2. Materials and methods2.1. Raw ma

2. Materials and methods
2.1. Raw material
Waste paper was collected from the paper plant ofCellulose and
Paper Division, Forest Research Institute, Dehra Dun (India). The
waste paper was processed using valley beater (Vally Iron Work
Co., Appleton, WI, USA) at room temperature for defiberization and
production ofpulp. Pulp was air dried and powdered in a Willey mill
(A. Gallenkamp Co., Ltd., London) to 60 mesh size. The powdered
material was used for the study.
2.2. Biomass composition analysis
The composition of waste paper was analyzed for holocellulose, lignin, pentosans, ash and moisture content following TAPPI
protocols.
2.3. Dilute acid pretreatment
Conditions for the dilute acid pretreatment of waste paper were
optimized by varying solid/liquid ratio 1:8–1:14, treatment time
01–06 h, and sulfuric acid concentration 0.005–1.00 N in a 1.0 l
reaction vessel at 120 ◦C in an autoclave. The acid hydrolyzates
after treatment were recovered by filtering through double-layered
muslin cloth. The liquid hydrolyzate filtrate was analyzed for total
reducing sugars, xylose and phenolics released.
2.4. Detoxification ofacid hydrolyzate
The acid hydrolyzate ofwaste paper was detoxified at room temperature by mixing dried calcium oxide (CaO) till the pH raised to
7.0, proceeded with continuous stirring for 60 min and then centrifuged (15,000 × g, 15 min) to remove the precipitate. The CaO
treated hydrolyzate was further detoxified by adding 2% (w/v) activated charcoal with continuous stirring at room temperature for
30 min and the detoxified hydrolyzate was recovered using vacuum
filtration.
2.5. Fermentation ofdetoxified hydrolyzate
2.5.1. Microorganism
P. stipitis NCIM-3499 was procured from National Chemical Laboratory (NCL), Pune (India) for the current study. It was cultivated
on agar medium containing (g/l); xylose 20, yeast extract 3.0, malt
extract 3.0, peptone 5.0, agar 20 at pH 5.0 and temperature 30 ◦C.
Maintained the culture on agar slants and preserved at 4 ◦C.
Table 1
Dilute acid pretreatment of waste paper with different solid:liquid ratios.
Bath ratio TRS (g/l) Xylose (g/l) Phenolics (%)
1:8 2.88 ± 0.133 0.422 ± 0.021 0.016 ± 0.001
1:10 3.27 ± 0.162 0.759 ± 0.039 0.022 ± 0.001
1:12 2.74 ± 0.164 0.432 ± 0.032 0.017 ± 0.002
1:14 2.34 ± 0.117 0.347 ± 0.021 0.014 ± 0.001
Table 2
Dilute acid pretreatment of waste paper with different reaction time.
Time (h) TRS (g/l) Xylose (g/l) Phenolics (%)
1 h 1.022 ± 0.042 0.514 ± 0.022 0.012 ± 0.001
2 h 2.542 ± 0.097 1.213 ± 0.032 0.017 ± 0.001
3 h 2.615 ± 0.096 1.223 ± 0.030 0.019 ± 0.001
4 h 2.855 ± 0.138 1.350 ± 0.029 0.036 ± 0.002
5 h 3.187 ± 0.183 1.931 ± 0.062 0.042 ± 0.001
6 h 3.601 ± 0.196 2.111 ± 0.054 0.059 ± 0.003
2.5.2. Fermentation
The fermentation of the detoxified acid hydrolyzate was carried out using bench top fermentor (5 l, Sartorius, Germany). The
acid hydrolyzate (10.79 g/l sugars) supplemented with (g/l) NH4Cl
0.5, KH2PO4 2.0, MgSO4·7H2O 0.5, yeast extract 1.5, CaCl2·2H2O 0.1,
FeCl3·2H2O 0.1, ZnSO4·7H2O 0.001 was inoculated with 10% (v/v)
inoculum ofP. stipitis at pH 5.0 and incubated at 30 ◦C with 150 rpm
of agitation. The pH of the medium was adjusted with 2 N HCl and
2 N NaOH. The dissolved oxygen concentration was monitored continuously throughout the process using dissolved oxygen probe and
air flow of 0.4 l/min was maintained throughout the study. Samples were withdrawn at regular intervals of 4 h and centrifuged for
15 min. The supernatant was used to determine the ethanol and
residual sugar concentration.
