In yeast the use of rhodamine 123 (

In yeast the use of rhodamine 123 (Rh123) has been restricted to the
evaluation of mitochondrial respiratory function including the discrimination
between respiratory-competent and -deficient cells. This study describes the
optimization and validation of a low-concentration Rh123 staining protocol for
the flow-cytometric assessment of mitochondrial membrane potential (∆Ψm)
changes in whole yeast cells. The optimized protocol was validated by the use
of compounds that specifically affect mitochondrial energetics.
Epifluorescence microscopy was used to monitor Rh123 distribution within the
cell. Incubation of yeast cell suspensions with Rh123 (50 nM, 10 min) gave
minimal non-specific binding and cytotoxicity of the dye. The ratio (R) between
the green fluorescence and forward scatter (both measured as log values) was
used to measure ∆Ψm with only little dependence on cell ‘volume ’ and
mitochondrial concentration. Cells treated with mitochondrial membrane deor
hyper-polarizing agents displayed a decrease and an increase of R values
respectively, indicating that changes of the Rh123 distribution in cells indicate
variations in the ∆Ψm. Live and dead cells also displayed significantly different
R values. The method described here allows assessment of ∆Ψm changes in
whole yeast cells in response to a given drug. Moreover, the relationship
between drug effects and disorders of mitochondrial energetics might be
addressed.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในยีสต์ ใช้ rhodamine 123 (Rh123) มีการจำกัดการประเมินการหายใจ mitochondrial รวมถึงการเลือกปฏิบัติระหว่างเซลล์หายใจอำนาจ และ - ขาดสาร การศึกษานี้อธิบายการเพิ่มประสิทธิภาพและการตรวจสอบของ Rh123 ความเข้มข้นต่ำที่โพรโทคอลสำหรับการย้อมสีประเมินกระแส cytometric ของ mitochondrial เยื่ออาจ (∆Ψm)การเปลี่ยนแปลงในเซลล์ยีสต์ทั้งหมด โพรโทคอลให้เหมาะถูกตรวจสอบ โดยใช้สารที่มีผลต่อพลัง mitochondrial โดยเฉพาะEpifluorescence microscopy ถูกใช้เพื่อตรวจสอบการกระจาย Rh123 ภายในเซลล์ บ่มพักเซลล์ยีสต์ด้วย Rh123 (50 nM, 10 นาที) ให้น้อยที่สุดไม่ใช่เฉพาะผูกและ cytotoxicity ย้อม อัตราส่วน (R) ระหว่างfluorescence สีเขียวและกระจายไปข้างหน้า (ทั้งสองวัดเป็นค่าล็อก)ใช้วัด ∆Ψm มีเพียงเล็กน้อยพึ่งพาเซลล์ 'ระดับเสียง' และสมาธิ mitochondrial รับเซลล์เมมเบรน mitochondrial deorไฮเปอร์ polarizing ตัวแทนแสดงการลดลงและการเพิ่มขึ้นของค่า Rตามลำดับ บ่งชี้ว่า การเปลี่ยนแปลงการกระจาย Rh123 ในเซลล์ระบุรูปแบบในการ ∆Ψm อาศัยอยู่ และเซลล์ที่ตายแล้วยังแสดงแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญค่า R วิธีการอธิบายไว้ที่นี่ให้ราคาประเมินของ ∆Ψm การเปลี่ยนแปลงในเซลล์ยีสต์ทั้งหมดในการตอบสนองยาที่กำหนด นอกจากนี้ ความสัมพันธ์ผลกระทบของยาเสพติดและความผิดปกติของ mitochondrial พลังอาจอยู่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการใช้งานของยีสต์ rhodamine 123 (Rh123) ได้รับการ จำกัด
ให้การประเมินผลการทำงานของระบบทางเดินหายใจรวมทั้งการเลือกปฏิบัติยลระหว่างทางเดินหายใจ-อำนาจและเซลล์
-deficient การศึกษาครั้งนี้จะอธิบายถึงการเพิ่มประสิทธิภาพและการตรวจสอบของความเข้มข้นต่ำ Rh123 โปรโตคอลการย้อมสีสำหรับการประเมินการไหลcytometric ศักยภาพของเมมเบรนยล (ΔΨm) การเปลี่ยนแปลงในเซลล์ยีสต์ทั้ง โปรโตคอลที่ดีที่สุดได้รับการตรวจสอบโดยการใช้สารที่เฉพาะส่งผลกระทบต่อ energetics ยล. กล้องจุลทรรศน์ Epifluorescence ถูกใช้ในการตรวจสอบการกระจาย Rh123 ภายในเซลล์ บ่มเพาะของสารแขวนลอยเซลล์ยีสต์กับ Rh123 (50 นาโนเมตร 10 นาที) ให้น้อยที่สุดไม่เฉพาะเจาะจงผูกพันและความเป็นพิษของสีย้อม อัตราส่วน (R) ระหว่างเรืองแสงสีเขียวและกระจายไปข้างหน้า (ทั้งวัดค่า log) ที่ถูกใช้ในการวัดΔΨmมีการพึ่งพาอาศัยกันเพียงเล็กน้อยในเซลล์ปริมาณและความเข้มข้นยล เซลล์รับการรักษาด้วยเมมเบรนยล deor ตัวแทนไฮเปอร์ polarizing แสดงลดลงและการเพิ่มขึ้นของค่า R ตามลำดับแสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงของการกระจาย Rh123 ในเซลล์บ่งชี้ถึงการเปลี่ยนแปลงในΔΨm เซลล์ที่อยู่อาศัยและที่ตายแล้วยังแสดงที่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญค่า R วิธีการอธิบายที่นี่จะช่วยให้การประเมินการเปลี่ยนแปลงΔΨmในเซลล์ยีสต์ทั้งในการตอบสนองต่อยาที่กำหนด นอกจากนี้ความสัมพันธ์ระหว่างผลกระทบของยาเสพติดและความผิดปกติของ energetics ยลอาจจะมีการแก้ไข

