The T111H CtrHb spectrum resulting

The T111H CtrHb spectrum resulting from the treatment (Fig. 3d) contains a multitude of hyperfine shifted lines with intensities suggesting a mixture of at least three species. The new predominant set of resonances corresponds to a major product accounting for ~60% of the sample. The inability for DT to reduce cyanomet T111H CtrHb completely under these NMR conditions can be seen from Supporting Information Fig. S15 and explains the second set of peaks, which corresponds to the cyanomet major heme orientational isomer of the starting material (~ 25%). Finally, a third set corresponds to a minor product that may be due to a different modification of the heme or DT-damaged protein. Notably, after treatment, peaks belonging to the minor cyanomet isomer of the T111H starting material have vanished. We therefore hypothesize that the primary product contains a covalent linkage between H111 and the heme 4-substituent in an orientation analogous to the minor isomer starting material. We refer to this product as T111H CtrHb-A4 (Supporting Information Fig. S20A).
Signals corresponding to heme methyl groups of T111H CtrHb-A4 are assigned on the basis of their high intensity and characteristic paramagnetic downfield 1H and upfield 13C shifts. DQF-COSY spectra reveal one vinyl and both propionate spin systems. Intra-heme NOEs between the 1-CH3 and 8-CH3, along with contacts between the heme 1- and 2-substituents indicate that the heme 2-vinyl group has remained intact (Supporting Information Fig. S17). Cyanomet T111H
CtrHb 1H-15N lr-HMQC data collected before and after DT treatment and compared with WT data indicate the presence of a peculiar imidazole system [52] in the T111H CtrHb-A4 product, exhibiting two downfield shifted 15N signals (at 250.6 and 220.7 ppm) J-coupled to a proton at 8.36 ppm, itself J-connected via TOCSY to a proton at 6.48 ppm. These resonances are attributed to H111 (Table 2). Restraints defining the position of the side chain include: H111 Hε1 to heme 3-CH3 and F48 Hζ and Hε,ε', and H111 Hδ2 to the heme 3-CH3 and V115 side chain methyls. Both H111 Hε1 and Hδ2 have shared NOEs (strong and weak, respectively) to a methyl group at 3.39 ppm, which is assigned to the modified heme 4-CβH3 group. Accordingly, a scalar connectivity is observed between the 4-CβH3 and a single proton at 6.15 ppm (Supporting Information Fig. S17) corresponding to the modified heme 4-CαH. This proton, like the 4-CβH3, is in dipolar contact with H111 Hε1. Although JHN-coupling between H111 15Nε2 and the newly produced 4-CβH3 or 4-CαH was not detected in the long-range data, the observed NOEs, heme methyl 1H chemical shift dispersion pattern [53], propionate shifts, and unusual H111 15N shifts are all consistent with modification occurring at H111 and the heme 4-substituent
(Supporting Information Fig. S20A)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คลื่น T111H CtrHb ที่เกิดจากการรักษา (Fig. 3d) ประกอบด้วยหลากหลาย hyperfine เปลี่ยนบรรทัด ด้วยการแนะนำการผสมพันธุ์สามน้อยปลดปล่อยก๊าซ ชุดของ resonances กันใหม่สอดคล้องกับบัญชีผลิตภัณฑ์หลัก ~ 60% ของตัวอย่าง ไม่สำหรับ DT ลด cyanomet T111H CtrHb ทั้งหมดภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ NMR สามารถมองเห็นจากฟิกข้อมูลสนับสนุน S15 และอธิบายชุดสองของยอดเขา ที่สอดคล้องกับหลัง orientational ของ heme หลัก cyanomet ของวัสดุเริ่มต้น (~ 25%) สุดท้าย ชุดที่สามตรงกับผลิตภัณฑ์ย่อยที่อาจเกิดจาก modification ต่าง ๆ ของ heme หรือ DT เสียโปรตีน ยวด หลังการรักษา ยอดของหลังรอง cyanomet ของ T111H เริ่มต้นวัสดุมีศาสดา เราจึง hypothesize ที่ผลิตภัณฑ์หลักประกอบด้วยการเชื่อมโยง covalent ระหว่าง H111 และ 4-substituent heme ในความคล้ายคลึงกับไอโซเมอร์รองที่วัสดุเริ่มต้น เราหมายถึงผลิตภัณฑ์นี้เป็น T111H CtrHb-A4 (สนับสนุนฟิกข้อมูล S20A) มีกำหนดสัญญาณที่สอดคล้องกับกลุ่ม methyl heme ของ T111H CtrHb A4 ตามความเข้มข้นสูงและลักษณะ paramagnetic downfield 1 H และกะ upfield 13 C โคซี่ DQF