2.4. DNA extraction methods for toe

2.4. DNA extraction methods for toenails
2.4.1. QIAGEN DNA investigator kit method
At least 0.01 g of toenail fragment(s) were weighed in a 1.5 mL
tube and 300 mL of Buffer ATL (Qiagen), 20 mL 20 mg/mL
Proteinase K (Qiagen) and 20 mL 1 M DTT (Sigma–Aldrich) added.
The tube was vortexed for 10 s and incubated with agitation for
0.5 h on a thermomixer (900 rpm) at 56 8C. The manufacturer’s
protocol ‘Isolation of Total DNA from Nail Clippings and Hair’ was
followed for the rest of the process using a manual extraction
method with carrier RNA included. Samples were eluted in 100 mL
of Buffer ATE (Qiagen). A pre-wash of the volunteer nail samples
was not required for the final developed method.
A number of modifications were applied to the optimised
method for the casework toenail sample extractions. The nail
was held with forceps while the surfaces of the nail were scraped
using a scalpel to remove material such as decomposed flesh and
dirt. The nail fragment(s) were rinsed in 1 mL of 70% (v/v)
ethanol (VWR International) solution vortexed for 30 s in a
1.5 mL tube. The solution was discarded and the wash repeated
using an additional 1 mL of 70% (v/v) ethanol solution. Nail
fragment(s) were left to dry for 5 min before being placed in a
new 1.5 mL tube for extraction. Toenail samples were extracted
following the manufacturer’s protocol ‘‘Isolation of DNA from
forensic casework samples’’ using a QIAcube for automation
(cases 5–30), or manually (cases 1–4) following the ‘Isolation of
Total DNA from Nail Clippings and Hair’ protocol as detailed above.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. ดีเอ็นเอวิธีการสกัดสำหรับเล็บ2.4.1. QIAGEN DNA นักสืบชุดวิธีเล็บเท้า fragment(s) น้อย 0.01 กรัมได้น้ำหนัก 1.5 mLหลอดและบัฟเฟอร์ ATL (Qiagen), 20 มล. 300 มล. 20 mg/mLProteinase K (Qiagen) และ 20 มล. 1 M DTT (ซิกม่า – Aldrich) เพิ่มขึ้นหลอดถูก vortexed สำหรับ 10 s และได้รับการกก ด้วยอาการกังวลต่อthermomixer (900 รอบต่อนาที) ที่ 56 8C. 0.5 ชั่วโมง ของผู้ผลิตรโทคอ 'แยกการรวมดีเอ็นเอจากการตัดเล็บและเส้นผม'ตามสำหรับส่วนเหลือของกระบวนการโดยใช้สกัดด้วยตนเองวิธี ด้วย RNA รวมผู้ให้บริการ ตัวอย่างที่ eluted ใน 100 มิลลิลิตรบัฟเฟอร์ ATE (Qiagen) ล้างก่อนตัวอย่างเล็บที่อาสาสมัครไม่จำเป็นสำหรับการพัฒนาขั้นสุดท้ายใช้หมายเลขของการปรับเปลี่ยนเพื่อความเหมาะสมวิธีการการสกัดตัวอย่างเล็บเท้า casework เล็บจัดขึ้น ด้วยคีมในขณะพื้นผิวของเล็บที่ขูดใช้ scalpel เป็นการเอาวัสดุเช่นย่อยสลายเนื้อ และสิ่งสกปรก Fragment(s) เล็บถูกล้างใน 1 มล. 70% (v/v)vortexed แก้ปัญหาเอทานอล (VWR International) 30 ในการหลอด 1.5 mL ทางออกถูกละทิ้ง และการล้างซ้ำใช้เพิ่มเติม 1 มิลลิลิตรของสารละลายเอทานอล 70% (v/v) เล็บfragment(s) ถูกทิ้งให้แห้ง 5 นาทีก่อนถูกวางไว้ในหลอด 1.5 มิลลิลิตรใหม่สำหรับการดูด ตัวเล็บเท้าที่สกัดต่อผู้ผลิตโพรโทคอล '' แยก DNA จากตัวอย่างนิติ casework'' ใช้ QIAcube การทำงานอัตโนมัติ(กรณี 5 – 30), หรือด้วยตนเอง (กรณีที่ 1 – 4) ต่อการ ' แยกดีเอ็นเอจากการตัดเล็บและผมรวม ' โพรโทคอลตามรายละเอียดข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 วิธีการสกัดดีเอ็นเอสำหรับเล็บเท้า
2.4.1 QIAGEN ดีเอ็นเอวิธีการชุดตรวจสอบ
อย่างน้อย 0.01 กรัมของชิ้นส่วนเล็บเท้า (s) ได้รับการชั่งน้ำหนักในมล 1.5
หลอดและ 300 มลบัฟเฟอร์ ATL (Qiagen) 20 มล 20 mg / ml
Proteinase K (Qiagen) และ 20 มล M 1 DTT ( Sigma-Aldrich) เพิ่ม.
