2.6. UPLC-DAD analysis of polypheno

2.6. UPLC-DAD analysis of polyphenols

The method was adapted from Deusser, Guignard, Hoffmann, and Evers (2012). For the quantification of polyphenols, a Waters Acquity UPLC® system equipped with a photodiode array detector was used. For separation, an Acquity UPLC® HSS T3 column (1.8-μm particle size, 2.1 × 100 mm) with a flow rate of 0,75 mL/min at 50 °C was used. The eluents were 0.1% (v/v) formic acid in water (A) and 0.1% formic acid in acetonitrile (B) and the gradient was as follows: 0 min, 5% B; 9.27 min, 5% B; 13.53 min, 14% B; 22.60 min, 35% B; 23 min, 95% B; 25 min, 95% B; 26 min, 5% B. The injection volume was 10 μL. Polyphenols were detected at 254, 280, 300 or 320 nm according to their absorption maximum. For quantification, 7 point – linear calibration curves were prepared with external standards for each compound, with concentrations ranging from 0.01 to 50 mg/L. Samples with higher concentrations were appropriately diluted with water/methanol (90:10 v/v). The sum of polyphenols (UPLC) was detected as the sum of the 18 individual polyphenols (see Section 2.1).

2.7. Spectrophotometric analyses of total phenolics, flavonoids, and total anthocyanins

2.7.1. Determination of total phenolics

Total phenolic content was determined with Folin–Ciocalteu’s phenol reagent as described earlier (Bouayed et al., 2011), using a spectrophotometric analysis (DU800 UV/Visible spectrophotometer, Beckman Coulter, Palo Alto, CA). In short, 1 mL of sample (appropriately diluted phenolic extracts with 50% methanol) or standard was added to a 50 mL centrifuge tube containing 9 mL of water. One millilitre Folin–Ciocalteu’s phenol reagent was added and the mixture was shaken. After 5 min, 10 mL of 7% (w/v) Na2CO3 was added and the volume was immediately diluted to 25 mL with water and mixed thoroughly. After an incubation of 90 min at room temperature, the absorbance was determined at 750 nm vs. the prepared blank (1 mL 50% methanol instead of sample). The total phenolic content expressed as gallic acid equivalents (GAE) per 100 g fresh weight, was calculated using an external calibration curve (gallic acid, n = 6 concentrations between 0 and 100 mg/L).