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ยีสต์ใช้จาก 123 ( rh123 ) ถูก จำกัด เพื่อประเมินผลของการใช้ฟังก์ชัน

รวมถึงการแบ่งแยกระหว่างการหายใจและเชี่ยวชาญ - ขาดเซลล์ การศึกษานี้อธิบายการเพิ่มประสิทธิภาพและการตรวจสอบของ rh123
.
ความเข้มข้นต่ำรับการประเมินการไหลไหลผ่านเมมเบรนที่มีศักยภาพ ( ∆Ψ m )
การเปลี่ยนแปลงในเซลล์ยีสต์ทั้ง ที่เหมาะสมคือการตรวจสอบโดยใช้โปรโตคอล
สารประกอบที่เฉพาะมีผลต่อการ energetics .
/ epifluorescence ถูกใช้เพื่อตรวจสอบการกระจาย
rh123 ภายในเซลล์ การบ่มเพาะของสารแขวนลอยเซลล์ยีสต์กับ rh123 ( 50 nm , 10 นาที ) ให้น้อยที่สุด และไม่เฉพาะเจาะจงต่อ
มัดย้อม อัตราส่วนระหว่าง
( R )เรืองแสงสีเขียวและส่งต่อกระจาย ( ทั้งวัดเป็นบันทึกที่ใช้วัดค่า )
∆Ψ M กับการพึ่งพาน้อยเฉพาะในหมวด ' เซลล์ '
ล สมาธิ เซลล์ที่ได้รับการ deor ไฮเปอร์โพลา
เยื่อตัวแทนแสดงลดลงและการเพิ่มขึ้นของค่า r
ตามลำดับ แสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงของ rh123 กระจายในเซลล์ระบุ
การเปลี่ยนแปลงใน∆Ψเมตร อาศัยอยู่ และเซลล์ที่ตายแล้วยังแสดงคุณค่า
R แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ วิธีที่อธิบายไว้ที่นี่ จะช่วยให้ประเมินการเปลี่ยนแปลง∆Ψ M
ทั้งยีสต์เซลล์ในการตอบสนองเพื่อให้ยา นอกจากนี้ ความสัมพันธ์
ระหว่างยาผลและความผิดปกติของ mitochondrial พลังอาจจะ

ส่ง