Variation of DNA ConcentrationFigur

Variation of DNA Concentration


Figure 4: Effects of DNA concentration on cell-free expression. Results were obtained for concentrations of 0.02 µg/µl, 0.04 µg/µl, 0.06 µg/µl, 0.08 µg/µl, 0.1 µg/µl and a negative control without DNA. Validation was performed via luciferase assay and analyzed in a microplate reader.
After establishing the ideal concentration of Mg(OAc)2 in our reactions, we further investigated the optimal concentration of DNA template for increased expression. Again, pBESTlucTM was expressed to allow the analysis via luciferase assay in a microplate reader. Triplicates for reactions of 50 µl volumes were set up with amounts of DNA ranging from 0.02 µg to 0.1 µg, as well as a negative control without DNA. A luciferase assay was performed as described in protocols (figure 4+5).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของดีเอ็นเอรูปที่ 4: ผลของความเข้มข้นของดีเอ็นเอในเซลล์ฟรีนิพจน์ ผลลัพธ์ที่ได้รับสำหรับความเข้มข้น 0.02 µg/µl, 0.04 µg/µl, 0.06 µg/µl, 0.08 µg/µl, 0.1 µg/µl และตัวควบคุมที่เป็นค่าลบ โดยดีเอ็นเอ ตรวจสอบได้ดำเนินการผ่านทดสอบ luciferase และวิเคราะห์อ่าน microplateหลังจากสร้างความเข้มข้นที่เหมาะของมก. () 2 ในปฏิกิริยาของเรา เราตรวจเพิ่มเติมความเข้มข้นที่เหมาะสมของดีเอ็นเอแม่แบบสำหรับนิพจน์ที่เพิ่มขึ้น อีกครั้ง pBESTlucTM ได้แสดงออกเพื่อให้การวิเคราะห์ผ่าน luciferase assay ในอ่าน microplate Triplicates สำหรับปฏิกิริยา 50 µl ไดรฟ์ข้อมูลถูกตั้งค่า ด้วยจำนวนตั้งแต่ 0.02 µg ถึง 0.1 µg เป็นตัวควบคุมเชิงลบ โดยดีเอ็นเอดีเอ็นเอ ทดสอบ luciferase ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในโพรโทคอล (รูปที่ 4 + 5)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเปลี่ยนแปลงของดีเอ็นเอเข้มข้น


รูปที่ 4: ผลของความเข้มข้นของดีเอ็นเอในการแสดงออกมือถือฟรี ผลการค้นหาที่ได้รับความเข้มข้น 0.02 ไมโครกรัม / ไมโครลิตร 0.04 ไมโครกรัม / ไมโครลิตร 0.06 ไมโครกรัม / ไมโครลิตร 0.08 ไมโครกรัม / ไมโครลิตร 0.1 ไมโครกรัม / ไมโครลิตรและการควบคุมเชิงลบโดยไม่ต้องตรวจดีเอ็นเอ การตรวจสอบได้ดำเนินการผ่านทาง luciferase ทดสอบและวิเคราะห์ในเครื่องอ่าน microplate ได้.
หลังจากการสร้างความเข้มข้นในอุดมคติของ mg (OAC) 2 ในปฏิกิริยาของเราเราสอบสวนต่อไปความเข้มข้นที่เหมาะสมของแม่แบบดีเอ็นเอสำหรับการแสดงออกเพิ่มขึ้น อีกครั้ง pBESTlucTM ถูกแสดงออกมาเพื่อช่วยให้การวิเคราะห์ผ่าน luciferase ทดสอบในผู้อ่าน microplate Triplicates สำหรับปฏิกิริยาของปริมาณ 50 ไมโครลิตรถูกตั้งขึ้นกับปริมาณของดีเอ็นเอตั้งแต่ 0.02 ไมโครกรัม 0.1 ไมโครกรัมเช่นเดียวกับการควบคุมเชิงลบโดยไม่ต้องตรวจดีเอ็นเอ ทดสอบ luciferase ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในโปรโตคอล (รูปที่ 4 + 5)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของดีเอ็นเอรูปที่ 4 : ผลของความเข้มข้นของการสังเคราะห์ดีเอ็นเอในการแสดงออก . ผลลัพธ์ที่ได้สำหรับความเข้มข้น 0.02 µกรัม / µ L , 0.04 µกรัม / µ 0.06 กรัม / ลิตร µµ L , 0.08 µกรัม / µ 0.1 กรัม / ลิตร µµ l และควบคุมลบ ไม่มีดีเอ็นเอ การตรวจสอบได้ดำเนินการผ่านทางเอนไซม์ลูซิเฟอเรส ( อ่านและวิเคราะห์ข้อมูลในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย .หลังจากสร้างความเข้มข้นในอุดมคติของมก. ( OAc ) 2 ในปฏิกิริยาของเราเรายังได้ศึกษาความเข้มข้นที่เหมาะสมของแม่แบบ DNA เพื่อเพิ่มการแสดงออก อีก pbestluctm แสดงออกเพื่อให้วิเคราะห์เอนไซม์ลูซิเฟอเรส ( อ่านผ่านในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย . ล้อมสำหรับปฏิกิริยาของ 50 µ L ปริมาณตั้งกับปริมาณของดีเอ็นเอตั้งแต่ 0.02 µ G µ 0.1 กรัม ตลอดจนควบคุมลบ ไม่มีดีเอ็นเอ เป็นเอนไซม์ลูซิเฟอเรส ( กำลังดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในโปรแกรม ( รูปที่ 4 + 5 )