1. การย่อยสารตัวอย่าง
-ซื้อนมผงจากตลาดมา 3 ประเภท คือ สำหรับเด็กทารก เด็ก 6เดือน-1ปี และเด็ก 1 ปีขึ้นไป แต่ละประเภทซื้อมา 3 ยี่ห้อ แบ่งนมเป็น 9 ส่วน โดยชั่งน้ำหนักแต่ละส่วนให้มีจำนวน 1. XXXXกรัม นำตัวอย่างนมผงทำการเติม 30 % ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์2 มิลลิลิตร และ 65 % กรดไนตริก8 มิลลิลิตร ใส่ลงในภาชนะสำหรับย่อยตัวอย่างของเครื่องไมโครเวฟไดเจสท์ชัน
-ซื้อนมสเตอริไรต์จากตลาดมา 2 ประเภท แต่ละประเภทซื้อมา 1 ยี่ห้อ แบ่งนมเป็น 2 ส่วน ใช้ตัวอย่างนม 50 ml ได้เนื้อนมเป็น 5. XXXXกรัม นำตัวอย่างนมสเตอริไรต์ทำการเติม 30 % ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์1 มิลลิลิตร และ 65 % กรดไนตริก7 มิลลิลิตร ใส่ลงในภาชนะสำหรับย่อยตัวอย่างของเครื่องไมโครเวฟไดเจสท์ชัน
- นำตัวอย่างที่ผ่านการย่อยด้วยเครื่องไมโครเวฟไดเจสท์ชัน เติม 0.1 M ปริมาตร 8 มิลลิลิตร ของโซเดียมคาร์บอเนต แคลเซียมคาร์บอเนต แมกนีเซียมคาร์บอเนต
- ทำการกรองสารละลายและปรับพีเอชให้อยู่ในช่วง 4.50±0.05 โดยเติมแอมโมเนีย ในกรณีที่เป็นกรด หรืออะซิติก/บัฟเฟอร์อะซิเตท ในกรณีที่เป็นเบส ใช้ pH-meter ทุกครั้งในการวัดค่า pH
- แบ่งตัวอย่าง เตรียมทำการวิเคราะห์สารตัวอย่างในขั้นตอนที่ 3 และการวิเคราะห์ spiked sampleในขั้นตอนที่ 4
2. การเตรียมสารละลายมาตรฐาน
2.1 เตรียม Stock solution ของกรด 3-ไฮดรอกซี-2-แนฟทาลีนคาร์บอกซิลิก ความเข้มข้น 0.0001 M ปรับให้มีปริมาตร 250 มิลลิลิตร โดย 50%เมทานอล
2.2 เตรียม Stock solution ของอะลูมิเนียมที่ความเข้มข้น 0.003 M จากสารเชิงซ้อนอะลูมิเนียม (III) ไนเตรตโนนะไฮเดรตโดยทำปฏิกิริยากับกรด 3-ไฮดรอกซี-2-แนฟทาลีนคาร์บอกซิลิก ความเข้มข้น 0.0001 M โดยใช้น้ำ DI และ 50% เมทานอลเป็นตัวทำละลาย
2.3 พีเอชที่มีค่าสูงสุดอยู่ในช่วง 4.50±0.05 นำไปใช้สำหรับการวัดปริมาณของสารตัวอย่างต่อไป
2.4 การ standardized อะลูมิเนียม
2.4.1 ปิเปตต์อะลูมิเนียมจาก Stock solution 5.00 มิลลิลิตร ลงในขวดเชิงปริมาตรขนาด 10.00 มิลลิลิตร ปรับพีเอชอยู่ในช่วง 4.50±0.05 โดยใช้ 0.1 M ของอะซิติก/บัฟเฟอร์อะซิเตท 1 มิลลิลิตร
2.4.2 เติม 0.0001 M ของกรด 3-ไฮดรอกซี-2-แนฟทาลีนคาร์บอกซิลิก 1 มิลลิลิตร ปรับปริมาตรด้วย50% เมทานอล จนถึงขีดบอกปริมาตร เขย่าเป็นเวลา 10 นาที เพื่อให้แน่ใจว่าเกิดสารประกอบเชิงซ้อน
2.4.3 นำไปวัดค่าความเข้มแสงโดยเครื่องฟลูออโรมิเตอร์ที่ λ excitation 366 นาโนเมตรและemission 460 นาโนเมตร
3. การวิเคราะห์สารตัวอย่าง
3.1 ปิเปตต์สารละลายตัวอย่างนมในแต่ละส่วน ส่วนละ 10 มิลลิลิตร ใส่ขวดวัดปริมาตรขนาด 25 มิลลิลิตร เติม 0.0001 M ของกรด 3-ไฮดรอกซี-2-แนฟทาลีนคาร์บอกซิลิก ให้มีปริมาณมากเกินพอ เขย่าเป็นเวลา 10 นาที เพื่อให้เกิดสารประกอบเชิงซ้อนอย่างสมบูรณ์
3.2 ปรับพีเอชให้อยู่ในช่วง 4.50±0.05 โดยใช้ 0.1 M ของอะซิติก/บัฟเฟอร์อะซิเตท 1 มิลลิลิตร และปรับปริมาตรด้วย 50 % เมทานอล ให้มีปริมาตร 25.00 มิลลิลิตร
3.3 นำตัวอย่างนมผงและนมสเตอริไรต์ 11 ส่วน มาวัดความเข้มแสงโดยเครื่องฟลูออโรมิเตอร์ ที่ λ excitation 366 นาโนเมตรและemission 460 นาโนเมตร
4. การวิเคราะห์ spiked sample
4.1 นำสารละลายตัวอย่างนมผงและนมสเตอริไรต์ 11 ส่วน ทำ Spike Standard Addition Method ปิเปตต์นมตัวอย่างละ 10 ml ใส่ขวดวัดปริมาตรขนาด 25 มิลลิลิตร
4.2 ปิเปตต์เติม Stock solution ของกรด 3-ไฮดรอกซี-2-แนฟทาลีนคาร์บอกซิลิก ความเข้มข้น 0.0001 M 10 มิลลิลิตร ปิเปตต์ standardized อะลูมิเนียม ที่มีความเข้มข้น 27 ไมโครกรัมต่อลิตร (ppb) เท่ากับ 750 ul ปรับปริมาตรด้วย 50%เมทานอล ให้มีปริมาตร 25 มิลลิลิตร เขย่าเป็นเวลา 10 นาที
4.3 นำไปวัดค่าความเข้มแสงโดยวิธีทางสเปกโทรฟลูออโรเมตริก โดยการวัดความเข้มแสงโดยเครื่องฟลูออโรมิเตอร์ ที่ λ excitation 366 นาโนเมตรและemission 460 นาโนเมตร
4.4 บันทึกผล คำนวณหา % recovery (เกณฑ์การยอมรับ 90-100%)