2.6. Analytical methods
The concentration of total reducing sugars (TRS), phenolic
content and ethanol was determined using dinitrosalicylic acid
(DNS) method (Miller, 1959), Folin–Ciocalteu method (Singleton,
Orthofer, & Lamuela-Raventos, 1999) and chromic acid method
(Caputi, Ueda, & Brown, 1968) respectively. The xylose concentration was estimated by p-bromoaniline method (Bala et al., 2004).
2.7. Wide angle X-ray diffractions (WAXDs)
WAXDs of solid samples were recorded using a Bruker AXS D8
Advance X-ray powder diffractometer, Wisconsin, USA, with a Cu
K target.
2.8. Statistical analysis
All the experiments were performed in triplicate and the results
are presented as mean ± standard deviation

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. ดิบกระดาษขยะรวบรวมจาก ofCellulose พืชกระดาษ และกระดาษแบ่ง ป่า สถาบันวิจัย เดห์ร่าดัน Dun (อินเดีย) ที่ใช้ตีวัลเลย์ (แหล่งเตาผลิตขยะกระดาษมวลบริษัท แอปเปิล WI สหรัฐอเมริกา) ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ defiberization และผลิต ofpulp เยื่อกระดาษอากาศแห้ง และผงในโรงสี Willey(A. Gallenkamp Co., Ltd. ลอนดอน) ไป 60 ตาข่ายขนาดนั้น แบบผงวัสดุที่ใช้ในการศึกษา2.2. ชีวมวลวิเคราะห์องค์ประกอบมีวิเคราะห์องค์ประกอบของขยะกระดาษต่อ TAPPI เนื้อหา holocellulose, lignin, pentosans เถ้า และความชื้นโปรโตคอลการ2.3 การ dilute pretreatment กรดเงื่อนไขสำหรับการ pretreatment กรด dilute กระดาษเสียได้เพิ่มประสิทธิภาพ โดยแตกต่างกันของแข็ง/ของเหลวอัตราส่วน 1:8 1:14 รักษาเวลา01 – 06 h และกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 0.005 – 1.00 N ใน 1.0 lเรือปฏิกิริยาที่ 120 ◦C ในตัวด้วย Hydrolyzates กรดหลังการรักษาได้ถูกกู้คืน โดยการกรองผ่านชั้นสองผ้ามัสลิน สารกรองน้ำ hydrolyzate ได้วิเคราะห์ความรวมลดน้ำตาล xylose และ phenolics ที่นำออกใช้2.4. ความ ofacid hydrolyzateกระดาษ ofwaste hydrolyzate กรดถูก detoxified ที่อุณหภูมิห้อง โดยผสมแห้งแคลเซียมออกไซด์ (CaO) จนยก pH7.0 ครอบครัวกับกวนอย่างต่อเนื่องในนาที 60 และ centrifuged แล้ว (15000 × g, 15 นาที) เอา precipitate การเกาhydrolyzate บำบัดถูก detoxified โดยเพิ่ม 2% (w/v) ถ่านกับกวนอย่างต่อเนื่องที่อุณหภูมิห้องในเพิ่มเติม30 นาทีและ detoxified hydrolyzate ถูกกู้คืนโดยใช้เครื่องดูดฝุ่นกรอง2.5 การหมัก ofdetoxified hydrolyzate2.5.1. จุลินทรีย์Stipitis P. NCIM-3499 ถูกค้นหาจากชาติเคมีปฏิบัติ (NCL), เน (อินเดีย) ในการศึกษาปัจจุบัน ก็ปลูกบนกลาง agar ที่ประกอบด้วย (g/l); xylose 20, 3.0 มอลต์สกัดจากยีสต์แยก 3.0, peptone 5.0, agar 20 ที่ pH 5.0 และอุณหภูมิ 30 ◦Cรักษาวัฒนธรรมใน