Experiment 1. To determine if diet was the primary factor underlying
male Vg production, an experiment was undertaken to assess the
effect of fasting on Vg production in male tilapia. Sexually mature
males were either fed commercial trout diet at 4% body weight daily
(control) or fasted for 4 weeks; plasma and liver were sampled from 6
fish per treatment at weeks 0, 1, 2, and 4. Fish were anesthetized with
tricaine methanosulfonate (MS-222, Argent Chemical Laboratories,
Redmond,WA, 0.5 g/L) neutralized with NaHCO3 (0.5 g/L), and blood
was collected from the caudal vessels using a heparinized syringe
(200U/mL, lithium heparin, Sigma). Plasma was collected by
centrifugation at 10,000g for 10 min and stored at −80 °C. After
bleeding, fish were decapitated and a sample of liver placed in Tri-
Reagent (Molecular Research Center, Cincinnati, OH, USA) and stored
at−80 °C until RNA isolation for analysis of gene expression by rtqRTPCR,
as described below. Plasma Vg levels were estimated by an
enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on Denslow et al.
(1999) and modified by Davis et al. (2007).
Experiment 1. To determine if diet was the primary factor underlyingmale Vg production, an experiment was undertaken to assess theeffect of fasting on Vg production in male tilapia. Sexually maturemales were either fed commercial trout diet at 4% body weight daily(control) or fasted for 4 weeks; plasma and liver were sampled from 6fish per treatment at weeks 0, 1, 2, and 4. Fish were anesthetized withtricaine methanosulfonate (MS-222, Argent Chemical Laboratories,Redmond,WA, 0.5 g/L) neutralized with NaHCO3 (0.5 g/L), and bloodwas collected from the caudal vessels using a heparinized syringe(200U/mL, lithium heparin, Sigma). Plasma was collected bycentrifugation at 10,000g for 10 min and stored at −80 °C. Afterbleeding, fish were decapitated and a sample of liver placed in Tri-Reagent (Molecular Research Center, Cincinnati, OH, USA) and storedat−80 °C until RNA isolation for analysis of gene expression by rtqRTPCR,as described below. Plasma Vg levels were estimated by anenzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on Denslow et al.(1999) and modified by Davis et al. (2007).
การแปล กรุณารอสักครู่..

1. การทดสอบการตรวจสอบว่าอาหารที่เป็นปัจจัยหลักพื้นฐาน
การผลิต Vg ชายทดลองดำเนินการในการประเมิน
ผลกระทบของการอดอาหารในการผลิต Vg ในปลานิลเพศชาย ทางเพศสัมพันธ์เป็นผู้ใหญ่
เพศชายมีทั้งเลี้ยงอาหารปลาเทราท์ในเชิงพาณิชย์ที่น้ำหนักตัว 4% ทุกวัน
(ควบคุม) หรืออดอาหารเป็นเวลา 4 สัปดาห์; พลาสม่าและตับได้รับตัวอย่างจาก 6
ปลาต่อการรักษาที่สัปดาห์ที่ 0, 1, 2 และ 4. ปลาจะถูกวางยาสลบกับ
tricaine methanosulfonate (MS-222, เงินห้องปฏิบัติการเคมี
Redmond, WA, 0.5 กรัม / ลิตร) เป็นกลางกับ NaHCO3 (0.5 กรัม / ลิตร) และเลือด
ถูกเก็บรวบรวมจากเรือหางโดยใช้เข็มฉีดยา heparinized
(200U / mL, เฮลิเธียม, Sigma) พลาสม่าที่ถูกเก็บรวบรวมโดย
การหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g เป็นเวลา 10 นาทีและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส หลังจากที่
มีเลือดออก, ปลาหัวและตัวอย่างของตับวางไว้ใน Tri-
Reagent (โมเลกุลศูนย์วิจัย Cincinnati, OH, USA) และเก็บไว้
ที่ 80 องศาเซลเซียสจนแยก RNA สำหรับการวิเคราะห์การแสดงออกของยีนโดย rtqRTPCR,
ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง ระดับพลาสม่า Vg ถูกประเมินโดย
เอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบอิมมูโน (ELISA) ตาม Denslow et al.
(1999) และการแก้ไขโดยเดวิสและคณะ (2007)
การแปล กรุณารอสักครู่..

การทดลองที่ 1 เพื่อตรวจสอบว่าอาหารเป็นปัจจัยหลักในการผลิตต้นแบบ
2 ชาย การทดลองมีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาผลของการอดอาหารในการผลิต VG ในเพศชาย ปลานิล ผู้ใหญ่เพศชาย ถ้าเลี้ยงปลาเทราท์
โฆษณาอาหารที่ 4 % น้ำหนักตัวทุกวัน
( ควบคุม ) หรืออดอาหารเป็นเวลา 4 สัปดาห์ ในพลาสมาและตับจำนวน 6
ปลาต่อ การรักษาในสัปดาห์ที่ 0 , 1 , 2 และ 4ปลาถูกวางยาสลบด้วย
tricaine methanosulfonate ( ms-222 หนังสือเคมี , ห้องปฏิบัติการ
Redmond , WA , 0.5 g / l ) เป็นกลางด้วยโซเดียมไบคาร์บอเนต ( 0.5 กรัมต่อลิตร ) และเลือด
รวบรวมจากกลุ่มเรือหาง ใช้เข็ม
( 200u / ml เฮลิเธียม , Sigma ) พลาสมาการศึกษาโดย
3 ที่ 10000g 10 นาทีและอุณหภูมิ− 80 องศา หลังจาก
เลือดออก ,ปลาถูกตัดหัว และตัวอย่างของตับอยู่ใน Tri -
3 ( โมเลกุลศูนย์วิจัย Cincinnati , โอ้ , USA ) และเก็บไว้
ที่− 80 °องศาเซลเซียสจนอาร์เอ็นเอแยกวิเคราะห์การแสดงออกของยีนโดย rtqrtpcr
, ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง ระดับพลาสมาประมาณ 2 โดย
enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) ตาม denslow et al .
( 1999 ) และแก้ไขโดย Davis et al . ( 2007 )
การแปล กรุณารอสักครู่..
