำหรับ CuSO 4, วิตามินซีและ MOPS; ค่าพีเอชลดลงเนื่องจากการที่แก้ไม่ตกของธาตุเหล็กที่ pH 7. การแก้ปัญหาทั้งหมด FeII ถูกปรุงสดใหม่และใช้งานได้ทันทีในขณะที่รายงานก่อนหน้านี้ [58] ทุกความเข้มข้นที่ระบุมีความเข้มข้นสุดท้ายในปริมาณ LL 10 สำหรับการทดลอง FeII กับ GSSG และ GSH สุดท้ายเข้มข้นบัฟเฟอร์ MES เพิ่มขึ้นเป็น 100 มิลลิ (pH 6) 10,000 LM GSSG / GSH.
เสียหายและรูปแบบที่ไม่เสียหายของดีเอ็นเอของพลาสมิดที่ถูกแยกออกโดยใช้เจลอิ agarose 1% ในบัฟเฟอร์ TAE (140 V เป็นเวลา 30 นาที) เจลถูกย้อมด้วย ethidium bromide และถ่ายภาพภายใต้แสงยูวีและจำนวนเงินที่ได้รับความเสียหาย (แหว่ง) เมื่อเทียบกับดีเอ็นเอเสียหาย (วงกลม) ดีเอ็นเอถูกกำหนดโดยใช้ UViProMW (Jencons วิทยาศาสตร์อิงค์บริดจ์, PA, 2003) ethidium bromide คราบดีเอ็นเอวงกลมน้อยอย่างมีประสิทธิภาพมากกว่าดีเอ็นเอแหว่ง; จึงดีเอ็นเอวงกลมเข้มวงถูกคูณด้วย 1.24 ก่อนที่จะมีการเปรียบเทียบ [59,60] ความเข้มของวงดีเอ็นเอเป็นปกติในแต่ละช่องทางเพื่อให้การเพิ่มของดีเอ็นเอวงกลมและแหว่งเท่ากับ 100%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความเสียหายของดีเอ็นเอการทดลอง
CuSO4 ( LM ) , พบความเข้มข้นของกำมะถันผสมเอทานอล ( 10 มม. ) , ddh2o , mops ( 10 มม. ) , เกลือ ( 130 มิลลิเมตร ) และกรดแอสคอร์บิค ( 7.5 LM ) ที่ pH 7 ได้รับอนุญาตให้ยืนสำหรับ 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง พลาสมิด ( pbssk 0.1 pmol ใน 130 mM NaCl ) คือการเพิ่มปฏิกิริยาผสมและอนุญาตให้ยืนสำหรับอีก 5 นาทีปฏิกิริยาที่ถูกริเริ่มโดยนอกเหนือจาก H2O2 ( 50 กล. ) หลังจาก 30 นาที , EDTA ( 50 กล. ) ดับการเกิดปฏิกิริยา ใช้ð bipy Þ ii2 gel electrophoresis ศึกษา จุฬาฯ ð bipy Þ ii2 ( 50 กล. ) ถูกนำมาใช้ในสถานที่ของ CuSO4 และความเข้มข้นของกรดแอสคอร์บิคเพิ่มขึ้นเป็น 62.5 ไมโครเมตร สำหรับการทดลองกับเหล็ก feso4 ( LM ) และเดือน ( อืม พีเอช 6 10 ) คือแทน CuSO4 , กรดแอสคอร์บิค และ mops ;pH ลดลงเนื่องจากมีกรดเมตาของเหล็กที่ pH 7 โซลูชั่นก็มีการเตรียมสด และใช้ทันทีเป็นก่อนหน้านี้รายงาน [ 58 ] ทั้งหมด พบมีความเข้มข้นในปริมาณความเข้มข้นสุดท้าย 10 จะ สำหรับการทดลองกับ gssg หลงและ GSH , สุดท้ายเราบัฟเฟอร์ความเข้มข้นเพิ่มขึ้นเป็น 100 mm ( pH 6 ) 10 , 000 LM gssg / GSH .
รูปแบบของพลาสมิดดีเอ็นเอเสียหายและไม่เสียหายแยกกันใช้ 1% เจลอิเลคโตรโฟรีซีสในแทบัฟเฟอร์ ( 140 ( 30 นาที ) เจลแล้วย้อมด้วยทิเดียมโบรไมด์และอื่นๆภายใต้แสง UV และปริมาณของความเสียหาย ( แหว่ง ) ดีเอ็นเอเมื่อเทียบกับดีเอ็นเอไม่เสียหาย ( วงกลม ) คือการพิจารณา uvipromw ( jencons ทางวิทยาศาสตร์สำหรับ Bridgeville , PA , 2003 )ทิเดียมโบรไมด์วงกลมดีเอ็นเอมีประสิทธิภาพน้อยกว่าคราบแหว่ง ดีเอ็นเอ ดังนั้น ความเข้มของแถบดีเอ็นเอรูปวงกลมถูกคูณด้วย 5 ก่อนที่จะเปรียบเทียบ [ 59,60 ] ส่วนความเข้มของแถบดีเอ็นเอเป็นปกติสำหรับแต่ละช่องทางเพื่อเพิ่มและวงกลมแหว่ง DNA เท่ากับ 100%