agar เอียง และเก็บรักษาไว้ที่ 4 ◦Cตารางที่ 1Pretreatment กรด dilute ของขยะกระดาษกับอัตราส่วนของแข็งที่แตกต่างกัน: ของเหลวห้องน้ำ TRS (g/l) Xylose (g/l) Phenolics (%) อัตราส่วน1:8 2.88 0.133 0.422 ±± 0.021 0.016 ± 0.0011:10 3.27 ± 0.162 0.759 0.039 0.022 ±± 0.0011:12 ± 0.164 0.432 2.74 0.032 0.017 ±± 0.0021:14 ± 2.34 ± 0.117 0.347 0.021 0.014 ± 0.001ตารางที่ 2Dilute pretreatment กรดของกระดาษเสียเวลาตอบสนองที่แตกต่างกันเวลา (h) Phenolics Xylose (g/l) TRS (g/l) (%)1 h 1.022 0.042 0.514 ±± 0.022 0.012 ± 0.0012 h 2.542 0.097 1.213 ±± 0.032 0.017 ± 0.0013 h 2.615 0.096 1.223 ±± 0.030 0.019 ± 0.0014 h 2.855 0.138 1.350 ±± 0.029 0.036 ± 0.0025 h 3.187 0.183 1.931 ±± 0.062 0.042 ± 0.0016 h 3.601 0.196 2.111 ±± 0.054 0.059 ± 0.0032.5.2 การหมักหมัก hydrolyzate กรด detoxified ที่ดำเนินโดยใช้ม้านั่งสุด fermentor (5 l บริษัทซาร์โทเรียส เยอรมนี) ที่กรด hydrolyzate (น้ำตาล 10.79 g/l) เสริม ด้วย (g/l) NH4Cl0.5, KH2PO4 2.0, MgSO4·7H2O 0.5 ยีสต์สกัด 1.5, CaCl2·2H2O 0.1FeCl3·2H2O 0.1, ZnSO4·7H2O 0.001 ถูก inoculated 10% (v/v)inoculum ofP stipitis ที่ pH 5.0 และ incubated ที่ 30 ◦C กับ 150 รอบต่อนาทีของอาการกังวลต่อการ PH ของตัวกลางถูกปรับปรุง ด้วย 2 N HCl และ2 N NaOH ความเข้มข้นออกซิเจนละลายได้ติดตามอย่างต่อเนื่องตลอดทั้งกระบวนการใช้ออกซิเจนละลายโพรบ และกระแสอากาศ 0.4 l/min ที่เก็บตลอดการศึกษา ถอน 4 h จำเจ และ centrifuged สำหรับตัวอย่าง15 นาที Supernatant ถูกใช้เพื่อกำหนดเอทานอล และความเข้มข้นของน้ำตาลที่เหลือ2.6 การวิเคราะห์วิธีความเข้มข้นของน้ำตาล (TRS), ฟีนอที่ลดลงเนื้อหาและเอทานอลถูกกำหนดโดยใช้กรด dinitrosalicylic(DNS) วิธี (มิลเลอร์ 1959), วิธี Folin-Ciocalteu (เดี่ยวOrthofer และ Lamuela-Raventos, 1999) และกรด chromic วิธี(Caputi ดะ และสี น้ำตาล 1968) ตามลำดับ ความเข้มข้น xylose ถูกประเมิน โดยวิธี p bromoaniline (Bala et al., 2004)2.7 กว้างมุมเอ็กซ์เรย์ diffractions (WAXDs)WAXDs แข็งอย่างถูกบันทึกไว้โดยใช้เป็น Bruker AXS D8เอ็กซ์เรย์ diffractometer ผง วิสคอนซิน สหรัฐอเมริกา กับ Cu เป็นการล่วงหน้าเป้าหมายแบบ K2.8. สถิติวิเคราะห์ดำเนินการทดลองทั้งหมดใน triplicate และผลลัพธ์แสดงเป็นเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัตถุดิบ
เศษกระดาษที่ถูกเก็บมาจากโรงงานกระดาษ ofCellulose และ
กระดาษกองสถาบันวิจัยป่าไม้, Dehra Dun (อินเดีย)
เศษกระดาษที่ถูกประมวลผลโดยใช้ตีหุบเขา (Vally Iron Work
Co. , แอปเปิล, WI, USA) ที่อุณหภูมิห้อง defiberization และ
การผลิต ofpulp เยื่อถูกอากาศแห้งและผงในโรงงานวิลลี
(เอ Gallenkamp จำกัด ลอนดอน) ถึง 60 ขนาดตาข่าย ผง
วัสดุที่ถูกนำมาใช้เพื่อการศึกษา.