2.7.2. Determination of total flavonoids

The quantification of total flavonoid content was evaluated with a colorimetric assay (Bouayed et al., 2011). In short, 1 mL of sample (appropriately diluted phenolic extracts) or standard was added to a 15 mL centrifuge tube containing 4 mL of water. At the onset of the experiment, 0.3 mL of 5% (w/v) NaNO2 was added and the mixture was shaken. After 5 min, 0.3 mL of 10% AlCl3 was added. At 6 min, 2 mL of 1 M NaOH was added and the volume was immediately diluted to 10 mL with water and mixed thoroughly. The absorbance vs. the prepared blank was read at 510 nm. The total flavonoid content expressed as catechin equivalents (CE) per 100 g fresh weight was calculated using an external calibration curve (catechin, n = 6 concentrations between 0 and 100 mg/L).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. พ่อ UPLC การวิเคราะห์โพลีฟีนวิธีการถูกดัดแปลงจาก Deusser, Guignard, Hoffmann และ Evers (2012) นับของโพลีฟีน ระบบน้ำ Acquity UPLC ®พร้อมจับเรย์ photodiode ที่ถูกใช้ สำหรับแยก มีใช้เป็นคอลัมน์ T3 Acquity UPLC ® HSS (1.8-μm ขนาดอนุภาค 2.1 × 100 มม.) กับอัตราการไหลของมล 0,75 นาทีที่ 50 ° C Eluents มีกรด 0.1% (v/v) ในน้ำ (A) และ 0.1% กรดใน acetonitrile (B) และการไล่ระดับสีได้ดังนี้: min 0, 5% B 9.27 นาที 5% B 13.53 min, 14% B 22.60 นาที 35% B 23 นาที 95% B 25 นาที 95% B 26 นาที 5% เกิด ปริมาณฉีดได้ 10 μL โพลีฟีนพบ 254, 280, 300 หรือ 320 nm ตามการดูดซึมสูงสุด การนับ 7 จุดเทียบเส้นโค้งได้พร้อมกับภายนอกในแต่ละสารประกอบ ความเข้มข้นตั้งแต่ 0.01 มิลลิกรัม 50/L. ตัวอย่างกับความเข้มข้นสูงได้อย่างเหมาะสมผสมกับน้ำ/เมทานอล (v 90:10 v) ผลรวมของโพลีฟีน (UPLC) พบเป็นผลรวมของโพลีละ 18 (ดูหัวข้อ 2.1)2.7. spectrophotometric วิเคราะห์รวม phenolics, flavonoids และ anthocyanins รวม2.7.1 การกำหนด phenolics รวมกำหนดเนื้อหารวมฟีนอกับ Folin-Ciocalteu ของรีเอเจนต์วางเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Bouayed et al., 2011), ใช้วิเคราะห์ spectrophotometric (DU800 UV/เห็น เครื่องทดสอบกรดด่าง Beckman Coulter ดัลลัส CA) ในระยะสั้น 1 มิลลิลิตรของตัวอย่าง (แตกออกอย่างฟีนอสารสกัด ด้วยเมทานอล 50%) หรือมาตรฐานเพิ่มเข้าไปหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยง 50 mL ประกอบด้วย 9 mL ของน้ำ รีเอเจนต์วาง millilitre หนึ่ง Folin-Ciocalteu ของเข้ามา และมีเขย่าส่วนผสม หลังจาก 5 นาที 10 mL 7% (w/v) Na2CO3 เข้ามา และเสียงทันทียกเว้นการ 25 mL น้ำ และผสมอย่างละเอียด หลังจากการฟักตัว 90 นาทีที่อุณหภูมิห้อง absorbance ที่ถูกกำหนดที่ 750 nm เทียบกับว่างเปล่าเตรียมไว้ (1 mL 50% เมทานอลแทนตัวอย่าง) เนื้อหาฟีนอรวมแสดงเป็นเทียบเท่ากรด gallic (GAE) ต่อน้ำหนักสด 100 กรัม ถูกคำนวณโดยใช้การปรับเทียบภายนอกโค้ง (กรด gallic, n =ความเข้มข้น 6 ระหว่าง 0 ถึง 100 mg/L)2.7.2 การกำหนดของ flavonoids รวมนับรวม flavonoid เนื้อหาถูกประเมิน ด้วยการวิเคราะห์เทียบเคียง (Bouayed et al., 2011) ในระยะสั้น 1 มิลลิลิตรของตัวอย่าง (สารสกัดจากฟีนอแตกออกอย่างเหมาะสม) หรือมาตรฐานเพิ่มเข้าไปหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยง 15 mL ประกอบด้วย 4 mL ของน้ำ เมื่อเริ่มทดลอง 0.3 มล.