RNA isolation Total RNA from mouse

RNA isolation
Total RNA from mouse MSCs, which using growth factor induction to the neuronal differentiation was extracted by using the TRI reagent (Molecular Research Center, Inc.; see appendix C). Reverse transcription was performed by using ThermoScriptTMRT-PCR System (Invitrogen) and identified genes expression by PCR was performed by using Platinum®Taq DNA Polymerase. Total RNA were extracted by RNeasy mini kit (Qiagen, Chatworth, CA, USA) according to the instruction of manufacturer. The kit combines the selective binding properties of a silica-based membrane with the speed of microspin technology. Briefly, kidney tissues were first lysed and homogenized in the presence of a highly denaturing guanidine-thiocyanate containing buffer, which immediately inactivates RNases to ensure purification of intact RNA. Ethanol was added to provide appropriate binding conditions, and the sample was then applied to an RNeasy Mini spin column, where the total RNA binds to the membrane and contaminants were efficiently washed away. High-quality RNA was then eluted in 35 ul water and stored at - 70o c.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกอาร์เอ็นเอ รวมอาร์เอ็นเอจากเมาส์ MSCs ใช้เหนี่ยวนำปัจจัยการเจริญเติบโตเพื่อสร้างความแตกต่าง neuronal ถูกสกัด โดยใช้รีเอเจนต์ตรี (โมเลกุลวิจัยศูนย์ Inc. ดูภาคผนวก C) ทำย้อนหลัง transcription โดยใช้ระบบ ThermoScriptTMRT PCR (Invitrogen) และทำการระบุยีนนิพจน์ โดย PCR โดยใช้แพลทินัม® Taq DNA พอลิเมอเรส อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัด โดย RNeasy มินิชุด (Qiagen, Chatworth, CA, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ชุดรวมรวมงานคุณสมบัติของเมมเบรนที่ใช้ซิลิกากับความเร็วของเทคโนโลยี microspin สั้น ๆ เนื้อเยื่อไตได้ก่อน lysed ก homogenized เป็นกลุ่มในต่อหน้าของสูง denaturing guanidine thiocyanate มีบัฟเฟอร์ ที่ยกเลิกเรียก RNases เพื่อทำให้บริสุทธิ์ของอาร์เอ็นเอที่เหมือนเดิมทันที เอทานอลได้เพิ่มการให้เงื่อนไขผูกพันที่เหมาะสม และตัวอย่างนำมาใช้แล้วที่คอลัมน์หมุนตัว RNeasy Mini ซึ่งรวมอาร์เอ็นเอ binds ไปยังเมมเบรนและสารปนเปื้อนได้อย่างมีประสิทธิภาพน้ำ อาร์เอ็นเอมีคุณภาพสูงได้แล้ว eluted 35 ul น้ำ และเก็บไว้ที่ - 70o c

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แยก RNA
RNA รวม MSCs เมาส์ซึ่งใช้การเหนี่ยวนำปัจจัยการเจริญเติบโตที่จะสร้างความแตกต่างของเซลล์ประสาทที่ถูกสกัดโดยใช้น้ำยา TRI (โมเลกุลศูนย์วิจัย Inc .; ดูภาคผนวก C) ถอดความย้อนกลับได้รับการดำเนินการโดยใช้ระบบ ThermoScriptTMRT-PCR (Invitrogen) และระบุการแสดงออกของยีนโดยวิธี PCR ได้รับการดำเนินการโดยใช้ดีเอ็นเอPlatinum®Taqโพลิเมอร์ อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดย RNeasy มินิชุด (Qiagen, Chatworth, CA, USA) ตามคำสั่งของผู้ผลิต ชุดรวมคุณสมบัติในการจับการคัดเลือกของเมมเบรนซิลิกาตามด้วยความเร็วของเทคโนโลยี microspin สั้น ๆ เนื้อเยื่อไตถูก lysed แรกและหดหายในการปรากฏตัวของ denaturing สูง guanidine-thiocyanate มีบัฟเฟอร์ซึ่งทันที inactivates RNases เพื่อให้แน่ใจว่าการทำให้บริสุทธิ์ของอาร์เอ็นเอเหมือนเดิม เอทานอลได้ถูกเพิ่มเข้าไปให้เงื่อนไขผูกพันเหมาะสมและตัวอย่างถูกนำไปใช้แล้วเพื่อ RNeasy คอลัมน์หมุนมินิที่ RNA ทั้งหมดผูกกับเยื่อหุ้มเซลล์และสารปนเปื้อนถูกล้างออกไปได้อย่างมีประสิทธิภาพ อาร์เอ็นเอที่มีคุณภาพสูงได้รับการชะแล้วในน้ำ 35 ยูและเก็บไว้ที่ - 70 ° C

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอแยก
อาร์เอ็นเอทั้งหมดจากงานเมาส์ ซึ่งใช้ปัจจัยการเจริญเติบโตในการเหนี่ยวนำและถูกสกัดโดยใช้ไตร Reagent ( โมเลกุลศูนย์วิจัย , Inc ; ดูภาคผนวก C ) ถอดความย้อนกลับได้โดยใช้ระบบ PCR thermoscripttmrt ( Invitrogen ) และการระบุยีนที่แสดงออกโดยวิธี PCR โดยใช้ DNA polymerase ใช้แพลทินัม®ได้ดี .อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยมินิชุด rneasy ( เพิ่ม chatworth , CA , USA ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ชุดรวมการรวมคุณสมบัติของเยื่อแผ่นซิลิกาที่ใช้กับความเร็วของ microspin เทคโนโลยี สั้นเนื้อเยื่อไตเป็นครั้งแรก และโฮโม lysed ต่อหน้าอย่างี่กัวนิดีนไธโอไซยาเนตที่มีบัฟเฟอร์ซึ่งทันที inactivates rnases ให้บริสุทธิ์ครบถ้วน RNA เอทานอลที่ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อให้เงื่อนไขผูกพันที่เหมาะสม และตัวอย่างที่ได้ จากนั้นได้ใช้คอลัมน์ขนาดเล็กหมุน rneasy ที่อาร์เอ็นเอทั้งหมดจับกับเยื่อหุ้มและสารปนเปื้อน ) มีประสิทธิภาพล้างเก็บ RNA ที่มีคุณภาพสูงแล้ว ตัวอย่างใน 35 UL น้ำและเก็บไว้ที่ - 70o
C