2.2 การวิเคราะห์องค์ประกอบชีวมวล
องค์ประกอบของขยะกระดาษได้รับการวิเคราะห์สำหรับ holocellulose ลิกนิน pentosans เถ้าและความชื้นต่อไปนี้ TAPPI
โปรโตคอล.
2.3 การปรับสภาพกรดเจือจาง
เงื่อนไขในการปรับสภาพกรดเจือจางเศษกระดาษที่ถูก
เพิ่มประสิทธิภาพโดยแตกต่างกันที่เป็นของแข็ง / ของเหลวอัตราส่วน 1: 8-1: 14, เวลาในการรักษา
01-06 ชั่วโมงและความเข้มข้นของกรดซัลฟูริก 0.005-1.00 N in 1.0 ลิตร
เรือปฏิกิริยาที่ 120 ◦Cในหม้อนึ่งความดัน hydrolyzates กรด
หลังการรักษาหายโดยการกรองผ่านสองชั้น
ผ้ามัสลิน กรองของเหลวไฮโดรไลมาวิเคราะห์รวม
น้ำตาลลดไซโลสและฟีนอลที่ปล่อยออก.
2.4 การล้างพิษ ofacid ไฮโดรไลเซ
ไฮโดรไลกรด ofwaste กระดาษถูกชะล้างพิษที่อุณหภูมิห้องโดยการผสมแคลเซียมออกไซด์แห้ง (CaO) จนถึงค่า pH ยก
7.0 ดำเนินการกับกวนอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 60 นาทีและปั่นแล้ว (15,000 ×กรัม, 15 นาที) เพื่อเอาตะกอน . CaO
ไฮโดรไลเซได้รับการรักษาที่ถูกชะล้างพิษต่อไปโดยการเพิ่ม 2% (w / v) ผงถ่านกับกวนอย่างต่อเนื่องที่อุณหภูมิห้องนาน
30 นาทีและไฮโดรไลพิษได้รับการกู้คืนโดยใช้เครื่องดูด
กรอง.
2.5 หมัก ofdetoxified ไฮโดรไล
2.5.1 จุลินทรีย์
P. stipitis NCIM-3499 ได้รับการจัดหาจากห้องปฏิบัติการแห่งชาติเคมี (NCL), Pune (อินเดีย) สำหรับการศึกษาในปัจจุบัน มันได้รับการปลูกฝัง
ในสื่อที่มีวุ้น (g / l); ไซโล 20 ยีสต์สกัด 3.0, มอลต์
สกัด 3.0, เปปโตน 5.0, วุ้น 20 ที่ pH 5.0 และอุณหภูมิ 30 ◦C.
การเก็บรักษาวัฒนธรรม slants วุ้นและเก็บรักษาไว้ที่ 4 ◦C.
