Infected seedlings (typically 40 g)

Infected seedlings (typically 40 g) were harvested and crude haustoria prepared by sucrose density gradient centrifugation as described in Section 2.2. The haustoria resulting from this were washed in PBS and resuspended finally in 1 mL PBS. These were then separated into 250 L aliquots and precipitated using magnetic beads as follows.A50L suspension of magnetic beads charged with protein A was prepared separately for each 250 L haustoria aliquot: following the instruction of the manufacturer (Dynabeads, Life Technologies, Burlington, ON), the beads were decorated with donkey anti mouse-IgM--chain (Jackson Immuno Research) and the anti-haustoriamonoclonal IgM in tissue culture solution, and washed in PBS before use. Each 250 L haustoria aliquot was then mixed with 50 L decorated bead suspension and allowed to cross-react for 30 min at room temperature with end-over-end mixing. The beads were then captured with a rare-earth magnet and washed three times with PBS. Haustoria were released from the beads using 0.1Mglycine, pH 2.5. The quality of each preparation was assessed by microscopy by staining a 1 L sampling with calcofluorwhite and viewing it under a fluorescence microscope as described previously [18]. Haustoria were lyophilized and stored at –80°C until required.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต้นกล้าติด (ปกติ 40 กรัม) ถูกเก็บเกี่ยว และดิบ haustoria เตรียมหมุนเหวี่ยงไล่ระดับความหนาแน่นของน้ำตาลซูโครสในการสังเกต Haustoria จากนี้ล้างใน PBS และ resuspended ในที่สุดใน 1 มล. PBS เหล่านี้ถูกแยกออกแล้วเป็น aliquots 250 L และตกตะกอนโดยใช้ลูกปัดแม่เหล็กเป็นดังนี้ แขวนลูกปัดแม่เหล็กที่มีโปรตีน A A50L จัดเตรียมแยกต่างหากสำหรับแต่ละส่วนลงตัว haustoria 250 L: ตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Dynabeads ชีวิตเทคโนโลยี เบอร์ลิงตัน ON), ลูกปัดถูกตกแต่ง ด้วยลาป้องกันเมาส์ระบาดของโรค - โซ่ (Jackson Immuno วิจัย) และการระบาดของโรคป้องกัน haustoriamonoclonal ในเนื้อเยื่อ และล้างใน PBS ก่อนใช้ แต่ละส่วนลงตัว haustoria 250 L ถูก แล้วผสมกับ 50 L ตกแต่งลูกปัดระงับ และอนุญาตให้ cross-react 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องด้วยการผสมไปสิ้น ลูกปัดได้ถ่ายกับแม่เหล็กโลกหายากแล้ว และล้าง 3 ครั้ง ด้วย PBS Haustoria ถูกนำออกใช้จากลูกปัดที่ใช้ 0.1Mglycine ค่า pH 2.5 คุณภาพของแต่ละการเตรียมรับการประเมิน โดยไมโครสโคเปรอะเปื้อน 1 L สุ่มตัวอย่าง ด้วย calcofluorwhite และดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] Haustoria lyophilized และเก็บไว้ที่ –80 ° C จนกว่าจะจำเป็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ต้นกล้าที่ติดเชื้อ (ปกติ 40 กรัม) ได้รับการเก็บเกี่ยวและ haustoria น้ำมันดิบจัดทำขึ้นโดยการหมุนเหวี่ยงซูโครสความหนาแน่นของการไล่ระดับสีตามที่อธิบายไว้ในมาตรา 2.2 haustoria ที่เกิดจากการนี​​้ได้รับการล้างในพีบีเอสและ resuspended ในที่สุด 1 มิลลิลิตรพีบีเอส เหล่านี้ถูกแยกออกจากกันแล้วเป็น 250 aliquots L และเร่งให้เกิดการใช้ลูกปัดแม่เหล็ก follows.A50L ระงับของเม็ดแม่เหล็กเรียกเก็บเงินกับโปรตีนถูกจัดทำแยกต่างหากสำหรับแต่ละ 250 L haustoria หาร: ต่อไปนี้คำแนะนำของผู้ผลิต (Dynabeads เทคโนโลยีชีวิตเบอร์ลิงตัน, ON ), ลูกปัดที่ถูกตกแต่งด้วยลาต่อต้านเมาส์ IgM - โซ่ (แจ็คสัน Immuno วิจัย) และป้องกัน haustoriamonoclonal IgM ในการแก้ปัญหาการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อและล้างในพีบีเอสก่อนการใช้งาน แต่ละ 250 L haustoria หารได้รับการผสมแล้วกับ 50 L ระงับการตกแต่งลูกปัดและได้รับอนุญาตให้ข้ามตอบสนองเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องกับปลาย-over-ปลายผสม ลูกปัดถูกจับแล้วด้วยแม่เหล็กหายากของโลกและล้างสามครั้งกับพีบีเอส Haustoria รับการปล่อยตัวจากลูกปัดใช้ 0.1Mglycine ค่า pH 2.5 คุณภาพของแต่ละการเตรียมความพร้อมรับการประเมินโดยใช้กล้องจุลทรรศน์โดยการย้อมสีการสุ่มตัวอย่าง 1 ลิตรกับ calcofluorwhite และการดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] Haustoria ถูกแห้งและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ต้นกล้าติดเชื้อ ( ปกติ 40 กรัม ) เก็บดิบ haustoria เตรียมโดยการใช้ความหนาแน่น 3 ที่อธิบายไว้ในมาตรา 2.2 . การ haustoria ที่เกิดจากการล้างภาพนี้และในที่สุด resuspended 1 มิลลิลิตร PBS เหล่านี้แล้วแยกออกเป็น 250 L เฉยๆและตกตะกอนโดยใช้ลูกปัดแม่เหล็ก follows.a50l ระงับแม่เหล็กลูกปัดจับกับโปรตีนเป็นเตรียมแยกต่างหากสำหรับแต่ละ 250 ลิตร haustoria ส่วนลงตัว : ตามคำสั่งของผู้ผลิต ( dynabeads ชีวิต , เทคโนโลยี , Burlington ใน ) , ลูกปัดแต่งด้วย IgM anti เมาส์ลา -- โซ่ ( การวิจัย แจ็คสัน มมูโน ) และต่อต้าน haustoriamonoclonal IgM ในสารละลายโดยการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ และล้างใน PBS ก่อนใช้ แต่ละ 250 ลิตร haustoria ส่วนลงตัวแล้วผสมกับ 50 ผมประดับลูกปัด และได้รับอนุญาตให้ข้ามการตอบสนองสำหรับ 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องกับปลายเหนือสุดกวน ลูกปัดแล้วจับกับแม่เหล็กแผ่นดินหายากและล้างสามครั้งกับ PBS haustoria ถูกปล่อยตัวจากลูกปัดที่ใช้ 0.1mglycine pH 2.5 คุณภาพของแต่ละเตรียมประเมินด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยการย้อมสีผมด้วย 1 คน calcofluorwhite และดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 18 ] haustoria เป็นแห้งและเก็บไว้ที่ - 80 องศา C จนต้อง