ของ 5% (w/v) NaNO2 เข้ามา และมีเขย่าส่วนผสม หลังจาก 5 นาที 0.3 mL 10% AlCl3 ถูกเพิ่ม ที่ 6 นาที 2 mL 1 M NaOH เข้ามา และเสียงทันทียกเว้นไป 10 mL กับน้ำ และผสมอย่างละเอียด Absorbance เทียบกับว่างเปล่าเตรียมถูกอ่านที่ 510 nm มีคำนวณรวม flavonoid เนื้อหาแสดงเป็นเทียบเท่าสารสกัดจาก (CE) ต่อน้ำหนักสด 100 กรัมโดยใช้การปรับเทียบภายนอกโค้ง (สารสกัดจาก n =ความเข้มข้น 6 ระหว่าง 0 ถึง 100 mg/L)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 การวิเคราะห์ UPLC-DAD ของโพลีฟีนวิธีการที่ได้รับการดัดแปลงมาจากDeusser, Guignard, ฮอฟและ Evers (2012) สำหรับปริมาณของโพลีฟีนซึ่งเป็นระบบน้ำ Acquity UPLC®การติดตั้งเครื่องตรวจจับอาร์เรย์โฟโตไดโอดถูกนำมาใช้ สำหรับการแยกคอลัมน์ Acquity UPLC® T3 ไฮสปีด (1.8 ไมครอนอนุภาคขนาด 2.1 × 100 มิลลิเมตร) ที่มีอัตราการไหลของ 0,75 มิลลิลิตร / นาทีที่ 50 องศาเซลเซียสถูกนำมาใช้ ตัวชะมี 0.1% (v / v) กรดในน้ำ (A) และ 0.1% กรดใน acetonitrile (B) และการไล่ระดับสีได้ดังต่อไปนี้: 0 นาที, 5% B; 9.27 นาที, 5% B; 13.53 นาที, 14% B; 22.60 นาที, 35% B; 23 นาที, 95% B; 25 นาที, 95% B; 26 นาที, 5% B. ปริมาณการฉีดเป็น 10 ไมโครลิตร โพลีฟีนที่ตรวจพบที่ 254, 280, 300 หรือ 320 นาโนเมตรตามการดูดซึมสูงสุดของพวกเขา สำหรับปริมาณ 7 จุด - เส้นโค้งการสอบเทียบเชิงเส้นได้จัดทำขึ้นตามมาตรฐานภายนอกสำหรับแต่ละสารประกอบที่มีความเข้มข้นตั้งแต่ 0.01-50 มิลลิกรัม / ลิตร ตัวอย่างที่มีความเข้มข้นสูงได้รับการปรับลดอย่างเหมาะสมกับน้ำ / เมทานอล (90:10 v / v) ผลรวมของโพลีฟีน (UPLC) ถูกตรวจพบว่าเป็นผลรวมของแต่ละโพลีฟีน 18 (ดูมาตรา 2.1). 2.7 สเปกวิเคราะห์ฟีนอลรวม flavonoids และ anthocyanins รวม2.7.1 ความมุ่งมั่นของฟีนอลรวมรวมเนื้อหาฟีนอลถูกกำหนดด้วยสารฟีนอล Folin-Ciocalteu เป็นอธิบายไว้ก่อนหน้า (Bouayed et al., 2011) โดยใช้การวิเคราะห์สเปก (DU800 UV / spectrophotometer ที่มองเห็นได้ Beckman Coulter, พาโลอัลโต) ในระยะสั้น 1 มิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่าง (ปรับลดอย่างเหมาะสมฟีนอลสารสกัดด้วยเมทานอล 50%) หรือมาตรฐานถูกบันทึกอยู่ในหลอด centrifuge 50 มลมี 9 มิลลิลิตรน้ำ หนึ่งมิลลิลิตร Folin-Ciocalteu ของสารฟีนอลถูกบันทึกและส่วนผสมที่ถูกเขย่า หลังจาก 5 นาที, 10 มิลลิลิตร 7% (w / v) Na2CO3 ถูกบันทึกและปริมาณที่ถูกปรับลดทันที 25 มิลลิลิตรด้วยน้ำและผสม หลังจากการบ่ม 90 นาทีที่อุณหภูมิห้องให้การดูดกลืนแสงที่ถูกกำหนดที่ 750 นาโนเมตรเทียบกับเตรียมที่ว่างเปล่า (1 มิลลิลิตรเมทานอล 50% ของกลุ่มตัวอย่างแทน) เนื้อหาฟีนอลรวมแสดงเป็นรายการเทียบเท่ากรดฝรั่งเศส (GAE) ต่อ 100 กรัมน้ำหนักสดได้รับการคำนวณโดยใช้เส้นโค้งการสอบเทียบภายนอก (ฝรั่งเศสกรด, n = 6 ความเข้มข้นระหว่าง 0 และ 100 มก. / ลิตร). 2.7.2 ความมุ่งมั่นของ flavonoids รวมปริมาณของเนื้อหารวมflavonoid ถูกประเมินด้วยการทดสอบสี (Bouayed et al., 2011) ในระยะสั้น 1 มิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่าง (ปรับลดอย่างเหมาะสมสารสกัดฟีนอล) หรือมาตรฐานถูกบันทึกอยู่ในหลอด centrifuge 15 มิลลิลิตรมี 4 มิลลิลิตรน้ำ ที่เริ่มมีอาการของการทดสอบ 0.3 มิลลิลิตร 5% (w / v) NaNO2 ถูกบันทึกและส่วนผสมที่ถูกเขย่า หลังจาก 5 นาที, 0.3 มิลลิลิตร 10% AlCl3 ถูกเพิ่มเข้ามา 6 นาที, 2 มิลลิลิตร 1 M NaOH ถูกบันทึกและปริมาณที่ถูกปรับลดทันที 10 มิลลิลิตรด้วยน้ำและผสม การดูดกลืนแสงเทียบกับว่างเปล่าที่เตรียมไว้ได้อ่านที่ 510 นาโนเมตร เนื้อหารวม flavonoid แสดงเป็นรายการเทียบเท่า catechin (CE) ต่อ 100 กรัมน้ำหนักสดที่คำนวณโดยใช้เส้นโค้งการสอบเทียบภายนอก (catechin, n = 6 ความเข้มข้นระหว่าง 0 และ 100 มก. / ลิตร)