ตารางที่ 1
การปรับสภาพกรดเจือจางของขยะกระดาษแข็งที่มีแตกต่างกัน: อัตราส่วนสภาพคล่อง.
อัตราส่วนบาท TRS (g / l) ไซโล (g / l) Phenolics (%)
1: 8 ± 2.88 0.133 0.422 0.021 0.016 ±± 0.001
01:10 3.27 ± 0.162 0.759 ± 0.039 0.022 0.001 ±
2.74 ± 01:12 0.164 0.432 0.032 0.017 ±± 0.002
01:14 2.34 ± 0.117 0.347 0.021 0.014 ±± 0.001
ตารางที่ 2
การปรับสภาพกรดเจือจางเศษกระดาษที่มีเวลาการเกิดปฏิกิริยาที่แตกต่างกัน.
เวลา (ชั่วโมง) TRS (g / l) ไซโล (g / l) Phenolics ( %)
1 ชั่วโมง± 1.022 0.042 0.514 ± 0.022 0.012 0.001 ±
2 ชั่วโมง± 2.542 0.097 1.213 ± 0.032 0.017 0.001 ±
3 ชั่วโมง± 2.615 0.096 1.223 ± 0.030 0.019 0.001 ±
4 ชั่วโมง± 2.855 0.138 1.350 ± 0.029 0.036 0.002 ±
5 ชั่วโมง 3.187 ± 0.183 1.931 0.062 0.042 ±± 0.001
6 ชั่วโมง± 3.601 0.196 2.111 0.054 0.059 ±± 0.003
2.5.2 การหมัก
การหมักกรดไฮโดรไลพิษที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้ถังหมักบนม้านั่ง (5 ลิตรซาร์โทเรีย, เยอรมนี)
ไฮโดรไลกรด (10.79 กรัม / น้ำตาลลิตร) เสริมด้วย (g / l) NH4Cl
0.5 KH2PO4 2.0 MgSO4 · 7H2O 0.5 ยีสต์สกัด 1.5 CaCl2 · 2H2O 0.1,
FeCl3 · 2H2O 0.1, ZnSO4 · 7H2O 0.001 ได้รับเชื้อด้วย 10 % (v / v)
หัวเชื้อ OFP stipitis ที่ pH 5.0 และบ่มที่อุณหภูมิ 30 ◦C 150 รอบต่อนาที
ของการก่อกวน ค่า pH ของกลางที่ได้รับการปรับปรุงด้วย 2 ไม่มี HCl และ
2 ไม่มี NaOH ความเข้มข้นของออกซิเจนที่ละลายในน้ำได้รับการตรวจสอบอย่างต่อเนื่องตลอดทั้งกระบวนการโดยใช้หัววัดปริมาณออกซิเจนละลายน้ำและ
การไหลของอากาศ 0.4 ลิตร / นาทีถูกเก็บรักษาไว้ตลอดการศึกษา ตัวอย่างถูกถอนออกในช่วงเวลาปกติของ 4 ชั่วโมงและหมุนเหวี่ยงสำหรับ
15 นาที ใสถูกใช้ในการตรวจสอบและเอทานอล
ความเข้มข้นของน้ำตาลที่เหลือ.
2.6 วิธีการวิเคราะห์
ความเข้มข้นของน้ำตาลลดทั้งหมด (TRS), ฟีนอล
และเอทานอลเนื้อหาถูกกำหนดโดยใช้กรด dinitrosalicylic
(DNS) วิธีการ (มิลเลอร์, 1959) วิธี Folin-Ciocalteu (โทน
Orthofer และ Lamuela-Raventos, 1999) และกรด chromic วิธีการ
(Caputi, อุเอดะและบราวน์, 1968) ตามลำดับ ความเข้มข้นไซโลสที่ได้รับการประเมินโดยวิธี P-bromoaniline (บาลา et al., 2004).