หลอดถูกหมุนวนเวลา 10 วินาทีและบ่มด้วยความปั่นป่วนสำหรับ
0.5 ชั่วโมงใน thermomixer (900 รอบต่อนาที) 56 8C ของผู้ผลิต
พิธีสารการแยกดีเอ็นเอรวมจากสื่อสิ่งพิมพ์เล็บและผม 'ถูก
ใช้สำหรับส่วนที่เหลือของกระบวนการที่ใช้สกัดคู่มือ
วิธีการกับผู้ให้บริการ RNA รวม ตัวอย่างที่ถูกชะใน 100 มล
ของบัฟเฟอร์ ATE (Qiagen) ก่อนล้างเล็บของตัวอย่างอาสาสมัคร
ก็ไม่จำเป็นสำหรับการพัฒนาวิธีการสุดท้าย.
จำนวนของการปรับเปลี่ยนมากถูกนำไปใช้ในการเพิ่มประสิทธิภาพ
วิธีการสกัดตัวอย่าง casework เล็บเท้า เล็บ
ถูกจัดขึ้นด้วยคีมในขณะที่พื้นผิวของเล็บที่ถูกคัดลอกมา
ใช้มีดผ่าตัดเพื่อเอาวัสดุเช่นเนื้อย่อยสลายและ
สิ่งสกปรก ส่วนเล็บ (s) ถูกล้างใน 1 มิลลิลิตร 70% (v / v)
เอทานอล (VWR นานาชาติ) วิธีการแก้ปัญหาหมุนวนเป็นเวลา 30 วินาทีใน
หลอดมล 1.5 วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกทิ้งและล้างซ้ำ
โดยใช้เพิ่มอีก 1 มิลลิลิตร 70% (V v /) วิธีการแก้ปัญหาเอทานอล เล็บ
ชิ้นส่วน (s) ถูกทิ้งให้แห้งเป็นเวลา 5 นาทีก่อนที่จะถูกวางไว้ใน
ใหม่ 1.5 มิลลิลิตรหลอดสำหรับการสกัด ตัวอย่างเล็บเท้าถูกสกัด
ต่อไปพิธีสารของผู้ผลิต 'การแยกดีเอ็นเอจาก
ตัวอย่าง casework นิติวิทยาศาสตร์' 'ใช้ QIAcube สำหรับระบบอัตโนมัติ
(กรณีที่ 5-30) หรือด้วยตนเอง (กรณี 1-4) ดังต่อไปนี้' การแยก
ดีเอ็นเอรวมจากสื่อสิ่งพิมพ์และเล็บ โปรโตคอลผม 'ตามรายละเอียดข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . วิธีการสกัดดีเอ็นเอสำหรับเล็บเท้าเครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . เพิ่มวิธีการสืบสวนชุดดีเอ็นเออย่างน้อย 0.01 กรัม ส่วนเล็บเท้า ( s ) มีน้ำหนักใน 1.5 มิลลิลิตรหลอดและ 300 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์ ATL ( เพิ่ม ) 20 ml 20 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรโปรตีนเค ( เพิ่ม ) และ 20 เมตร 20 ml 1 ( Sigma ) ดิช ) เพิ่มหลอดมัน vortexed 10 และบ่มด้วยการกวนสำหรับ0.5 ชั่วโมงบน thermomixer ( 900 รอบต่อนาทีที่ 56 8C . ของผู้ผลิตโปรโตคอลการแยกดีเอ็นเอทั้งหมดจากที่ตัด เล็บและผม’ตามสำหรับส่วนที่เหลือของกระบวนการโดยใช้การสกัดด้วยตนเองวิธีกับผู้ให้บริการซึ่งรวม จำนวนตัวอย่างใน 100 มล.กันชน กิน ( เพิ่ม ) ก่อนล้างเล็บตัวอย่างของอาสาสมัครไม่จําเป็นสําหรับสุดท้ายพัฒนาวิธีหมายเลขของการปรับเปลี่ยนประยุกต์ที่ดีที่สุดวิธีสำหรับ casework เล็บเท้าตัวอย่างการสกัด . เล็บจัดขึ้นด้วยคีมในขณะที่พื้นผิวของเล็บที่ถูกโกนใช้มีดผ่าตัดเพื่อเอาวัสดุที่ย่อยสลายเนื้อ เช่นสิ่งสกปรก เล็บส่วน ( s ) ถูกล้างใน 1 ml เท่ากับ 70 เปอร์เซ็นต์ ( v / v )เอทานอล ( บริษัท Imcopa International ) โซลูชั่น vortexed 30 s ในหลอด 1.5 ml . โซลูชั่นที่ถูกทิ้งและล้างซ้ำใช้เพิ่ม 1 ml 70 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) สารละลายเอทานอล เล็บส่วน ( s ) ถูกทิ้งให้แห้งประมาณ 5 นาทีก่อนที่จะถูกวางไว้ในใหม่ 1.5 ml หลอดสำหรับการสกัด เล็บเท้าสกัดตัวอย่างตามโปรโตคอลของผู้ผลิต "isolation ดีเอ็นเอจากนิติเวช casework ตัวอย่าง " " ใช้ qiacube สำหรับระบบอัตโนมัติ( กรณี 5 – 30 ) หรือด้วยตนเอง ( กรณี 1 – 4 ) ดังต่อไปนี้ " การแยกดีเอ็นเอทั้งหมดจากที่ตัด เล็บและผม " พิธีสารดังรายละเอียดข้างต้น