แรมสเป็คตราเปิดเผยไวนิลหนึ่งและทั้งสองระบบหมุน propionate อินทรา heme NOEs 1 CH3 และ 8-CH3 พร้อมกับติดต่อระหว่าง heme 1 - และ 2-substituents บ่งชี้ว่า กลุ่มไวนิล 2 heme มียังคง เหมือนเดิม (สนับสนุนข้อมูลฟิก S17) Cyanomet T111HCtrHb 1H-15N lr-HMQC data collected before and after DT treatment and compared with WT data indicate the presence of a peculiar imidazole system [52] in the T111H CtrHb-A4 product, exhibiting two downfield shifted 15N signals (at 250.6 and 220.7 ppm) J-coupled to a proton at 8.36 ppm, itself J-connected via TOCSY to a proton at 6.48 ppm. These resonances are attributed to H111 (Table 2). Restraints defining the position of the side chain include: H111 Hε1 to heme 3-CH3 and F48 Hζ and Hε,ε', and H111 Hδ2 to the heme 3-CH3 and V115 side chain methyls. Both H111 Hε1 and Hδ2 have shared NOEs (strong and weak, respectively) to a methyl group at 3.39 ppm, which is assigned to the modified heme 4-CβH3 group. Accordingly, a scalar connectivity is observed between the 4-CβH3 and a single proton at 6.15 ppm (Supporting Information Fig. S17) corresponding to the modified heme 4-CαH. This proton, like the 4-CβH3, is in dipolar contact with H111 Hε1. Although JHN-coupling between H111 15Nε2 and the newly produced 4-CβH3 or 4-CαH was not detected in the long-range data, the observed NOEs, heme methyl 1H chemical shift dispersion pattern [53], propionate shifts, and unusual H111 15N shifts are all consistent with modification occurring at H111 and the heme 4-substituent(Supporting Information Fig. S20A)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ t111h ctrhb สเปกตรัมที่เกิดจากการรักษา ( รูปที่ 3 ) ประกอบด้วยความหลากหลายของไฮเปอร์ จึงไม่ขยับเส้นเข้มแนะนำส่วนผสมของอย่างน้อยสามชนิด ชุดเด่นใหม่ของ resonances กับบัญชีผลิตภัณฑ์หลักสำหรับ ~ 60% ของกลุ่มตัวอย่างไม่สามารถเปลี่ยนเพื่อลด cyanomet t111h ctrhb อย่างสมบูรณ์ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ คุณสามารถเห็นได้จากข้อมูลประกอบรูป S15 และอธิบายชุดสองยอด ซึ่งสอดคล้องกับหลัก cyanomet ฮีม orientational ไอโซเมอร์ของวัสดุเริ่มต้น ( ~ 25 % ) ในที่สุดชุดสามสอดคล้องกับผลิตภัณฑ์เล็กน้อย อาจเป็นเพราะการถ่ายทอดแตกต่างกัน Modi ของ heme หรือ DT ทำลายโปรตีน อย่างไรก็ตาม หลังจากการรักษายอดของผู้เยาว์ cyanomet ไอโซเมอร์ของวัสดุ t111h เริ่มหายไปดังนั้นเราจึงพบว่า ผลิตภัณฑ์หลักมีการเชื่อมโยงระหว่าง h111 โควา และท่าน 4-substituent ในทิศทางคล้ายคลึงกับผู้เยาว์เซ็นเตอร์ตั้งแต่วัสดุ เราเรียกผลิตภัณฑ์นี้เป็น t111h ctrhb-a4 ( สนับสนุนข้อมูลรูป
s20a )สัญญาณที่สอดคล้องกับฮีมเมทิลกลุ่ม t111h ctrhb-a4 จะถูกกำหนดบนพื้นฐานของความเข้มสูงและคุณสมบัติพาราแมกเนติกลงจึงละมั่ง 1H และ 13C จึงละมั่งกะของพวกเขา dqf-cosy Spectra เผยไวนิลและ propionate หมุนทั้งระบบ ไม่ท่านภายในระหว่าง 1-ch3 8-ch3 และ ,พร้อมกับการติดต่อระหว่างท่าน 1 - 2-substituents บ่งชี้ว่าท่าน 2-vinyl กลุ่มยังคงเหมือนเดิม ( สนับสนุนข้อมูลรูป s17 ) cyanomet t111h
ctrhb 1h-15n LR ได้เก็บรวบรวมข้อมูล ก่อนและหลังการรักษา และเปลี่ยนเมื่อเทียบกับข้อมูลโดยระบุสถานะของระบบ [ 52 ] อิมิดาโซลแปลกใน t111h ctrhb-a4 ผลิตภัณฑ์จัดแสดงสองลงจึงละมั่ง เปลี่ยนสัญญาณ ( ที่ 15 และ 250.6 220.7 ppm ) j-coupled กับโปรตอนที่ 8.36 ppm , ตัวเอง j-connected ผ่าน tocsy กับโปรตอนที่ 6.48 ppm เฮิรตซ์เหล่านี้เกิดจาก h111 ( ตารางที่ 2 ) เสพ de จึงหนิงตำแหน่งด้านโซ่ ได้แก่ h111 H ε 1 ฮีมและζ 3-ch3 f48 H และ H εε ' , และ h111 H δ 2 กับฮีมและ 3-ch3 v115 โซ่ข้าง methyls .ทั้ง h111 H ε 1 และ h δ 2 แบ่งเวร ( แข็งแรงและอ่อนแอ , ตามลำดับ ) ในกลุ่มเมทิลที่ 3.39 ppm ซึ่งถูกมอบหมายให้โมดิจึงเอ็ดฮีม 4-C บีตา H3 กลุ่ม ตาม , สเกลาร์การเชื่อมต่อสังเกตระหว่าง 4-C บีตา H3 และโปรตอนเดียวที่ 6.15 ส่วนในล้านส่วน ( ข้อมูลประกอบรูปที่ s17 ) สอดคล้องกับโมไดจึงเอ็ดฮีม 4-C αเอช โปรตอนนี้ เหมือน 4-C บีตา H3 ,อยู่ใน dipolar ติดต่อกับ h111 H ε 1 แม้ว่า jhn coupling ระหว่าง h111 15N ε 2 และผลิตใหม่ 4-C บีตา H3 หรือ 4-C α H ไม่พบในข้อมูลระยะไกล , การตรวจสอบไม่ฮีมเมทิล 1 , เคมีกะกระจายรูปแบบ [ 53 ] , propionate กะ และผิดปกติ h111 15 กะจะสอดคล้องกับการโมดิจึงเกิดขึ้นที่ h111 และท่าน 4-substituent
( ข้อมูลประกอบฟิคs20a )