2.7 ภาพมุมกว้าง diffractions X-ray (WAXDs)
WAXDs ของกลุ่มตัวอย่างที่เป็นของแข็งที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้ Bruker AXS D8
ล่วงหน้าผงมาตรการเลี้ยวเบนรังสีเอกวิสคอนซินสหรัฐอเมริกากับ Cu
K? เป้าหมาย.
2.8 การวิเคราะห์ทางสถิติ
การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าและผลที่
ได้แสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัตถุดิบกระดาษ
ของเสียรวบรวมจากโรงงานกระดาษและ ofcellulose
กองกระดาษ สถาบันวิจัยป่าไม้ dehra Dun ( อินเดีย )
กระดาษที่ถูกประมวลผลโดยใช้หุบเขาหมี ( vally เหล็ก
Co . , แอปเปิล , WI , USA ) ที่อุณหภูมิห้อง defiberization
ofpulp และการผลิต เยื่อกระดาษเป็นอากาศแห้งและผงในวิลลี่ โรงสี
( A . gallenkamp จำกัดลอนดอน ) ขนาด 60 mesh . วัสดุผงที่ใช้สำหรับการศึกษา
.
2.2 . ระบบการวิเคราะห์องค์ประกอบ
องค์ประกอบของขยะกระดาษใช้ holocellulose เพนโตแซน น้ำและความชื้น , เถ้าดังต่อไปนี้โปรโตคอล Tappi
.
2.3 กรดเจือจางก่อน
เงื่อนไขสำหรับการเจือจางกรดกระดาษเหลือใช้เป็น
เหมาะโดยแปรอัตราส่วน 1 : 8 - 1 : 14 ของแข็ง / ของเหลว ,การรักษาเวลา
01 – 06 H , และกรดซัลฟูริคความเข้มข้น 0.005 - 1.00 ใน 1.0 L
ปฏิกิริยาเรือที่ 120 ◦ C ในหม้อนึ่งความดัน . กรด hydrolyzates
หลังจากรักษาหายโดยการกรองผ่านสองชั้น
ผ้ามัสลิน . การ hydrolyzate ของเหลวกรองใช้รวม
ลดน้ำตาล , ไซโลส และโพลีฟีนอลออก .
2.4 . การล้างพิษ ofacid hydrolyzate
กรด hydrolyzate ofwaste กระดาษ detoxified ที่อุณหภูมิห้อง โดยผสม แคลเซียมออกไซด์ ( CaO ) แห้งจนถึง pH ขึ้น

( เริ่มกวนอย่างต่อเนื่อง นาน 60 นาที แล้วระดับ ( 15 , 000 × G , 15 นาที ) เพื่อกำจัดตะกอน โจโฉ
hydrolyzate ถือว่าเป็นอีก detoxified โดยเพิ่ม 2 % ( w / v ) ถ่านอย่างต่อเนื่องกับกวนที่อุณหภูมิห้อง
30 นาที และ detoxified hydrolyzate ถูกกู้คืนโดยใช้การกรองสูญญากาศ
.
2.5 การหมัก ofdetoxified hydrolyzate
ดาวน์โหลด .
P . stipitis จุลินทรีย์ ncim-3499 คือ procured จากห้องปฏิบัติการเคมีแห่งชาติ ( NCL ) , อินเดีย ( อินเดีย ) ในการศึกษาปัจจุบัน มันปลูก
บนอาหารวุ้นที่ประกอบด้วย ( กรัม / ลิตร ) ; B 20 , สารสกัดจากยีสต์ สารสกัดจากมอลต์
3.0 , 3.0 , เปปโตน 5.0 , วุ้น 20 ที่ pH 50 และอุณหภูมิ 30 C .
◦รักษาวัฒนธรรมบนอาหารวุ้น slants และเก็บรักษาไว้ที่ 4 ◦ C .

โต๊ะ 1 กรดเจือจาง pretreatment เศษกระดาษที่มีของแข็ง : อัตราส่วนสภาพคล่อง อัตราส่วนนํ้า TRS
( g / l ) B ( g / l ) โพลีฟีนอล ( % )
1 : 8 ) ± 0.133 0.422 ± 0.016 0.021 ± 0.001
1 : 10 3.27 ± 0.162 0.759 ± 0.039 0.022 ± 0.001
1 : 12 2.74 ± 0.164 0.432 ± 0.032 0.017 ± 0.002
1 : 14 2.34 ± 0.117 0.347 ± 0.021 ตามลำดับซึ่ง± 0001
2 โต๊ะ
กรดเจือจางนำเศษกระดาษกับปฏิกิริยาที่แตกต่างกัน .
( H ) TRS ( g / l ) B ( g / l ) โพลีฟีนอล ( % )
1 H 1.022 ± 0.042 ร่วม± 0.022 0.012 ± 0.001
2 H 2.542 ± 0.097 0.032 ± 607 ±น้อยกว่า 0.001
3 H 2.615 ± 0.096 570 ± 0.030 0.019 ± 0.001
4 H 2.855 ± 0.138 1.350 ± 0.029 0.036 ± 0.002
5 H 3.187 ± 0.183 1.931 ± 0.062 0.042 ± 0.001
6 H 3.601 ± 0.196 2.111 ± 0.054 0059 ± 0.003
งานวาง . หมัก
การหมักของ detoxified กรด hydrolyzate ได้ดำเนินการโดยใช้ถังด้านบนม้านั่ง ( 5 ลิตร sartorius , เยอรมัน )
กรด hydrolyzate ( 10.79 กรัม / ลิตรที่เติมน้ำตาล ) ( กรัม / ลิตร ) 4 .
0 kh2po4 2.0 MgSO4 ใด้วยสารสกัดจากยีสต์ 7h2o 0.5 , 1.5 , CaCl2 ด้วย 2H2O-dx 0.1
FeCl3 ด้วย 2H2O-dx 0.1 znso4 ด้วย 7h2o 0.001 เป็นเชื้อที่มี 10% ( v / v )
3 p . stipitis ที่ pH 50 และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส ◦ 150 รอบต่อนาที
ของการกวน พีเอชของอาหารปรับ 2 n
2 N HCl และ NaOH ออกซิเจนละลายน้ำความเข้มข้นคือการตรวจสอบอย่างต่อเนื่องตลอดทั้งกระบวนการที่ใช้ออกซิเจนและการไหลของอากาศเครื่อง
4 L / min เป็นรักษาตลอดการศึกษา ตัวอย่างที่ถูกถอนในช่วงปกติของไฟฟ้าสำหรับ
4 ชั่วโมง 15 นาทีศึกษาโดยนำเอทานอลและน้ำตาล

เหลือความเข้มข้น 2.6 วิธีการวิเคราะห์
ความเข้มข้นของการลด total sugars ( TRS ) ปริมาณฟีนอลและเอทานอลใช้วิเคราะห์

dinitrosalicylic กรด ( DNS ) วิธีการ ( มิลเลอร์ , 1959 ) , folin –วิธีการ ciocalteu ( ฌอน แอสติน orthofer
, , & lamuela raventos , 1999 ) และกรด chromic )
( caputi อุเอดะ & , บราวน์1968 ) ตามลำดับ ส่วน B ความเข้มข้นประมาณโดยวิธี p-bromoaniline ( บาลา et al . , 2004 ) .
2.7 . มุมกว้าง x - เรย์ diffractions ( waxds )
waxds ตัวอย่างที่เป็นของแข็งที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้ BRUKER ขวาน d8
เอ็กซ์เรย์ดิฟแฟรกโทมิเตอร์ล่วงหน้าผง วิสคอนซิน สหรัฐอเมริกา กับทองแดง
K  เป้าหมาย .
2.8 . สถิติวิเคราะห์
การทดลองทั้งหมดมีการปฏิบัติทั้งสามใบและผล
จะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน±